一种海带岩藻聚糖及其制备方法和应用

本发明属于生物提取，具体涉及一种海带岩藻聚糖及其制备方法和应用。

背景技术：

1、岩藻多糖是从马尾藻中提取出的主要活性物质，因其主要单糖成分为岩藻糖而得名。同时，它也是一种水溶性的多聚阴离子同型杂多糖，富含硫酸基团，因此又被叫做岩藻聚糖硫酸酯。岩藻多糖的单糖组成除了主要的l-岩藻糖外，还包括少量的鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖等，各单糖间主要通过α-1,2、α-1,3或α-1,4糖苷键相连。大量研究表明，岩藻多糖有广泛的保健作用和治疗功效，具有降血脂、降血糖、抗氧化、抗癌和调节免疫功能等生物活性，其生物活性还与多糖的分子量大小、硫酸基含量以及化学结构有着密切的关系，深入了解岩藻多糖的构效关系也成为大量学者今后研究的重点。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种海带岩藻聚糖。

2、本发明的另一目的在于提供上述海带岩藻聚糖的制备方法。

3、本发明的再一目的在于提供上述海带岩藻聚糖的应用。

4、本发明的技术方案如下：

5、一种海带岩藻聚糖，包括lf3-1和/或lf4-1；

6、其中，lf3-1的结构为r1为-so3或第一支链，第一支链由→4)-α-l-fucp-(1→组成，r2为-so3或第二支链，第二支链由→2,3)-β-d-manp-(1→和β-d-galp-(1→交替组成，lf3-1中的硫酸根含量为26.3％，lf3-1的重均分子量为305.3kda；

7、lf4-1的结构为r3为-so3或第三支链，第三支链由→4)-α-l-fucp-(1→组成，r4为-so3或第四支链，第四支链由→2,4)-β-d-manp-(1→和β-d-galp-(1→交替组成，lf4-1中的硫酸根含量为32.7％，lf4-1的重均分子量为182.1kda。

8、在一些可能的实现方式中，lf3-1中的甘露糖残基、半乳糖残基和岩藻糖残基的摩尔质量比为3.59：11.97：14.25；

9、lf4-1中的甘露糖残基、半乳糖残基和岩藻糖残基的摩尔质量比为2.21：13.11：7.13。

10、在一些可能的实现方式中，lf3-1由摩尔质量比为3.59：1.00：2.41：11.97：14.25的甘露糖残基、氨基葡萄糖残基、葡萄糖醛酸残基、半乳糖残基和岩藻糖残基组成；

11、lf4-1由摩尔质量比为2.21：1.00：1.00：1.25：13.11：7.13的甘露糖残基、氨基葡萄糖残基、葡萄糖醛酸残基、鼠李糖残基、半乳糖残基和岩藻糖残基组成。

12、在一些可能的实现方式中，海带岩藻聚糖包括质量比为0.8-1.2：0.8-1.2的lf3-1和lf4-1。

13、在一些可能的实现方式中，lf3-1和lf4-1的质量比为1：1。

14、一种上述的海带岩藻聚糖的制备方法，包括如下步骤：

15、(1)将海带粉和含60-80℃的0.2-0.6wt％十二烷基硫酸钠的水溶液按料液质量体积比1：20-40混合，静置2-4h，之后依次进行离心、收集上清液和浓缩，得到第一浓缩液；

16、(2)将第一浓缩液和10wt％的氯化钙以3-4：1的体积比混合，之后过滤，收集并浓缩滤液，得到第二浓缩液；

17、(3)将第二浓缩液与无水乙醇混合，得到第一混合溶液，其中，无水乙醇的添加量为第一混合溶液的总体积的20-30％，搅拌直至出现白色颗粒沉淀，第一混合溶液颜色变浅，静置，收集上清液，向上清液中加入无水乙醇，得到第二混合溶液，其中，无水乙醇的添加量为第二混合溶液的总体积的50-60％，搅拌直至出现白色颗粒沉淀，第二混合溶液颜色变浅，静置，收集沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀，加水溶解沉淀，然后经过透析和冻干得到海带岩藻聚糖粗品，透析的截留分子量为8-14kda；

18、(4)将海带岩藻聚糖粗品在deae-52纤维素柱中用0.5mol/l、0.7mol/l和1.0mol/l的nacl溶液依次进行等度洗脱，收集0.7mol/l和/或1.0mol/l的nacl溶液洗脱得到的组分，得到lf3和/或lf4；

19、(5)将lf3和/或lf4在sephadex g-200层析柱中用0.5mol/l的nacl溶液洗脱，得到lf3-1和/或lf4-1。

20、在一些可能的实现方式中，步骤(3)中将第二浓缩液与无水乙醇混合的操作中，无水乙醇的添加量为第二浓缩液和无水乙醇的总体积的25％。

21、进一步优选地，步骤(3)中收集上清液，加入无水乙醇的操作中，无水乙醇的添加量为上清液和无水乙醇总体积的56％。

22、再进一步优选地，海带粉由海带粉粗品经过脱脂处理得到，脱脂处理的操作为：将海带粉粗品用体积分数90％-98％乙醇在82-90℃下回流3.5-4.5h，之后干燥，得到海带粉。

23、一种减肥降脂组合物，其有效成分为上述的海带岩藻聚糖。

24、上述的海带岩藻聚糖在制备减肥降脂组合物中的应用。

25、本发明至少具有如下有益效果：

26、1.本发明分离提取的海带岩藻聚糖可有效改善血脂水平和胰岛素抵抗水平，促进脂质氧化基因(ppar-α、ppar-γ、cpt-1fas、lxr和srebp-1c)和糖代谢基因(irs1和glut4)表达，进而发挥治疗和改善肥胖及相关疾病的作用。

27、2.本发明提供的海带岩藻聚糖的制备方法首先对海带粉进行热水浸提并通过cacl2沉淀除去褐藻胶杂质，之后通过不同浓度的乙醇分级沉淀来获得目标化合物，操作简单，适合工业生产。

28、3.通过deae-52纤维素柱和不同浓度的nacl的配合可以快速分离获得不同结构的高纯度海带岩藻聚糖组分。

技术特征：

1.一种海带岩藻聚糖，其特征在于，包括lf3-1和/或lf4-1；

2.如权利要求1所述的海带岩藻聚糖，其特征在于，所述lf3-1中的甘露糖残基、半乳糖残基和岩藻糖残基的摩尔质量比为3.59：11.97：14.25；

3.如权利要求1所述的海带岩藻聚糖，其特征在于，所述lf3-1由摩尔质量比为3.59：1.00：2.41：11.97：14.25的甘露糖残基、氨基葡萄糖残基、葡萄糖醛酸残基、半乳糖残基和岩藻糖残基组成；

4.如权利要求1-3中任意一项所述的海带岩藻聚糖，其特征在于，包括质量比为0.8-1.2：0.8-1.2的所述lf3-1和所述lf4-1。

5.如权利要求4所述的海带岩藻聚糖，其特征在于，所述lf3-1和所述lf4-1的质量比为1：1。

6.一种如权利要求1-5中任意一项所述的海带岩藻聚糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述将所述第二浓缩液与无水乙醇混合的操作中，无水乙醇的添加量为所述第二浓缩液和无水乙醇的总体积的25％；

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述海带粉由海带粉粗品经过脱脂处理得到，所述脱脂处理的操作为：将所述海带粉粗品用体积分数90％-98％乙醇在82-90℃下回流3.5-4.5h，之后干燥，得到所述海带粉。

9.一种减肥降脂组合物，其特征在于，其有效成分包括权利要求1-5中任意一项所述的海带岩藻聚糖。

10.权利要求1-5中任意一项所述的海带岩藻聚糖在制备减肥降脂组合物中的应用。

技术总结本发明公开了一种海带岩藻聚糖及其制备方法和应用，海带岩藻聚糖包括LF3‑1和/或LF4‑1；LF3‑1的主链由→3)‑α‑L‑Fucp‑(1→和→3)‑β‑D‑Galp‑(1→交替连接组成，其中，LF3‑1的主链上的岩藻糖残基的C‑4位硫酸化或连接有第一支链，第一支链由→4)‑α‑L‑Fucp‑(1→组成，LF3‑1的主链上的半乳糖残基的C‑6位上硫酸化或连接有第二支链，第二支链由→2,3)‑β‑D‑Manp‑(1→和β‑D‑Galp‑(1→组成，LF3‑1中的硫酸根含量为26.3％，LF3‑1的重均分子量为305.3kDa；LF4‑1的主链由→3)‑α‑L‑Fucp‑(1→和→6)‑β‑D‑Galp‑(1→交替连接组成；LF4‑1的主链上的岩藻糖在C‑4位硫酸化或连接有第三支链，第三支链由→4)‑α‑L‑Fucp‑(1→组成；LF4‑1的主链上的半乳糖的C‑3位硫酸化或连接有第四支链，第四支链由→2,4)‑β‑D‑Manp‑(1→和β‑D‑Galp‑(1→组成，LF4‑1中的硫酸根含量为32.7％，LF4‑1的重均分子量为182.1kDa，可有效改善血脂和胰岛素抵抗水平，促进脂质氧化和糖代谢基因表达，进而发挥减肥降脂的作用。技术研发人员：叶静,肖美添,林琦,郑林静,杨宇成,黄雅燕,张娜受保护的技术使用者：华侨大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18