C2C9核酸酶在制备基因检测产品中的用途和方法

本发明涉及生物，特别是涉及c2c9核酸酶在制备基因检测产品中的用途和方法。

背景技术：

1、基因检测又称核酸检测，是生物技术领域的重要组成部分。基于不同生物以及物种的遗传物质dna与rna的序列特异性，已开发出不同的核酸检测方法。传统的核酸检测包括测序技术、恒温扩增技术等，可以对各种病原体的dna或者rna特异序列进行检测，也可分析检测疾病相关的snp位点。

2、crispr/cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated protein)是近年来开发的一种新型基因编辑系统。该系统主要由cas核酸内切酶和相对应的引导rna(sgrna)所构成。cas核酸内切酶能够与引导rna特异性结合，利用碱基互补配对靶向识别并切割特定dna位点，造成dna的双链断裂。由于crispr系统的简便性与高效性，该系统已被广泛的应用于生命科学、医学、农学等领域的基础研究、生物技术开发以及疾病治疗手段研发。除了在基因编辑领域有相当广泛的应用，同时该系统也被开发为基因检测工具。

3、通常的基因检测技术的流程复杂，对检测的仪器设备有着较高的要求，并且检测时间相对较长。crispr系统基因检测工具可在很大程度上缩减这一流程。因此，开发一种简便高效且低成本的检测工具，可以在实现高效基因检测的同时减少基因检测技术设备仪器的需求，具有良好的实际应用价值和商业价值。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供c2c9核酸酶在制备基因检测产品中的用途和方法，用于解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明公开了一种基于极小型crispr/c2c9系统的新型基因检测体系以及c2c9核酸酶在制备基因检测产品中的应用。通过crispr/c2c9检测体系检测样品，利用sgrna中导向部分的特异性对特定核酸序列进行检测，可以快速高效地实现对目标基因的检测。

3、本发明提供c2c9核酸酶在制备基因检测产品中的用途。

4、本发明还提供一种基因检测产品，所述基因检测产品包含荧光探针，以及c2c9核酸酶和sgrna，或编码所述c2c9核酸酶、sgrna的核苷酸。

5、本发明还提供所述的基因检测产品在鉴定生物种类中的用途。

6、本发明还提供一种非疾病诊断目的的基因检测方法，所述检测方法包括使用权利要求所述的基因检测产品检测待测基因序列。

7、如上所述，本发明的c2c9核酸酶在制备基因检测产品中的用途和方法，具有以下有益效果：所述基因的检测方法操作简便，检测效率高，能够快速实现对特定待测基因的检测。

技术特征：

1.c2c9核酸酶在制备基因检测产品中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述c2c9核酸酶为：

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述c2c9核酸酶不超过800个氨基酸；和/或，所述c2c9核酸酶具有受rna引导的核酸结合活性；优选的，所述c2c9核酸酶为actinomaduracraniellae c2c9。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述c2c9核酸酶的氨基酸序列为seq id no.

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述c2c9核酸酶和sgrna、荧光探针联合用于制备基因检测产品。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述sgrna包含固定序列和可变区序列，所述可变区序列为能够与靶序列杂交的片段。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述固定序列的核苷酸序列如seq id no:121所示；优选的，与acc2c9核酸酶匹配的sgrna的核苷酸序列如seq id no:117所示。

8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述荧光探针一端包含荧光基团，另一端包括淬灭基团；优选的，5’端含有荧光基团，3’端含有淬灭基团；更优选的，所述荧光基团选自fam、tet、joe、hex、cy3、rox、texas red、lc red640、cy5或lc red705；

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述荧光基团和淬灭基团之间为一段4nt至20nt的单链dna；优选的，所述单链dna含有如seq id no:120所示的核苷酸序列。

10.一种基因检测产品，其特征在于，所述基因检测产品包含荧光探针，以及c2c9核酸酶和sgrna，或编码所述c2c9核酸酶、sgrna的核苷酸。

11.根据权利要求10所述的产品，其特征在于，所述基因检测产品检测的待测基因序列中包含能够与所述sgrna中的可变区序列碱基互补配对的靶序列。

12.根据权利要求10所述的产品，其特征在于，所述基因检测产品中还包括还原剂、缓冲液、金属离子、氯离子中的任一种或多种；优选的，所述还原剂为β-巯基乙醇、dtt、三(2-羧乙基)膦或sds中的任一种或多种；优选的，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液或tris-hcl；优选的，所述金属离子为钠离子或镁离子。

13.权利要求10-12任一所述的基因检测产品在鉴定生物种类中的用途。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述生物为微生物或细胞；和/或，所述用途为非疾病诊断目的；优选的，所述基因检测产品用于检测食品或环境中是否存在特定微生物。

15.一种非疾病诊断目的的基因检测方法，其特征在于，所述检测方法包括使用权利要求10-12任一所述的基因检测产品检测待测基因序列。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述待测基因序列来源于从样本中提取的基因或将现有的基因扩增获得；优选的，所述样本选自环境样本、食品样本或生物样本。

17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，还包括如下特征中的一项或多项：

技术总结本发明涉及生物技术领域，特别是涉及C2C9核酸酶在制备基因检测产品中的用途和方法，所述基因检测产品包含荧光探针，以及C2C9核酸酶和sgRNA，或编码所述C2C9核酸酶、sgRNA的核苷酸。所述基因检测产品能用于鉴定生物种类，鉴定或检测方法包括使用所述的基因检测产品检测待测基因序列。本发明的所述基因的检测方法操作简便，检测效率高，能够快速实现对特定待测基因的检测。技术研发人员：季泉江,陈未中,马佳诚受保护的技术使用者：上海科技大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18