一种具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法

本发明属于医药，具体涉及一种具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法。

背景技术：

1、纳米粒子的构建与应用在生物医学中发展迅速，已覆盖如药物递送、骨和组织工程、细胞粘附、抗菌应用、生物分子的识别与固定、分子印迹技术及催化剂载体等多个领域。近年来，纳米粒子凭借自身的优异性质在癌症治疗中展示出了巨大的优势。

2、聚多巴胺（polydopamine, pda）作为一种广泛使用的光热剂，具有光热转换效率高、制备简单、载药能力优异和细胞生物毒性低等优点。然而，具有单一治疗功能的pda纳米颗粒不仅无法确认其在体内及肿瘤部位的分布情况，也无法达到将肿瘤细胞完全消灭的效果。因此，pda经常与其他显像剂和治疗剂相结合，最大程度地杀死肿瘤细胞并提供更全面的肿瘤信息。

3、安全有效的化学动力学治疗（chemodynamic therapy, cdt）作为近年来广为应用的肿瘤原位治疗策略，在肿瘤细胞微环境中，通过产生过量的以羟基自由基为代表的活性氧来诱导肿瘤细胞的死亡。最具代表性的应为基于fe基纳米材料的芬顿反应来实现cdt。但是，fe2+催化的芬顿反应仅在强酸环境（ph 2-4）中有效，即使在理想的ph值下反应速率也较低，在生理中性条件下和微酸性的肿瘤微环境中，其反应速率与治疗效率更低。相反地，cu+在微酸性介质中的类芬顿反应效率很高，最大反应速率高出fe2+160倍左右，足以证明在微酸性的肿瘤微环境中cu+产活性氧所致cdt的效果更好。在cdt的实践中，其疗效与安全性是最高优先级的。肿瘤微环境特有的弱酸性ph中虽然会存在着过量的h2o2为cdt提供原材料，但gsh的浓度也远高于正常细胞，消耗了大量用于cdt的•oh，进而影响了cdt的效率，所以消耗甚至耗竭gsh是增强cdt的有效策略。既往研究与应用实践均表明，单一cdt疗法无法彻底消除肿瘤细胞，而且很难防止癌细胞的进一步转移。因此，迫切研发基于高效cdt的多模式协同纳米颗粒用于肿瘤的治疗。

4、二氢卟吩e6（chlorin e6, ce6）是一种被广泛应用于光动力治疗和活体荧光成像的光敏剂，具有较低的细胞毒性和良好的深层组织渗透性，在650 nm波长的激光照射下，聚集在肿瘤附近等靶点位置的ce6可以被激活诱导ros的产生，从而促进了细胞的凋亡。但其自身的疏水性和肿瘤微环境的乏氧情况都会严重影响其疗效。

5、随着纳米粒子的使用增多，其在体内应用的安全性及长期循环毒性也受到了重视，如何在保证纳米粒子原有功能基础上构建出安全可靠的体系值得研究者们进一步探究。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，通过精准调控投料比例成功合成了中空介孔聚多巴胺纳米粒子，其作为载体极大地增加了药物负载效率，较大的比表面积和丰富的活性基团为后续对其进行修饰奠定了坚实基础，以解决上述背景技术中所存在的问题。

2、为实现上述目的，本申请是通过以下技术方案实现的：

3、一种具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，采用以下步骤：

4、s1、mpda nps的制备：

5、将tris粉末溶于去离子水中得到tris溶液，将去离子水与无水乙醇混合得到混合液，然后将f127、tmb、tris溶液及盐酸多巴胺依次加入上述混合液中，在磁力搅拌器中搅拌24-60 h后离心过滤，过滤物使用洗涤液洗涤，得到mpda nps，将mpda nps分散至去离子水中得到mpda nps溶液，保存于4 ℃冰箱中；

6、s2、cp nps的制备：

7、将cucl2•2h2o溶液与步骤s1得到的mpda nps溶液混合均匀后加入到tris-hcl溶液与无水乙醇的混合溶液中，在磁力搅拌器中搅拌2-4 h后离心过滤，过滤物用洗涤液洗涤，得到cp nps，将cp nps分散至无水乙醇中得到cp nps溶液；

8、s3、cpc nps的制备：

9、将步骤s2制备的cp nps溶液与ce6溶液混合均匀，在乙醇溶液中搅拌10-15 h后离心过滤，过滤物使用洗涤液洗涤，得到cpc nps，将cpc nps分散至无水乙醇中，得到cpc nps溶液，密封避光保存于4 ℃冰箱中；

10、s4、cpcf nps的制备：

11、将步骤s3制备的cpc nps溶液与f127溶液混合均匀，在乙醇溶液中搅拌10-15 h后离心过滤，过滤物使用洗涤液洗涤，得到cpcf nps。

12、进一步的，步骤s1至s4中使用的洗涤液分别是：去离子水、去离子水、无水乙醇、由乙醇与丙酮按2：1的体积比混合得到的洗涤液。

13、进一步的，步骤s1至s4的离心过滤均采用8000 rpm，离心处理15 min。

14、进一步的，步骤s1至s4中的洗涤液洗涤的步骤均为，将过滤物分散到洗涤液中，超声30 min，再以8000 rpm离心15 min。

15、进一步的，步骤s1中，f127与tmb的质量比为10：1-1：10。

16、进一步的，步骤s2中，cucl2•2h2o与mpda nps的质量比为5：1-1：5。

17、进一步的，步骤s3中，ce6与cp nps的质量比为10：3-3：10。

18、进一步的，步骤s4中，f127与cpc nps的质量比为3：1-5：2。

19、本发明的有益效果是：

20、本技术方案通过精准控制反应条件与巧妙设计成功合成了多功能纳米粒子cpcfnps，在特有氧化还原环境中铜离子以不同价态精准地填补和修饰了mpda nps的中空和介孔结构，赋予了cpcf nps过氧化氢酶，过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物酶的多酶活性，使其有了出色的肿瘤微环境（h2o2和gsh）响应性，cpcf nps结构的特异性也增加了其对ph的灵敏响应性，在不同ph（体内不同部位）的分级解体状态有助于实现肿瘤区域的富集和可控性释放，提高药物利用率的同时也减少了循环代谢产生的毒副作用。

技术特征：

1.一种具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，采用以下步骤：

2.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s1至s4中使用的洗涤液分别是：去离子水、去离子水、无水乙醇、由乙醇与丙酮按2：1的体积比混合得到的洗涤液。

3.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s1至s4的离心过滤均采用8000 rpm，离心处理15 min。

4.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s1至s4中的洗涤液洗涤的步骤均为，将过滤物分散到洗涤液中，超声30 min，再以8000 rpm离心15 min。

5.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s1中，f127与tmb的质量比为10：1-1：10。

6.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s2中，cucl2•2h2o与mpda nps的质量比为5：1-1：5。

7.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s3中，ce6与cp nps的质量比为10：3-3：10。

8.根据权利要求1所述的具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s4中，f127与cpc nps的质量比为3：1-5：2。

技术总结本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有多重治疗功能的纳米粒子的制备方法，使用F127、TMB、CuCl<subgt;2</subgt;•2H<subgt;2</subgt;O及Ce6为原料，依次通过MPDA NPs的制备工序、CP NPs的制备工序、CPC NPs的制备工序及CPCF NPs的制备工序，合成了多功能纳米粒子CPCF NPs，其作为载体极大地增加了药物负载效率。CPCF NPs在肿瘤微环境与外源激光的刺激下，表现出了优异的刺激响应性，多模式协同治疗有效地抑制了肿瘤生长，该纳米粒子的合成构建策略为后续相关纳米粒子的开发提供了宝贵的指导意见，也为温和且安全高效的肿瘤纳米治疗模式提供了新的选择。技术研发人员：孟宪瑛,陈渤文,王振新,魏佳,孙天盟,庞博,张宇宁,王瑶琪,杨帅,逄仁柱受保护的技术使用者：吉林大学第一医院技术研发日：技术公布日：2024/12/2