一种组织样本保存液及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生物技术，具体来说涉及一种组织样本保存液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、从人或者动物组织中获取原代细胞可用于后续的科研或者临床治疗。在肿瘤、脂肪、胎盘等组织样本离体后，往往不能立刻送到分离细胞的工作人员手中。甚至，有的组织需要从一个城市运输到另一个城市来进行细胞分离。因此，在储存和运输过程中，对于组织样本中细胞活力及干性的维持至关重要。

2、参考公开(公告)号：cn113383769b，公开(公告)日：2022-04-19，公开的一种细胞保存液及其制备方法与应用。所述细胞保存液包括醇、酸、缓冲盐、离子强度维持剂、抗氧化剂和蛋白水解酶；所述细胞保存液通过添加蛋白水解酶，可以较好地处理多粘液和血细胞的样本，提高薄层液基细胞学检测的染色效果；但是蛋白水解酶会影响还原兰组织细胞染色效果，通过添加抗氧化剂，降低了蛋白水解酶对还原兰组织细胞染色的影响，同时，提高了免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色的准确性和稳定性，并且，所述细胞保存液保存细胞样本后对hpv检测的准确性和稳定性无影响。即所述细胞保存液能同时满足薄层液基细胞学检测、hpv检测、免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色四种筛查方法。

3、在包括上述专利的现有技术中，市售的组织保存液会加入防冻液和一些营养或者激素类成分。防冻液是为了在低温保存或运输样本过程中防止冻伤细胞，但是防冻液会损伤细胞活力，而且低温保存或运输又会增加成本。并且营养成分或者激素类物质配方复杂，且成本昂贵。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种组织样本保存液及其制备方法和应用，克服了组织样本保护液含有的动物源血清、高浓度dmso、成分复杂的营养成分或者激素类物质等缺陷，经济有效，且不会引入外源污染。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种组织样本保存液，包括基础培养基，还包括通过脂多糖预刺激脐带间充质干细胞uc-msc制取的外泌体，其中：

4、每升所述基础培养基中含有所述脐带间充质干细胞uc-msc的含量为为106-107个。

5、作为优选的，所述基础培养基为dmem-f12。

6、作为优选的，还包括(以容积为单位)：0.5mg/ml的ultroser g、100单位/ml的抗生素、10mg/l的丙酮酸、4mg/ml的l-谷氨酰胺。

7、作为优选的，所述抗生素包括自青霉素、链霉素和两性霉素任一种或多种。

8、作为优选的，通过脂多糖预刺激的脐带间充质干细胞uc-msc外泌体中的所述脂多糖的浓度为4-8ng/ml。

9、作为优选的，所述脂多糖的浓度为5ng/ml。

10、一种组织样本保存液的制备方法，应用于上述所述的组织样本保存液，包括以下步骤：

11、s001、按比例获取基础培养基、丙酮酸、l-谷氨酰胺、抗生素和ultroser g；

12、s002、将丙酮酸、l-谷氨酰胺、抗生素和ultroser g溶解于基础培养基中；

13、s003、利用无菌的naoh溶液调节上述溶液的ph为7.0-7.5，然后经0.22μm过滤器过滤，获取过滤后的液体；

14、s004、用5ng/ml lps刺激106-107个uc-msc 24小时后，换成新的10ml的基础培养基，再过24小时后，收集上清，利用高速离心法获取外泌体；

15、s005、将外泌体加入过滤后的液体中，每升液体基础培养基中加入106-107个uc-msc获取的外泌体，完成制取。

16、一种组织样本保存液的应用，包括上述所述组织样本保存液，其应用于组织样本保存液在保存采集后到分离细胞前的胎盘组织样本中。

17、作为优选的，所述组织样本保存液应用于组织样本保存液在4-28℃保存采集后到分离细胞前的胎盘组织样本中。

18、在上述技术方案中，本发明提供的一种组织样本保存液及其制备方法和应用，具备以下有益效果：

19、1、df12基础培养基维持组织内外细胞的渗透平衡，维持ph值；ultroser g提供营养成分；间充质干细胞外泌体可抑制免疫，保护组织样本中干细胞活性，也可提供生长因子，维持组织中各种细胞的活力；青霉素，链霉素，两性霉素可防止细菌，霉菌等污染。

20、2、本发明组织样本保存液配比简单，成本低廉，使用方便，可以保持肿瘤、脂肪、脐带、胎盘等组织样本内干细胞的活性，大大减少了组织样本从采集到制备的时间限制。

21、3、与现有技术相比，本发明的组织保存液保存的组织在分离原代细胞时得率和活力更高。

技术特征：

1.一种组织样本保存液，包括基础培养基，其特征在于，还包括通过脂多糖预刺激脐带间充质干细胞uc-msc制取的外泌体，其中：

2.根据权利要求1所述的一种组织样本保存液，其特征在于，所述基础培养基为dmem-f12。

3.根据权利要求1所述的一种组织样本保存液，其特征在于，还包括(以容积为单位)：0.5mg/ml的ultroser g、100单位/ml的抗生素、10mg/l的丙酮酸、4mg/ml的l-谷氨酰胺。

4.根据权利要求3所述的一种组织样本保存液及其制备方法，其特征在于，所述抗生素包括自青霉素、链霉素和两性霉素任一种或多种。

5.根据权利要求1所述的一种组织样本保存液，其特征在于，通过脂多糖预刺激的脐带间充质干细胞uc-msc外泌体中的所述脂多糖的浓度为4-8ng/ml。

6.根据权利要求5所述的一种组织样本保存液，其特征在于，所述脂多糖的浓度为5ng/ml。

7.一种组织样本保存液的制备方法，应用于权利要求1-6任一项所述的组织样本保存液，其特征在于，包括以下步骤：

8.一种组织样本保存液的应用，包括权利要求1-6任一项所述组织样本保存液，其特征在于，所述组织样本保存液应用于组织样本保存液在保存采集后到分离细胞前的胎盘组织样本中。

9.根据权利要求8所述的一种组织样本保存液的应用，其特征在于，所述组织样本保存液应用于组织样本保存液在4-28℃保存采集后到分离细胞前的胎盘组织样本中。

技术总结本发明公开了一种组织样本保存液及其制备方法和应用，涉及生物技术技术领域，所述组织样本保存液包括基础培养基，还包括通过脂多糖预刺激脐带间充质干细胞UC‑MSC制取的外泌体，其中：每升所述基础培养基中含有所述脐带间充质干细胞UC‑MSC的含量为为10<supgt;6</supgt;‑10<supgt;7</supgt;个。该发明组织样本保存液配比简单，成本低廉，使用方便，可以保持胎盘等组织样本内干细胞的活性，大大减少了组织样本从采集到制备的时间限制。技术研发人员：赵光锋,李明扬,王洋洋,李春慧受保护的技术使用者：南京生航生物技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/12/2