脂质体药物的体外释放测试方法和含量分析方法与流程

本发明涉及到脂质体药物测试，具体而言，涉及到一种脂质体药物的体外释放测试方法和含量分析方法。

背景技术：

1、在药物研发和制剂过程中，脂质体具有优良的生物相容性和靶向性，能够改善药物的溶解性、稳定性和生物利用度。脂质体药物的体外释放多采用透析的方法。若药物为水溶性，则从脂质体中释放后可透过透析管（袋），脂质体由于尺寸较大无法透过透析管（袋），从而达到分离游离药物分子的目的，由此可分析特定时间所释放的药物量。若药物在水溶液中溶解性很差，则需要在溶出介质中添加增溶剂溶解从脂质体中释放的药物分子，溶解后的药物分子才可能从透析管（袋）中释放出来。

2、然而，现有的脂质体药物的体外释放方法释放率较差，主要是通过改变溶出装置来提高释放率，例如公开文本cn201510600365.2，公开了一种脂质体药物体外释放的测试方法，通过将脂质体药物溶液与空气共同装入容器，并利用容器的震荡或旋转等运动模拟体内血液循环对药物的动力作用，使得体系中的空气在运动中分散形成气泡，与脂质体发生物理碰撞，从而破坏脂膜，达到药物的有效释放。由上述现有技术可以看出，虽然在一定程度上可以提高脂质体药物的释放率，但是震荡或旋转的方式无法模拟体内复杂的血液循环环境，且对脂质体的破坏程度难以控制，可能导致药物释放过快或不均匀，从而影响药物的释放行为，导致在体外释放测试中所获得的数据难以反映实际临床应用中药物的释放情况。

技术实现思路

1、本发明的主要目的为提供一种脂质体药物的体外释放测试方法，旨在克服现有的脂质体药物的体外释放方法释放率较差的技术问题。

2、为了实现上述发明问题，本发明提出一种脂质体药物的体外释放测试方法，包括：

3、将缓冲剂和表面活性剂在溶出杯中进行混合，得到混合溶液，加入调节剂至所述混合溶液中，得到溶出介质；

4、将脂质体粉末加入水溶解后，加入所述溶出介质进行稀释，得到样品溶液；

5、将所述溶出杯置入溶出仪中在预设温度下进行加热，将透析管通过转接头连接至所述溶出仪；

6、将所述样品溶液中加入所述透析管内，使所述样品溶液和所述溶出介质进行混合，并在特定时间点采取药物样品，测定所述脂质体药物中的未释放药物浓度或已释放的药物浓度，计算脂质体药物的释放速率。

7、进一步地，所述预设温度为36℃~38℃，所述采取药物样品体积为0.5ml~1ml。

8、进一步地，所述缓冲剂为9 mm~10 mm的羟乙基哌嗪乙磺酸，所述表面活性剂0.7%~0.8%脱氧胆酸钠，所述调节剂为氢氧化钠溶液，以调节所述溶出介质的ph值至7.4~7.6。

9、进一步地，所述将脂质体粉末加入水溶解后，加入所述溶出介质进行稀释，得到样品溶液的步骤，包括：

10、将150g~160g的脂质体粉末加入3ml~5ml的去离子水中，剧烈振摇直至完全溶解；

11、将溶出介质加入过滤后的脂质体溶液中，手动摇晃使混合，直至所述脂质体溶液与所述溶出介质的混合溶液达到20ml。

12、进一步地，所述将透析管通过转轴连接至所述溶出仪的步骤之前，还包括：

13、将所述透析管放入15%~25%的乙醇水溶液进行浸泡，所述乙醇水溶液的温度为20℃~30℃，浸泡时间为50分钟~60分钟；

14、将浸泡后的所述透析管用水进行清洗，将清洗后的所述透析管放入所述溶出介质中进行浸泡，浸泡时间为115分钟~125分钟。

15、进一步地，所述将所述样品溶液中加入至所述透析管内，使所述样品溶液和所述溶出介质进行混合的步骤，包括：

16、将所述透析管的底部和所述溶出杯的底部相隔预设距离设置，所述预设距离为2.5cm~3.5cm；

17、设置所述溶出仪中的转轴速度为90rpm~110rpm，启动所述溶出仪，使所述透析管在所述溶出杯中旋转，使所述溶出杯中的所述溶出介质通过所述透析管中的透析膜扩散进入透析管中与所述样品溶液进行混合。

18、进一步地，所述在特定时间点药物样品的步骤，包括：

19、从所述溶出杯中取出一定体积的所述溶出介质和样品溶液的混合体作为药物样品，所述特定时间点包括但不限于：1小时、2小时、8小时、12小时、 16小时、20小时、24小时、28小时、32小时、36小时、40小时、44小时。

20、进一步地，所述脂质体药物为脂质体两性霉素b。

21、本技术还公开了一种脂质体药物的含量分析方法，用于分析上述任一项所述的药物样品，包括：

22、将0.9ml~1.1ml的所述样品溶液放入90ml~110ml的所述溶出介质中进行混合，得到测定溶液；

23、将所述药物样品注入高效液相色谱仪中进行色谱分析，得到药物样品的色谱图谱，其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件包括但不限于：流动相由流动相a和流动相b组成，所述流动相的流速为1.2 ml/min~1.3ml/min，所述流动相a为柠檬酸缓冲液 (4.2g/l,用浓氨水调节至ph 4.7）与甲醇的混合液，体积比为 9:1，所述流动相 b为乙腈和甲醇的混合液，体积比为 9:1；色谱柱为c18柱，柱温设定为30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为383 nm；进样体积为10µl~20µl，分析时间为10分钟~20分钟；

24、将所述色谱图谱的面积与所述测定溶液的峰面积对比，得到所述药物样品中脂质体药物的浓度。

25、进一步地，将所述色谱图谱的面积与所述测定溶液的峰面积对比，得到所述药物样品中脂质体药物的浓度的步骤，包括：

26、将所述测定溶液注入高效液相色谱仪中进行色谱分析，得到所述测定溶液的参照色谱图谱；

27、将所述参照色谱图谱的峰面积与所述药物样品的色谱图谱的峰面积进行计算，得到所述参照色谱图谱与所述色谱图谱之间的比例关系；

28、根据所述比例关系通过标准曲线法计算，得到所述药物样品中脂质体药物的实际浓度。

29、有益效果：

30、本技术提出的脂质体药物的体外释放测试方法，通过在溶出介质中添加特定的表面活性剂，提高脂质体药物的释放效率，表面活性剂能够降低脂质体膜的表面张力，从而促进药物分子从脂质体中释放出来，通过调节溶出介质的ph值，使溶出介质更接近实际的体内情况。将脂质体药物粉末与水混合溶解，形成均匀的脂质体溶液，将溶液加入含有缓冲剂和表面活性剂的溶出介质中进行稀释，以模拟药物在体内环境下的释放条件，以更准确地反映脂质体药物在生物体内的释放行为。进一步地，将透析管置于溶出仪中，并在设定的温度下进行加热，以模拟人体的正常体温，透析管内装有样品溶液，而溶出介质则填充在溶出仪的外部，通过透析管的半透膜，样品溶液中的脂质体药物可以逐渐释放到外部的溶出介质中。在特定的时间点，通过透析管外的溶出介质取样进行分析，评估脂质体药物的释放特性。本技术能够更准确地模拟脂质体药物在生物体内的释放过程，大幅地提高了脂质体药物的体外释放方法释放率。