包括P75NTR胞外结构域的蛋白质的制作方法

本发明涉及伴侣动物的有效疼痛疗法。

背景技术：

1、对兽医疗法，特别是缓解疼痛的疗法的需求巨大。

2、目前对狗的疼痛缓解治疗包含非甾体抗炎药物(通常称为nsaid)和若干种有助于控制与骨关节炎相关的疼痛和炎症的非甾体抗炎药物。fda已经批准了若干种nsaid。然而，需要对伴侣动物进行另外有效的疼痛治疗并且副作用最小。

3、神经生长因子(ngf)最早发现于20世纪50年代。ngf蛋白然后被克隆并鉴定为脑源性神经营养因子(bdnf)、神经营养蛋白-3和4/5(nt-3、nt-4-5)的一部分。所有这些均是促进外周神经系统存活和生长的分泌蛋白。

4、ngf在体外和体内两者中均可引起外周敏化，如通过drg神经元对温度或辣椒素(capsaicin)的应答增加所展示的。ngf还导致逆行轴突转运后的转录调节，如通过免疫染色示出鞘内ngf治疗后bdnf的上调所展示的。此外，ngf可能使外周传入物涌现到患病关节和癌性组织中(denk等人,《神经学年度评论(annual review of neuroscience)》,第40:307-325卷,2017)。

5、ngf在成年期的表达水平较低，但损伤、炎症或ngf的释放会引起炎性细胞的激活。这些细胞反过来也产生和分泌ngf，并且这导致了短期和长期的影响。ngf在伤害性感受处理中具有众所周知的多功能作用，尽管介导伤害性感受的ngf受体激活下游的精确信号传导通路是复杂的，并且尚未完全了解。ngf在伤害性感受和慢性疼痛的产生和/或维持中的作用使其成为用于治疗慢性疼痛病状的疼痛治疗的具有吸引力的靶标(barker等人,《疼痛研究杂志(journal of pain research)》,2020:13 1223-1241)。

6、针对ngf的极低剂量单克隆抗体(mab)可以减轻慢性疼痛。然而，在人体临床试验期间，用针对ngf的mab治疗的患者的小的子集因与nsaid治疗相互作用而出现快速进行性关节退变。完全去除ngf示出会导致骨和软骨修复受损(denk等人,《神经学年度评论》,第40:307-325卷,2017)。目前，针对骨关节炎(oa)相关疼痛的管理正在开发中，基于靶向ngf的物种特异性mab的治疗也用于狗和猫中(enomoto等人,《兽医记录(vet rec.)》2019年1月5日；184(1):23和wo2019177690)。然而，鉴于在人体临床试验中出现的副作用，有必要开发靶向ngf的替代性治疗。

7、本技术中的任何文件的引用或鉴定并非承认此类文件作为本发明的现有技术是可获得的。

技术实现思路

1、本发明旨在解决伴侣动物对有效疼痛疗法的需求。

2、与抗ngf抗体疗法相比，本发明提供的用于伴侣动物的疼痛疗法的副作用降低。本发明的蛋白质与在疼痛条件下水平升高的ngf结合，因此与过量的ngf结合能够恢复正常ngf水平，而不完全阻断ngf信号传导。不希望受理论束缚，本发明人认为这确保了健康功能所需的ngf信号传导的水平。此外，据信本发明的融合蛋白可以在非常低的剂量下操作，但非常有效。

3、本发明人使用了止痛策略来减少但不完全耗竭循环中的ngf。为此，使用p75神经营养蛋白受体(p75ntr)的胞外结构域(ecd)，与fc融合以增加其半衰期。p75ntr与ngf和其它脑源性神经营养因子(nt3、nt4)结合并介导不同的细胞活性。

4、已经描述了人p75用于治疗人的疼痛的用途(wo2013136078)。

5、因此，在第一方面，本发明涉及一种分离的伴侣动物p75ntr蛋白或其一部分。本发明还涉及一种分离的核酸，其编码蛋白质或其部分。

6、本发明还涉及一种载体，其包括如上文所描述的核酸。

7、本发明进一步涉及一种宿主细胞，其包括如上文所描述的核酸。

8、另一方面，本发明涉及一种融合蛋白，其包括分离的伴侣动物p75ntr胞外结构域或其部分和半衰期延长部分。

9、另一方面，本发明涉及一种核酸，其编码如上文所描述的融合蛋白。另一方面，本发明还涉及一种载体，其包括如上文所描述的核酸。

10、另一方面，本发明涉及一种宿主细胞，其包括如上文所描述的核酸或如上文所描述的载体。

11、另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包括如上文和本文所描述的分离的伴侣动物p75ntr蛋白或如上文和本文所描述的融合蛋白。

12、另一方面，本发明涉及一种用于治疗伴侣动物的ngf相关病症的方法，所述方法包括施用如上文所描述的分离的伴侣动物p75ntr蛋白、如上文和本文所描述的融合蛋白或如上文和本文所描述的药物组合物。

13、另一方面，本发明涉及一种如上文所描述的分离的伴侣动物p75ntr蛋白、如上文所描述的融合蛋白或如上文和本文所描述的药物组合物的用途，其用于治疗伴侣动物的ngf相关病症。

14、另一方面，本发明涉及一种抑制伴侣动物的ngf活性的方法，所述方法包括施用如上文所描述的分离的伴侣动物p75ntr蛋白、如上文和本文所描述的融合蛋白或如上文和本文所描述的药物组合物。

15、另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其包括如上文所描述的分离的伴侣动物p75ntr蛋白、如上文所描述的融合蛋白或如上文所描述的药物组合物以及任选地使用说明书。

16、因此，本发明的目标不在于在本发明内涵盖任何先前已知的产物、制备所述产物的过程或使用所述产物的方法，使得申请人保留任何先前已知的产物、过程或方法的权利并且由此公开对所述产物、过程和方法的免责声明。进一步注意到，本发明无意在本发明的范围内涵盖任何产物、过程或制备所述产物或使用所述产物的方法，这不符合uspto(35u.s.c.§112，第一段)或epo(epc的第83条)的书面描述和实现需求，使得申请人保留任何先前描述的产物、制备所述产物的过程或使用所述产物的方法的权利并且由此公开任何先前描述的产物、制备所述产物的过程或使用所述产物的方法的免责声明。在本发明的实践中可能有利的是遵从第53(c)条epc以及规则28(b)和(c)epc。明确否认申请人在本技术的谱系或任何其它谱系中或在任何第三方的任何先前提交的申请中授予的任何专利所针对的任何实施例的所有权利明确保留。本文中的任何内容均不应被解释为保证。

17、应当注意，在本公开中并且特别在权利要求书和/或段落中，如“包括(comprises)”、“包括(comprised)”、“包括(comprising)”等术语可以具有在美国专利法中赋予其的含义；例如，其可以意指“包含(includes)”、“包含(included)”、“包含(including)”等；并且如“基本上由…组成(consisting essentially of)”和“基本上由…组成(consists essentially of)”等术语具有在美国专利法中赋予其的含义，例如，其允许没有明确引用的要素，但排除现有技术中存在的或影响本发明的基本或新颖特征的要素。

18、这些和其它实施例从以下详细描述中公开或显而易见，并且由以下详细描述涵盖。