一种同时检测9种常见动物源性成分的实时荧光PCR方法及试剂盒与流程

本发明属于食品检测，具体涉及一种同时检测9种常见动物源性成分的实时荧光pcr方法及试剂盒。

背景技术：

1、现有常见动物源性检测的标准方法主要包括：1、gb/t 38164-2019，其中规定了黄牛、牦牛、水牛、绵羊、山羊、猪、骆驼、马鹿、梅花鹿、驯鹿、兔、狗、鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子、火鸡、猫、狐狸、水貂、貉、鼠物种的实时荧光pcr检测方法；2、sn/t 3730.5-2013，其中规定了马源性成分的实时荧光pcr检测方法；3、sn/t 2051-2008，其中规定了牛、羊、猪源性成分的实时pcr检测方法。

2、上述标准虽然已涵盖常见动物源性的实时荧光pcr检测，但在可检测源性种类、pcr反应参数和检测时效性方面存在较大差异，无法满足食品中多源性掺假的高通量检测需求。因此，本领域仍然有必要开发更多的检测试剂和检测方法，实现对多种动物源性进行同时检测的目的，从而进一步提升食品中动物源性真实性检测的通用性和时效性，更好地满足新形势下的监管需求，准确、高效地服务市场监管。

技术实现思路

1、针对现有技术的问题，本发明提供一种同时检测9种常见动物源性成分的实时荧光pcr方法及试剂盒。

2、一种引物探针组合，它包括用于检测牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔中至少一种动物源性成分的正向引物、反向引物和探针；

3、其中，

4、用于检测牛源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.1所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示，探针的核苷酸序列如seq id no.3所示；

5、用于检测羊源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.4所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.5所示，探针的核苷酸序列如seq id no.6所示；

6、用于检测黄牛源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.7所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.8所示，探针的核苷酸序列如seq id no.9所示；

7、用于检测水牛源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.10所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.11所示，探针的核苷酸序列如seq id no.12所示；

8、用于检测鸡源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.13所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.14所示，探针的核苷酸序列如seq id no.15所示；

9、用于检测鸭源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.16所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.17所示，探针的核苷酸序列如seq id no.18所示；

10、用于检测鹅源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.19所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.20所示，探针的核苷酸序列如seq id no.21所示；

11、用于检测马源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.22所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.23所示，探针的核苷酸序列如seq id no.24所示；

12、用于检测兔源性成分的正向引物的核苷酸序列如seq id no.25所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.26所示，探针的核苷酸序列如seq id no.27所示。

13、优选的，它包括用于检测牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马和兔的动物源性成分的正向引物、反向引物和探针。

14、本发明还提供上述引物探针组合在鉴别肉制品中牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔中至少一种动物源性成分的用途。

15、优选的，所述引物探针组合用于同时鉴别肉制品中牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔的动物源性成分。

16、优选的，鉴别动物源性成分的方法为实时荧光pcr。

17、本发明还提供一种鉴别肉制品中动物源性成分的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物探针组合。

18、优选的，鉴别动物源性成分的方法为实时荧光pcr。

19、本发明还提供一种鉴别肉制品中动物源性成分的鉴别方法，包括如下步骤：

20、步骤1，提取待测样品的dna作为模板；

21、步骤2，将上述引物探针组合作为pcr检测体系的引物和探针，分别进行对应动物源性成分的pcr扩增反应；

22、步骤3，进行荧光检测。

23、优选的，步骤2中，扩增体系中正向引物、反向引物、探针和dna模板的终浓度为：

24、正向引物0.16-0.32μmol/l、

25、反向引物0.16-0.32μmol/l、

26、探针0.16-0.32μmol/l、

27、dna模板0.04ng/μl～4ng/μl；

28、扩增反应的程序为：95℃5-10min；35个循环。

29、优选的，步骤2中，扩增体系中正向引物、反向引物、探针和dna模板的终浓度为：

30、正向引物0.16μmol/l、

31、反向引物0.16μmol/l、

32、探针0.16μmol/l、

33、dna模板0.04ng/μl～4ng/μl；

34、扩增反应的程序为：95℃5min；35个循环。

35、本发明针对动物源性成分的检测，构建了一系列的引物探针组合，这些引物探针组合物适用于牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马和兔9种动物源性成分的实时荧光pcr检测。本发明提供的引物探针组合不仅兼具有良好的特异性和灵敏度。更为重要的是，这些引物探针组合用于9种动物源性成分检测的过程中，可以采用统一的pcr扩增条件进行检测。因此，本发明的技术方案能够做到在一次检测中同时对9种动物源性成分进行检测，这大大提高了实际进行肉制品掺假检测的效率，能够实现对食品安全更加高效的监控。因此，本发明具有很好的应用前景。

36、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

37、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种引物探针组合，其特征在于：它包括用于检测牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔中至少一种动物源性成分的正向引物、反向引物和探针；

2.按照权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于：它包括用于检测牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马和兔的动物源性成分的正向引物、反向引物和探针。

3.权利要求1或2所述的引物探针组合在鉴别肉制品中牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔中至少一种动物源性成分的用途。

4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于：所述引物探针组合用于同时鉴别肉制品中牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔的动物源性成分。

5.按照权利要求3所述的用途，其特征在于：鉴别动物源性成分的方法为实时荧光pcr。

6.一种鉴别肉制品中动物源性成分的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物探针组合。

7.按照权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：鉴别动物源性成分的方法为实时荧光pcr。

8.一种鉴别肉制品中动物源性成分的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.按照权利要求8所述的鉴别方法，其特征在于：

10.按照权利要求9所述的鉴别方法，其特征在于：

技术总结本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种同时检测9种常见动物源性成分的实时荧光PCR方法及试剂盒。本发明首先提供了一种鉴别9种常见动物源性成分的引物探针组合，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.27所示。采用上述引物探针组合能够通过实时荧光PCR方法对牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马和兔9种动物源性成分同时进行检测，具有检测方法条件温和、操作简便、特异性强、灵敏度高、可靠性好等优势。此外，本发明的引物探针组合用于9种动物源性成分检测时可采用相同的PCR扩增条件，从而能够实现同时检测的目的，可有效提高检测的效率，具有很好的应用前景。技术研发人员：段庆梓,尚柯,孙宏虎,王巍,王同智,晋佳琳,张熳迪,李瑶,朱虹霖,吴江受保护的技术使用者：成都市食品检验研究院技术研发日：技术公布日：2024/6/18