一种肿瘤药物筛选方法与流程

本发明涉及离体药物筛选领域，一种抗肿瘤药物快速药敏检测方法及其装置。

背景技术：

1、恶性肿瘤是严重威胁人类健康的恶性疾病，发病率和死亡率呈明显上升趋势，已经成为影响我国居民健康的主要的死亡原因之一。2022年，世界卫生组织(who)报道了2020年全球人癌症新发病例将达到1929万人， 996万人死于癌症，癌症将成为新世纪人类的第一杀手,并成为全球最大的公共卫生问题之一。因此，采取有效的手段研究和开发抗肿瘤药物就显得极其重要。目前，个体化精准医疗被越来越多的应用在临床上，尤其是肿瘤治疗领域。个体化精准医疗不仅提高了治疗的精确性，而且也可以有效地降低患者用药的随机性和盲目性，从而减轻患者用药的伤害。

2、患者来源的异种移植物模型(patient-derived xenograft model，pdx模型)被广泛应用于医学研究和药物研发领域中。pdx模型较好地保持了患者原发肿瘤的生物学特性。该模型是将患者新鲜的肿瘤组织直接移植到免疫缺陷小鼠(常用裸鼠或scid小鼠)体内而建立的肿瘤模型，此类模型保持了与患者相似的遗传特性和肿瘤异质性。国际上已有多家大型临床医疗中心建立了pdx模型，进行临床前药物研发和筛选以及指导癌症患者的个性化用药。各大药企也把pdx模型应用在肿瘤药物的临床前药效学研究。

3、目前，运用pdx模型进行个体化精准医疗的主要难点在于模型建成周期与药敏测试花费时间长以及pdx模型的移植成瘤率较低。一般情况下，原代肿瘤细胞成功移植到小鼠体内需要2～3个月的时间，而随后药物敏感性测试时间也需要3～4个月。而对于肿瘤病人来说，时间就是生命。因此，在最短时间内获得精准的模拟临床病人的活体模型和抗肿瘤药物药敏检测方法，是精准医疗领域中亟需解决的问题。

技术实现思路

1、在本发明提供了一种检测原代肿瘤细胞对抗肿瘤药物的药物敏感性的快速活体检测方法，包括以下步骤：

2、(1) 将原代肿瘤细胞，分离、分选后置于植入装置中；

3、(2) 将包含所述原代肿瘤细胞的植入装置植入受试裸小鼠体内；

4、(3) 将待测药物，以相应的临床给药方式施用于携带该植入装置的受试裸小鼠；

5、(4) 在一个给药疗程后，手术取出植入装置，在体外检测肿瘤细胞对待测药物的敏感性。

6、在一个实施方案中，所述原代肿瘤细胞来自离体肿瘤组织样品。所述的离体肿瘤样品可以获得自肿瘤患者，或者获得自利用肿瘤患者的肿瘤细胞构建的pdx动物模型。

7、在一个实施方案中，所述的受试动物为小鼠，优选裸小鼠。

8、在一个实施方案中，所述检测肿瘤细胞对待测药物的敏感性在体外进行。

9、在一个实施方案中，所述待测药物通过口服或胃肠外途径施用于所述受试动物。

10、在一个实施方案中，所述原代肿瘤细胞是经过消化和分选的分离的肿瘤细胞。

11、本发明中所述的肿瘤细胞可以来源于多种肿瘤类型的肿瘤组织，包括但不限于位于以下部位的肿瘤：消化道系统(例如胃，肠，十二指肠，结肠，胰腺，胆管，肛管等)、乳腺，肺，肝，内分泌腺(例如肾上腺、甲状旁腺、脑垂体、睾丸、卵巢、胸腺、甲状腺)，泌尿和生殖系统(例如肾，膀胱，卵巢，睾丸，前列腺等)，骨骼肌肉系统(例如骨，平滑肌，横纹肌等)，神经系统(例如脑)，皮肤，头颈部，血液系统等。例如所述的肿瘤细胞可为来源于胃癌，十二指肠癌，肺癌的肿瘤细胞。所述的肿瘤细胞可以是该部位肿瘤的任何类型的肿瘤细胞。

12、在一个实施方案中，所述检测肿瘤细胞对待测药物的敏感性在将待测药物施用于受试动物后5-14天，优选5-7天进行。本发明中检测肿瘤细胞对待测药物的敏感性可通过在体外进行药敏检测的方法进行，包括但不限于atp检测法，mtt法，brdu标记法，ki67染色法等。

13、在一个实施方案中，所述植入装置优选是孔径为小于3µm的聚碳酸酯膜或硝酸纤维膜的管状或者袋状装置，优选孔径聚碳酸酯膜或硝酸纤维膜管，其内径优选约为1-3mm。

14、本发明的另一方面提供了一种用于检测原代肿瘤细胞对抗肿瘤药物的药物敏感性的试剂盒，其包含一种植入装置，所述植入装置是以孔径为小于3µm的聚碳酸酯膜或硝酸纤维膜材料的管状或者袋状装置，优选孔径聚碳酸酯膜或硝酸纤维膜管，其内径优选约为1-3mm。在一个实施方案中，所述试剂盒用于实施本发明所述检测原代肿瘤细胞对抗肿瘤药物的药物敏感性的方法。

15、本发明也提供了本发明的试剂盒在检测原代肿瘤细胞对于抗肿瘤药物的药物敏感性以及快速筛选抗肿瘤药物中的用途。

16、图1为本发明方法的流程示意图。

17、图2为在肝癌病人的细胞在传统的小鼠pdx模型中，给予不同的抗肿瘤药后患者来源的原代肝癌肿瘤细胞的生长曲线图。

18、图3为根据本发明的药敏检测方法，抗肿瘤对于来自小鼠肝癌植入物-pdx模型离体肿瘤组织中的胃癌肿瘤细胞的药效数据图。

19、图4为通过本发明的方法和试剂盒对来自患者的胃癌原代肿瘤细胞，通过本发明植入物-pdx方法，植入7天后，对植入物中的细胞进行各种抗肿瘤药物的药效学分析图。

技术特征：

1.一种检测原代肿瘤细胞对抗肿瘤药物的药物敏感性的方法，包括以下步骤：

2.权利要求1的方法，其中所述的肿瘤组织样品获得自肿瘤患者，或者获得自利用肿瘤患者的肿瘤细胞构建的pdx动物模型。

3.权利要求2， 权利要求1中，所述植入装置为孔径为小于3µm的聚碳酸酯膜或硝酸纤维膜，优选为聚碳酸酯膜，进一步优选内径约1-3mm的管装膜。

4.权利要求1至3中，其中检测肿瘤细胞对待测药 物的敏感性在将待测药物施用于受试动物后5-14天，优选5-7天进行。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中将所述植入装置植入受试动物的皮下。

6.一种用于检测原代肿瘤细胞对抗肿瘤药物的药物敏感性的试剂盒，其包含一种植入装置，所述植入装置是碳酸酯膜或硝酸纤维膜的管状或袋状装置，优选碳酸酯膜或硝酸纤维膜管，进一步优选内径约1-3mm的管状结构。

7.权利要求5的试剂盒，其用于实施权利要求1-5的方法。

8.权利要求6的试剂盒在检测原代肿瘤细胞对于抗肿瘤药物的药物敏感性以及快速筛选抗肿瘤药物中的用途。

技术总结本发明提供了一种抗肿瘤药物快速药效测试方法，将取病人来源的新鲜肿瘤组织或小鼠PDX模型的肿瘤组织消化处理并分选后获得肿瘤单细胞，肿瘤单细胞再接种于孔径小于3µm的聚碳酸酯膜或硝酸纤维膜的管状或者袋状装置中，并植入动物体内。通过临床给药途径给药，在7‑14天内检测肿瘤对药效的敏感性。技术研发人员：郭佩兰受保护的技术使用者：北京芯兰科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/5