一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法

本发明属于纳米脂质体，特别涉及一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法。

背景技术：

1、长期以来，食源性致病菌一直是食品安全问题的重要来源。食品保鲜剂是现代食品工业不可或缺的一部分，在诸多食品保鲜剂中，食品天然保鲜剂由于它的安全、环保、抗菌效果良好等优良特性引起了广泛的关注。人们对食品天然保鲜剂替代合成化学保鲜剂的兴趣，推动了对精油特性以及在具体食品系统中应用的研究。柠檬草精油是一种从禾本科香茅属植物中提取得来的植物精油，具有清新宜人的香气和多种生物活性，例如杀菌、驱虫、和抗菌。柠檬草精油的抗菌特性已经在多种介质中得到证实。然而，高挥发性、光敏性和低溶解度限制了精油在食品保鲜中的使用。将精油成分封装到脂质体中可以有效提高其溶解度和化学稳定性。

2、纳米技术是常见的改善天然保鲜剂的性能的手段，其中，脂质体技术在天然保鲜剂的开发中发挥着良好效力。脂质体是一种由磷脂、固醇等物质组成，具有类生物膜结构的双层闭合囊泡。脂质体由于其生物相容性、生物降解性和非免疫原性活性，已被应用于许多领域。然而，传统纳米脂质体仍然面临着稳定性较差、封装药物易泄露等问题。这种现象归因于磷脂在储存和水解过程中发生的氧化导致磷脂双层膜受损。

3、将生物聚合物作为脂质体表面涂层可以减少氧化损伤和水解降解，经过修饰的脂质体可以在磷脂和生物聚合物分子之间形成静电桥，从而最大限度地减少磷脂双层的渗透性，增强脂质体系统的稳定性。壳聚糖是一种从甲壳类动物的主要结构成分几丁质中提取出来的碱性多糖，作为脂质体的正极聚电解质。壳聚糖的生物相容性、生物可降解性、黏附性和低毒性的特性使其在食品和制药领域得到了广泛的应用。卡拉胶是一种从红藻科的某些红海藻中提取的天然存在的阴离子线状多糖，作为涂层脂质体的负极电解质，是食品和药妆产品中常用的凝胶制剂和增稠剂。

4、综上，本发明欲以柠檬草精油为有效成分代表，利用壳聚糖和卡拉胶二者正、负电荷静电吸附对柠檬草精油常规脂质体进行逐层静电修饰，以得到一种结构性质更加稳定，抗菌效果更优异的多层脂质体食品天然保鲜剂。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，解决了现有的逐层静电吸附法制备的多层脂质体粒径过大，zeta电位值较低，储存稳定性、抗氧化性和抗菌性较差的问题。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，以卡拉胶、壳聚糖分别为阴、阳极聚电解质，采用逐层静电吸附法修饰柠檬草精油脂质体，以制得卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体，包括以下步骤：

4、s1、使用薄膜水合法结合探针超声法制备柠檬草精油脂质体；

5、s2、将柠檬草精油脂质体溶液逐滴加入磁力搅拌中的壳聚糖溶液中，搅拌均匀使带正电的壳聚糖吸附在柠檬草精油脂质体的表面，得到带正电的壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液；

6、s3、将壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液逐滴加入磁力搅拌中的卡拉胶溶液中，搅拌均匀使带负电的卡拉胶吸附在壳聚糖-柠檬草精油脂质体的表面，得到表面电荷为负的卡拉胶-壳聚糖柠檬草精油脂质体。

7、进一步的，s1中，柠檬草精油脂质体的制备过程为：

8、s1.1将大豆卵磷脂、胆固醇、柠檬草精油与三氯甲烷混合超声使溶解充分。

9、s1.2将混合液在35-45℃下旋转蒸发30-45 min去除有机试剂后，放入真空干燥箱内55-65℃干燥1-1.5 h，确保有机试剂被充分去除。

10、s1.3加入超纯水与0.05-0.15％吐温80将脂质体水化，得到柠檬草精油脂质体悬浊液。

11、s1.4使用超声探针仪对脂质体混悬液进行超声处理，得到柠檬草精油脂质体溶液。

12、进一步的，s1.1中，柠檬草精油脂质体溶液中，大豆卵磷脂的添加浓度为15-25mg/ml，胆固醇为4-5 mg/ml，柠檬草精油为3-4 mg/ml。

13、进一步的，s2中，0.25-0.3 mg/ml的壳聚糖溶解在浓度为0.02-0.05 mol/l醋酸溶液中。

14、进一步的，s2中，柠檬草精油脂质体溶液滴入壳聚糖溶液中，搅拌时间为3-6 h。

15、进一步的，s2中，柠檬草精油脂质体溶液滴入壳聚糖溶液的速度为 7-8 ml/min，柠檬草精油脂质体溶液与壳聚糖溶液的体积比为1 : (4-5) (v/v)壳聚糖溶液的磁力搅拌转速为300-400 rpm。

16、进一步的，s3中，将0.4-0.5 mg/ml的卡拉胶溶液加热至75-85℃，搅拌溶解5-15min后，静置冷却至室温。

17、进一步的，s3中，壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液滴入卡拉胶溶液中，壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液与卡拉胶溶液的体积比为1 : (4-5) (v/v)，搅拌时间为3-6 h。

18、进一步的，s3中，壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液逐滴加入卡拉胶溶液中的速度为5-6 ml/min，卡拉胶溶液的磁力搅拌转速为400-500 rpm。

19、进一步的，s3中，搅拌制得的卡拉胶-壳聚糖柠檬草精油脂质体，需经过0.8μm孔径的pes膜过滤。

20、与现有技术相比，本发明所具有的优点和有益效果是：

21、传统脂质体是有前途的药物递送系统，但由于传统脂质体的结构稳定性不足，导致其在实际应用中受到诸多限制。生物聚合物的包被可以有效改善这一问题，通过逐层静电吸附作用与带正电的壳聚糖和带负电的卡拉胶相结合，经过包被后的脂质体可以减少环境降解和磷脂双层渗透，增强脂质体系统的稳定性，还可延长活性物质释放时间，提高生物利用率。除此之外，经过修饰的脂质体对有效成分的释放速度减缓，这也提高了脂质体作为食品天然保鲜剂材料的长期抗菌性能。卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体在贮存与运输食品中可比传统脂质体展现出更好的稳定性，更有效地延长食品的货架期。

技术特征：

1.一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s1中，柠檬草精油脂质体的制备过程为：

3.根据权利要求2所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，柠檬草精油脂质体溶液中，大豆卵磷脂的添加浓度为15-25 mg/ml，胆固醇为4-5mg/ml，柠檬草精油为3-4 mg/ml。

4. 根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s2中，0.25-0.3 mg/ml的壳聚糖溶解在0.02-0.05 mol/l醋酸溶液中。

5.根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s2中，柠檬草精油脂质体溶液滴入壳聚糖溶液中，搅拌时间为3-6 h。

6.根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s2中，柠檬草精油脂质体溶液滴入壳聚糖溶液的速度为7-8 ml/min，柠檬草精油脂质体溶液与壳聚糖溶液的体积比为1 : (4-5) (v/v) ，壳聚糖溶液的磁力搅拌转速为300-400 rpm。

7. 根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s3中，将0.4-0.5 mg/ml卡拉胶溶液加热至75-85℃，搅拌溶解5-15 min后，静置冷却至室温。

8. 根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s3中，壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液滴入卡拉胶溶液中，壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液与卡拉胶溶液的体积比为1 : (4-5) (v/v) ，搅拌时间为3-6 h。

9.根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s3中，壳聚糖-柠檬草精油脂质体溶液逐滴加入卡拉胶溶液中的速度为5-6 ml/min，卡拉胶溶液的磁力搅拌转速为400-500 rpm。

10.根据权利要求1所述的一种卡拉胶-壳聚糖柠檬草精油脂质体的制备方法，其特征在于，s3中，搅拌制得的卡拉胶-壳聚糖柠檬草精油脂质体，需经过0.8μm孔径的pes膜过滤。

技术总结本发明提供了一种卡拉胶‑壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体的制备方法，所述脂质体的制备方法如下：将大豆卵磷脂、胆固醇、柠檬草精油与三氯甲烷混合，水浴超声使溶解充分；将混合液旋转蒸发去除有机试剂后，放入真空干燥箱内干燥；加入超纯水与吐温80水化，得到柠檬草精油脂质体悬浊液；对脂质体混悬液进行超声处理；将柠檬草精油脂质体滴加到壳聚糖溶液中，搅拌得到壳聚糖修饰的柠檬草精油双层脂质体；将柠檬草精油双层脂质体滴加到卡拉胶溶液中，搅拌得到卡拉胶‑壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体。本发明所得卡拉胶‑壳聚糖修饰柠檬草精油脂质体与未经修饰或单层修饰的脂质体相比，增强了系统稳定性，延长了包埋物质的释放时间，提高了生物利用率。技术研发人员：吴笛,李沁虹,甘娜,陈丽娟,栗懿琳受保护的技术使用者：成都大学技术研发日：技术公布日：2024/5/27