提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法

本发明涉及生物工程，具体涉及提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法。

背景技术：

1、嗜盐四联球菌是传统发酵食品中的重要菌株之一，具有很强的耐酸耐盐性，能够产生多种酶和代谢产物如蛋白酶、乳酸、醋酸等。传统发酵食品生产过程是一种好氧、厌氧环境共存的发酵体系。而嗜盐四联球菌作为兼性厌氧的菌株，在有氧条件下不利于其生长与代谢，进而影响食品生产。

2、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种利用酵母菌提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法。

2、本发明采用的技术方案是：

3、提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，该方法包含：向乳酸菌培养体系中加入酵母菌在30℃下共同培养7d，并同时在180rpm下振荡进行有氧处理。

4、优选的，所述酵母菌为鲁氏接合酵母 zygosaccharomycesrouxiimk063705，所述兼性厌氧乳酸菌为嗜盐四联球菌 tetragenococcushalophilusmk063724。

5、优选的，所述混合培养的培养基成分为：10 g/l蛋白胨，20 g/l葡萄糖，5 g/l牛肉粉，4 g/l酵母粉，5 g/l乙酸钠，2 g/l磷酸氢二钾，0.2 g/l硫酸镁，2 g/l柠檬酸三铵，0.05g/l硫酸锰，1ml/l吐温80，氯化钠120 g/l，ph 6.5。

6、优选的，向乳酸菌培养体系中加入酵母菌进行混合培养前需将乳酸菌和酵母菌活化制备为种子液。

7、优选的，酵母菌种子液的制备方法为：

8、将酵母菌接种于酵母菌培养基中，在30 ℃，180 rpm条件下活化18 h；

9、活化后在4 ℃，4000 rpm条件下离心15 min收集菌体，离心洗涤，并重悬调整种子液初始生物量约为108cfu/ml。

10、优选的，所述酵母菌培养基成分为：10 g/l蛋白胨，20 g/l葡萄糖，10 g/l酵母浸粉，ph 6.5。

11、优选的，乳酸菌种子液的制备方法为；

12、将乳酸菌接种于乳酸菌培养基中，30 ℃静置培养72 h；

13、培养后在4 ℃，4000 rpm条件下离心15 min收集菌体，离心洗涤，并重悬调整种子液初始生物量约为108cfu/ml。

14、优选的，所述乳酸菌培养基成分为：10 g/l蛋白胨，20 g/l葡萄糖，5 g/l牛肉粉，4g/l酵母粉，5 g/l乙酸钠，2 g/l磷酸氢二钾，0.2 g/l硫酸镁，2 g/l柠檬酸三铵，0.05 g/l硫酸锰，1ml/l吐温80，氯化钠100 g/l，ph 7。

15、本发明的有益效果：本发明将培养好的鲁氏接合酵母和嗜盐四联球菌种子液共同添加到混合培养基中，并对混合培养基体系进行有氧处理。提取混合培养完成的菌悬液中乳酸菌菌体的dna，利用荧光定量pcr技术进行绝对定量。经有氧处理后，相比对照组即纯培养组，添加了酵母菌混合培养后的乳酸菌具有更高的基因拷贝量。本发明提供一种基于在乳酸菌培养体系中添加酵母菌混合培养提升兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，操作简单，便于实施，可用于提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境中的生长性能。

技术特征：

1.提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，该方法包含：向乳酸菌培养体系中加入酵母菌在30℃下共同培养7d，并同时在180 rpm下振荡进行有氧处理。

2.根据权利要求1所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，所述酵母菌为鲁氏接合酵母zygosaccharomyces rouxii mk063705，所述兼性厌氧乳酸菌为嗜盐四联球菌tetragenococcus halophilus mk063724。

3.根据权利要求1所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，所述混合培养的培养基成分为：10 g/l蛋白胨，20 g/l葡萄糖，5 g/l牛肉粉，4 g/l酵母粉，5 g/l乙酸钠，2 g/l磷酸氢二钾，0.2 g/l硫酸镁，2 g/l柠檬酸三铵，0.05 g/l硫酸锰，1ml/l吐温80，氯化钠120 g/l，ph 6.5。

4.根据权利要求1所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，向乳酸菌培养体系中加入酵母菌进行混合培养前需将乳酸菌和酵母菌活化制备为种子液。

5.根据权利要求4所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，酵母菌种子液的制备方法为：

6.根据权利要求5所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，所述酵母菌培养基成分为：10 g/l蛋白胨，20 g/l葡萄糖，10 g/l酵母浸粉，ph 6.5。

7.根据权利要求4所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，乳酸菌种子液的制备方法为：

8.根据权利要求7所述提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，其特征在于，所述乳酸菌培养基成分为：10 g/l蛋白胨，20 g/l葡萄糖，5 g/l牛肉粉，4 g/l酵母粉，5g/l乙酸钠，2 g/l磷酸氢二钾，0.2 g/l硫酸镁，2 g/l柠檬酸三铵，0.05 g/l硫酸锰，1ml/l吐温80，氯化钠100 g/l，ph 7。

技术总结本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法。本发明将培养好的鲁氏接合酵母和嗜盐四联球菌种子液共同添加到混合培养基中，并对混合培养基体系进行有氧处理。提取混合培养完成的菌悬液中乳酸菌菌体的DNA，利用荧光定量PCR技术进行绝对定量。经有氧处理后，相比对照组即纯培养组，添加了酵母菌混合培养后的乳酸菌具有更高的基因拷贝量。本发明提供一种基于在乳酸菌培养体系中添加酵母菌混合培养提升兼性厌氧乳酸菌在有氧环境的耐受能力的方法，操作简单，便于实施，可用于提高兼性厌氧乳酸菌在有氧环境中的生长性能。技术研发人员：何强,左澳腾,卢云浩,姜丽,沈思蔚受保护的技术使用者：四川大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18