一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡样的制备方法及应用与流程

本申请涉及外泌体样纳米囊泡类生物制剂，具体涉及一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡样的制备方法及应用。

背景技术：

1、植物来源外泌体样纳米囊泡(plant exosome-like nanovesicles，elns)是一类起源于真核植物细胞的膜状囊泡，它们与哺乳动物来源的细胞外囊泡具有相似的形态、释放机制和内容物，由于植物的来源非常广泛，因此植物来源的外泌体样纳米囊泡具备大规模生产的潜力。同时，从药用植物中提取的elns往往富含多种生物活性成分，如脂质、蛋白质、rna和有效小分子等。

2、随着科学技术的不断发展，针对不同来源、不同提取目的的植物，正在开发植物来源外泌体样囊泡的提取分离技术。由于植物囊泡是天然的纳米制剂，已被证明在治疗结肠炎、抗肿瘤、抗菌、肝脏疾病、美白和牙周炎等疾病中发挥重要作用，并且具有免疫调节特性。此外，elns具有良好的形态和特性，可以作为低毒性的纳米载体，实现外源药物分子的递送。

3、丹参作为一种著名的传统药用植物，有着悠久的历史，据研究报道，其具有抗炎、抗氧化、心脏保护、神经保护等多种生物学作用，血管内介入治疗、血管吻合术等操作术后往往会损伤血管内皮细胞和引发血管内皮细胞的氧化应激，进一步造成血管损伤，将丹参来源外泌体样纳米囊泡应用于损伤的血管内皮细胞或对引发血管内皮细胞的氧化应激，具有很高的应用前景。

技术实现思路

1、有鉴于此，本申请提供了一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡样的制备方法及应用，解决了现有技术中由于血管内介入治疗、血管吻合术等操作术后损伤血管内皮细胞和引发血管内皮细胞的氧化应激从而造成血管损伤的技术问题。

2、根据本申请的第一个方面，本申请提供了一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡在制备缓解血管内皮细胞氧化应激损伤药物中的应用。

3、在一实施例中，所述丹参来源的外泌体样纳米囊泡在制备缓解血管内皮细胞氧化应激损伤药物中的应用。

4、在一实施例中，所述丹参来源的外泌体样纳米囊泡抑制血管内皮细胞氧化应激损伤后人主动脉内皮细胞ros产生。

5、根据本申请的第二个方面，本申请提供了一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法，该制备方法包括如下步骤：丹参原液的制备，将丹参榨汁后过滤得到丹参原液；外泌体样纳米囊泡的制备，对过滤得到的丹参原液进行离心提取得到外泌体样纳米囊泡；外泌体样纳米囊泡的纯化，使用蔗糖密度梯度离心法对提取到的外泌体样纳米囊泡进行纯化。

6、在一实施例中，丹参原液的制备过程为：将丹参洗净去皮后与器械一起通过酒精消毒；将消毒后的丹参通过消毒后的器械切成小块；在切成小块的丹参中加入一定量pbs后榨汁，得到榨汁液；使用无菌纱布对榨汁液进行过滤，得到丹参原液。

7、在一实施例中，所述外泌体样纳米囊泡的制备过程为：将丹参原液取出移动至第一离心管内，在4℃环境下，800-1200×g离心10-15min，得到第一离心液；将第一离心液的上清液移至第二离心管内，在4℃环境下，2500-3500×g再次离心20-40min，得到第二离心液；将第二离心液的上清液移至第三离心管内，在4℃环境下，10,000×g再次离心20-40min，得到第三离心液；将第三离心液的上清液取出进行过滤得到过滤液；将过滤液移至第四离心管内，在4℃环境下，100,000×g超速离心70-90min，得到第四离心液；去除第四离心液的上清液进行重悬后，在4℃环境下，再次100,000×g超速离心70-90min得到第五离心液；去除第五离心液的上清液再次进行重悬，得到外泌体样纳米囊泡。

8、在一实施例中，所述外泌体样纳米囊泡的制备过程为：将丹参原液取出移动第一离心管中，800×g离心10min，得到第一离心液；将第一离心液的上清液移至第二离心管中，2500×g离心30min，得到第二离心液；将第二离心液的上清液移至第三离心管中，10000×g离心30min，得到第三离心液；将第三离心液的上清液取出经0.22um滤膜过滤得到过滤液；将过滤液移至第四离心管中，100,000×g超速离心80min，得到第四离心液；去除第四离心液的上清液进行重悬后，100，000×g再次超速离心80min得到第五离心液；去除第五离心液的上清液再次进行重悬，得到外泌体样纳米囊泡溶液。

9、在一实施例中，外泌体样纳米囊泡的纯化过程包括：用预冷的1×pbs将外泌体样纳米囊泡溶液的体积补至500μl，得到混合液；将混合液加到梯度蔗糖溶液离心80min；取出300μl位于蔗糖梯度交界处的溶液，再次离心80min，去除上清沉淀后进行重悬。

10、本申请提供了一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法及应用，涉及外泌体样纳米囊泡类生物制剂技术领域，将丹参来源的外泌体样纳米囊泡与人主动脉内皮细胞共同培养后，可以抑制血管内皮细胞氧化应激损伤后细胞内ros产生，外泌体样纳米囊泡作为天然的胞间信息载体，分子结构较小且生物相容性好；相对于普通药物，外泌体样纳米囊泡的生物利用度高且含有多种核酸物质，具有较好的应用前景。

技术特征：

1.一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡在制备缓解血管内皮细胞氧化应激损伤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡在制备缓解血管内皮细胞氧化应激损伤药物中的应用，其特征在于，所述丹参来源的外泌体样纳米囊泡在制备缓解血管内皮细胞氧化应激损伤药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡在制备缓解血管内皮细胞氧化应激损伤药物中的应用，其特征在于，所述丹参来源的外泌体样纳米囊泡抑制血管内皮细胞氧化应激损伤后人主动脉内皮细胞ros产生。

4.一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法，其特征在于，该丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法，其特征在于，其特征在于，丹参原液的制备过程为：将丹参洗净去皮后与器械一起通过酒精消毒；将消毒后的丹参通过消毒后的器械切成小块；在切成小块的丹参中加入一定量pbs后榨汁，得到榨汁液；使用无菌纱布对榨汁液进行过滤，得到丹参原液。

6.根据权利要求4所述的一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法，其特征在于，所述外泌体样纳米囊泡的制备过程为：

7.根据权利要求6所述的一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法，其特征在于，所述外泌体样纳米囊泡的制备过程为：

8.根据权利要求4所述的一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡的制备方法，其特征在于，外泌体样纳米囊泡的纯化过程包括：用预冷的1×pbs将外泌体样纳米囊泡溶液的体积补至500μl，得到混合液；将混合液加到梯度蔗糖溶液离心80min；取出300μl位于蔗糖梯度交界处的溶液，再次离心80min，去除上清沉淀后进行重悬。

技术总结本申请提供了一种丹参来源的外泌体样纳米囊泡样的制备方法及应用，涉及外泌体样纳米囊泡类生物制剂技术领域，将丹参来源的外泌体样纳米囊泡与人主动脉内皮细胞共同培养后，可以抑制血管内皮细胞氧化应激损伤后细胞内ROS产生和凋亡，并促进小鼠下肢缺血后骨骼肌的恢复。外泌体样纳米囊泡作为天然的胞间信息载体，分子结构较小且生物相容性好；相对于普通药物，外泌体样纳米囊泡的生物利用度高且含有多种核酸物质，具有较好的应用前景。技术研发人员：高文卿,刘大畅,胡晓旻,梁晓玉,常芸受保护的技术使用者：天津市第三中心医院技术研发日：技术公布日：2024/12/2