红法夫酵母与枯草芽孢杆菌协同发酵家禽配合饲料的方法及应用

本发明涉及微生物发酵工程，具体涉及一种红法夫酵母与枯草芽孢杆菌协同发酵家禽配合饲料的方法及应用。

背景技术：

1、2019年7月农业农村部发布了第194号公告，促生长药物饲料添加剂在2020年7月1日后全部退出。饲料端“禁抗”，养殖端“减抗、限抗”，产品端“无抗”已成为饲料与养殖业发展的必然趋势。虾青素在禽畜业中，作为蛋禽和家畜的饲料添加剂, 是我国《饲料添加剂品种目录（2013）》中被允许使用的安全菌种。

2、然而，现有虾青素饲料主要是通过在饲料中添加虾青素来饲喂家禽以提高家禽养殖效率。这种方式存在如下缺陷：

3、一是由于家禽自身酶系不全， 酶量不足且现在使用的虾青素配合饲料通常以玉米、糠麸、饼粕、 作物秸秆等不能消化吸收的植物性原料为主，导致其对现有饲粮中粗蛋白质和能量利用率较低。此外，沙门氏菌和大肠杆菌等致病菌还会影响家禽机体肠道微环境，破坏肠道结构完整性，降低其生产性能和产品品质。

4、二是天然虾青素获取困难，提取工艺繁琐，生产成本较高，而且提取加工过程中可能存在污染物的残留、浓缩等问题。

5、我国天然虾青素的生产目前还处于初级阶段，大量工作目前主要集中在实验室研究水平，如果购买，国内天然虾青素粉的市场价格为7900 元/千克，成本较高。而如果用微生物制备，工艺较繁琐。以红法夫酵母为例，一般需先对红法夫酵母进行液体发酵，然后再进行虾青素的提取，如中国专利cn103820520a “一种高产天然虾青素的发酵方法”，中国专利cn102864087 a“一株高产天然虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法和应用”以及中国专利cn106701880 a“提高红法夫酵母菌株高产虾青素的方法”，其工艺流程均包括红法夫酵母菌体活化、接种、发酵、离心收集菌体、烘干、破壁处理、浸提、浓缩、分析提取虾青素等。

6、三是虾青素为人工添加，整个工艺过程不但复杂，而且还会导致饲料味道欠佳，从而影响摄食量和虾青素的摄入量，导致家禽以及生产的蛋中虾青素含量不高。

7、如中国专利cn109258966a公开了“一种提高鸡蛋天然虾青素含量的方法”，其饲料由基础饲料和混有天然虾青素的预混料组成，饲料制备过程即为将基础饲料与预混料通过人工或机械搅拌混合均匀。这种简单混合的方式，虾青素容易分解，最终不能被有效摄入。中国专利cn115606707a公开了“一种富含天然虾青素的家禽饲料及其制备方法”，其对饲料的制备方法进行了改进，提高了饲料中虾青素的保存时间，促进了家禽对虾青素的摄食量等，但整个工艺过程相对复杂，同时为改善适口性还需添加诱食剂。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决上述问题而提供一种红法夫酵母与枯草芽孢杆菌协同发酵家禽配合饲料的方法与应用。

2、本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

3、一种利用红法夫酵母固态发酵生产天然虾青素家禽配合饲料的方法，其特征在于，包括以下步骤：

4、（1）红法夫酵母菌斜面培养：将红法夫酵母菌株接种于斜面培养基上培养；

5、（2）红法夫酵母菌种子培养：将步骤（1）获得的斜面菌种接种到种子培养基中培养；

6、（3）枯草芽孢杆菌斜面培养：将枯草芽孢杆菌菌株接种于斜面培养基上培养；

7、（4）枯草芽孢杆菌种子培养：将步骤（3）获得的斜面菌种接种到种子培养基中培养；

8、（5）协同固态发酵培养：将步骤(2)和步骤(4)培养好的种子液按1：(1-10)的配比接种到发酵基料中，在发酵初始ph为6.2-6.6，20-26℃条件下培养6-12天。

9、进一步地，所述红法夫酵母斜面培养基为pda培养基，以1l计含有以下组分：6g 马铃薯浸出粉，20g 葡萄糖，20g 琼脂。

10、进一步地，所述红法夫酵母斜面培养的培养条件为在22-26℃条件下培养3-4天。

11、进一步地，所述枯草芽孢杆菌斜面培养基为na培养基，以1l计含有以下组分：3.0g牛肉膏，10.0g 蛋白胨，5.0g nacl，20.0g 琼脂，ph 7.2-7.4。

12、进一步地，所述枯草芽孢杆菌斜面培养条件为在28-30℃培养2-3天。

13、进一步地，所述红法夫酵母种子培养基为ym培养基，以1l计含有以下组分：10.0 g葡萄糖，5.0g 蛋白胨，3.0g 酵母膏，3.0g 麦芽浸提物。

14、进一步地，所述红法夫酵母种子培养的培养条件为在恒温振荡器中于180-200 r/min、22-26℃条件下培养3-4天。

15、进一步地，所述枯草芽孢杆菌种子培养基为nb培养基，以1l计含有以下组分：3.0g牛肉膏，10.0g 蛋白胨，5.0g nacl，ph 7.2-7.4。

16、进一步地，所述枯草芽孢杆菌种子培养的条件为在恒温振荡器中于180-200 r/min，28-30℃条件下培养2-3天。

17、进一步地，所述发酵基料按质量百分比由以下的组分构成：玉米粉60%，豆粕25%，麸皮15%，其中，玉米粉、豆粕和麸皮中均含水，水的含量为发酵基料总质量的35%-45%。

18、优选地，所述红法夫酵母种子液和枯草芽孢杆菌种子液以1：5的配比接种到含水量为40%的发酵基料中，在ph为6.5，24℃条件下培养12天。

19、进一步地，上述方法中，所述红法夫酵母为红法夫酵母（ phaffia rhodozyma）p406。所述红法夫酵母p406，保藏编号为gdmcc no.63339，已于2023年4月保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

20、进一步地，上述方法中，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（ bacillus subtilis）b24。所述枯草芽孢杆菌b24，保藏编号为gdmcc no.63457，已于2023年5月保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

21、本发明还提供按照上述方法生产的家禽配合饲料的应用，将发酵饲料与普通饲料混合可得到生物饲料。其中，当生物饲料用于育蛋鸡时，发酵饲料占生物饲料的10%-30%，优选30%，每天喂食2次。

22、优选地，所述普通饲料成分为：玉米60%，豆粕22%，麦麸8%，石粉 8%，磷酸氢钙1%，预混料（提供无机盐及维生素）1%。

23、本发明的有益效果如下：

24、本发明提供了一种红法夫酵母与枯草芽孢杆菌协同发酵家禽配合饲料的方法，采用虾青素生产菌株红法夫酵母与枯草芽孢杆菌功能菌株为发酵菌株，对家禽配合饲料基础料进行固态发酵，两菌株协同作用，互为增效，充分发挥两菌株产物和代谢优势。

25、红法夫酵母发酵的配合饲料直接含有天然虾青素，枯草芽孢杆菌可以产生更多的消化酶、有机酸以及抗菌蛋白、脂肽等物质来抑制肠道内的致病微生物，使机体处于无炎症的健康状态，促使饲料中虾青素对机体产生更大的作用，提高机体的抗氧化性能、鸡蛋新鲜度以及蛋黄色度。并且两者协同增效，所得发酵饲料虾青素、酸溶蛋白等营养价值更高，色泽均一，呈淡红色，具有酸香味，动物适口性好，能够产生更多的活性物质和有益活性菌，既能提高饲料的消化吸收率和降解抗营养因子，还能拮抗肠道有害病原菌生长，增强动物的抗病能力，实现蛋鸡的全程无抗养殖，并提高蛋品品质。