一种基于发酵厚朴制备增强免疫细胞能力的功能食品的方法

本发明属于保健功能食品领域，具体涉及一种基于发酵厚朴制备增强免疫细胞能力的功能食品的方法。

背景技术：

0、技术背景

1、羊肚菌（学名：morchellaesculenta(l.) pers.）属羊肚菌科、羊肚菌属真菌，菌盖近球形、卵形至椭圆形，高可达10厘米，顶端钝圆，表面有似羊肚状的凹坑。羊肚菌在全世界都有分布，是食药兼用菌，其富含多种营养物质，除蛋白质、氨基酸、维生素、脂肪酸以外，还含有大量的多糖、微量元素、膳食纤维、矿物质元素等。羊肚菌具有多种保健功能，可以提高人体免疫力，消炎，杀菌，抗病毒，抑制肿瘤生长，降血脂等，同时还可以减轻癌症患者化疗副作用，预防动脉粥样硬化等，老少皆宜。

2、现代研究发现，厚朴中存在挥发油类、生物碱类、木脂素类等多种类型的化学成分，其主要有效成分具有抗肿瘤、抗炎、调节肠胃、保护肝脏等药理作用。然而，厚朴作为一味传统中药，入方剂多以水煎为主，近几年来对厚朴水溶性成分的相关研究逐渐兴起，新的苷类、生物碱类等成分被发现。

3、参与免疫应答或与之相关的细胞统称为免疫细胞。主要包括淋巴细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞、粒细胞等。它们是机体免疫系统极其重要的组成部分，防御病原体入侵，筑起免疫防线，清除异物，修复损伤组织等，从基本上保证人体健康。现有技术中，尚未有利用厚朴的发酵产物制备相关功能食品的记载。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的市场空白，本发明提供了一种基于发酵厚朴制备增强免疫细胞能力的功能食品的方法，该方法利用羊肚菌发酵厚朴制备相应的提取物，所使用的羊肚菌发酵厚朴提取物浓度为20-40μm时，能有效促进免疫细胞（niavetcells）的增殖和分化为cd4+t细胞；所述羊肚菌发酵厚朴提取物浓度为20-40μm时，能够促进免疫细胞因子ifn-γ的释放。

2、本发明为了实现上述目的所采取的技术方案为：

3、本发明提供了一种基于发酵厚朴制备增强免疫细胞能力的功能食品的方法，包括以下步骤：

4、（1）取羊肚菌菌株，挑取菌丝接种在pda培养基中，恒温倒置培养，从来获得活化后的羊肚菌；

5、（2）将厚朴粉加入含有荸荠粉的pda培养基中，边加入边搅拌，搅拌均匀，直至干粉既达到不成团也不松散，且紧握成团状而松开时分散的状态，即为厚朴培养基，密封,后进行高压蒸汽灭菌；

6、（3）选取羊肚菌接入到厚朴培养基的底部，搅拌均匀，然后加入酿酒酵母，封口膜密封后，进行发酵培养，随后烘干至恒重，得到烘干的发酵物；

7、（4）取烘干的发酵物用梯度乙醇浸泡，合并浸泡液，离心机进行离心，取上清液放入旋转蒸发仪中进行旋蒸，旋蒸后在冷冻干燥机上进行冷冻干燥，再进行研磨，得到粉末状羊肚菌发酵厚朴提取物作为发酵食物主要原料。

8、进一步的，步骤（1）中，所述菌丝在pda培养基中的接种量为5%；所述恒温倒置培养为在20℃温度下培养3d。

9、进一步的，步骤（2）中，所述含有荸荠粉的pda培养基的配方为：马铃薯200g，荸荠粉45g，葡萄糖20g，琼脂20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁15g，水1000ml， ph自然。

10、本发明所使用的荸荠粉通过以下步骤制备而成：将清洗干净的新鲜荸荠直接打浆，然后滴入适量醋酸，搅拌均匀后，加入碳酸氢钙，搅拌一段时间后，冷冻干燥，研磨成粉即可。

11、上述醋酸的加入量占荸荠重量的5%；所述碳酸氢钙的加入量占荸荠重量的3%。

12、进一步的，步骤（2）中，所述厚朴粉和含有荸荠粉的pda培养基的质量比为1:10。

13、进一步的，步骤（3）中，所述羊肚菌的接入量为10%；所述酿酒酵母的加入量占厚朴培养基的2-3%。

14、进一步的，步骤（3）中，所述发酵培养为在20℃培养箱中培养15d。

15、进一步的，步骤（4）中，所述梯度乙醇的具体梯度为35%乙醇（v/v）-50%乙醇（v/v）-70%乙醇（v/v）；所述发酵物和乙醇的质量比为1:10；所述浸提为每个梯度下室温浸提8h。

16、本发明制备培养基过程中，高压蒸汽灭菌条件为115℃，30min；

17、本发明所使用的厚朴粉的制备过程为：利用粉碎机将厚朴粉碎，过60目的筛网即可。

18、本发明制备得到的发酵厚朴提取物浓度为5-40μm时，能有效促进免疫细胞的增殖；优选的，在10-20μm时，促增殖效果更优；发酵厚朴提取物浓度为20-40μm时，能有效促进免疫细胞的分化；发酵厚朴提取物浓度为20-40μm时，能有效促进免疫细胞因子ifn-γ的释放。

19、本发明所用羊肚菌为市售，其表观为：初期，羊肚菌菌丝为有光泽的白色或淡黄色，菌丝尖端呈树枝状分枝；中期，在培养基上形成菌落，菌落中心较老的菌丝分泌色素，使菌丝呈棕黄色，菌丝老化时，菌落由深棕色转为污棕色，光泽消失。

20、本发明的有益效果为：

21、1、本发明使用羊肚菌作为发酵菌种，辅助添加酿酒酵母，制备得到的发酵产物能够促进免疫系统的免疫能力；

22、2、本发明提供的发酵方法，能够提高发酵效率，且发酵过程中能够产生更加丰富的营养成分，且能够将大分子转化为更易吸收的小分子，提高对免疫细胞的增强效果；

23、3、本发明使用厚朴作为发酵基质，在培养基中添加少量荸荠粉，发酵过程中不易变质，大大提高发酵成功率，且原料简单易得，价格低廉，提高发酵产物的营养成分，利用该发酵物制得发酵食品，无异杂味。此发酵产物有利于促进naïvet细胞的增殖和分化，同时也会促进免疫细胞因子的释放。本发明制备的厚朴发酵物具有提高免疫能力的作用，为羊肚菌发酵厚朴提取物作为发酵食品及其在免疫系统上的研究提供了科学依据。

技术特征：

1.一种基于发酵厚朴制备增强免疫细胞能力的功能食品的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述菌丝在pda培养基中的接种量为5%；所述恒温倒置培养为在20℃温度下培养3d。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述含有荸荠粉的pda培养基的配方为：马铃薯200g，荸荠粉45g，葡萄糖20g，琼脂20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁15g，水1000ml， ph自然。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荸荠粉通过以下步骤制备而成：将清洗干净的新鲜荸荠直接打浆，然后滴入适量醋酸，搅拌均匀后，加入碳酸氢钙，搅拌一段时间后，冷冻干燥，研磨成粉即可。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述醋酸的加入量占荸荠重量的5%；所述碳酸氢钙的加入量占荸荠重量的3%。

6.根据权利要求1或3-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述厚朴粉和含有荸荠粉的pda培养基的质量比为1:10。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述羊肚菌的接入量为10%；所述酿酒酵母的加入量占厚朴培养基的2-3%。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述发酵培养为在20℃培养箱中培养15d。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述梯度乙醇的具体梯度为35%乙醇（v/v）-50%乙醇（v/v）-70%乙醇（v/v）；所述发酵物和乙醇的质量比为1:10；所述浸提为每个梯度下室温浸提8h。

技术总结本发明属于保健功能食品领域，具体涉及一种基于发酵厚朴制备增强免疫细胞能力的功能食品的方法。本发明使用厚朴作为发酵基质，在培养基中添加少量荸荠粉，发酵过程中不易变质，大大提高发酵成功率，且原料简单易得，价格低廉，提高发酵产物的营养成分，利用该发酵物制得发酵食品，无异杂味。此发酵产物有利于促进NaïveT细胞的增殖和分化，同时也会促进免疫细胞因子的释放。本发明制备的厚朴发酵物具有提高免疫能力的作用，为羊肚菌发酵厚朴提取物作为发酵食品及其在免疫系统上的研究提供了科学依据。技术研发人员：杨革,薛皓文,孔心茹,车程川,刘金锋受保护的技术使用者：曲阜师范大学技术研发日：技术公布日：2024/5/27