大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株及其应用的制作方法

本发明涉及病毒领域，具体涉及大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株及其应用。

背景技术：

1、大口黑鲈弹状病毒(micropterus salmoides rhabdovirus，msrv)可以引起鳜鱼，鲈鱼等名优鱼类爆发性死亡，从苗种阶段到养殖过程中都极易感染，致死率可高达90％以上，尤其苗种感染致死率几乎100％，无有效的防治方法，且流行范围越来越广，给养殖业带来巨大的经济损失，已成为养殖发展的主要瓶颈之一。

2、目前，大口黑鲈弹状病毒缺乏商品化的弱毒疫苗，灭活疫苗引起的抗体水平持续时间短，引起机体的不良应激反应等弊端，弱毒疫苗接种后在体内仍能进行生长繁殖，产生免疫力快而强，可激发机体对病原的持久免疫力，而且免疫途径多样化，例如浸泡、滴鼻、点眼等。

3、前期的疫苗研究免疫途经主要为注射疫苗，操作繁杂，使用成本增加，不利于推广使用；此外，注射疫苗需要鱼体长到5cm左右的时候才可以操作，而对于幼苗和苗种阶段无法使用，而弹状病毒对于幼苗和苗种的危害极大，死亡率极高；因此开发有效的浸泡免疫有重要的应用前景。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供一种大口黑鲈弹状病毒病毒株，该病毒株是一株弱毒株并具有良好的免疫原性，可以作为弹状病毒弱毒疫苗的候选株。

2、本发明的目的在于提供一株大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株及其应用。

3、本发明所采取的技术方案是：

4、一株大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株，命名为鲈弹状病毒msrv-0509，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v 202412。

5、包含上述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株的病毒液也属于本发明的保护范围。

6、上述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株在制备抗鱼类弹状病毒疫苗中的应用也属于本发明的保护范围。

7、进一步地，所述鱼类为鲈鱼、鳜鱼、乌鳢、笋壳鱼中的至少一种。

8、上述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株在制备防治鱼类弹状病毒病制剂中的应用也属于本发明的保护范围。

9、本发明还提供一种抗大口黑鲈弹状病毒疫苗，所述疫苗的活性成分包含上述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株。

10、进一步地，所述疫苗为弱毒疫苗。

11、进一步地，所述疫苗为浸泡免疫疫苗。

12、本发明还提供上述的抗大口黑鲈弹状病毒疫苗的制备方法，包括步骤：将权利要求1所述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株接种至cpb细胞进行培养，经过5轮蚀斑纯化得到纯化克隆株，然后提取病毒液。

13、进一步地，所述培养采用的培养基为含2％低熔点琼脂糖、5％ fbs的l15培养基。

14、本发明还提供一种防治大口黑鲈弹状病毒的制剂，该制剂中含有上述的大口黑鲈弹状病毒病毒株。

15、本发明提供的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株已进行了专利保藏，保藏信息如下：

16、参椐的生物材料(株)：鲈弹状病毒msrv-0509

17、分类命名：rhabdovirus

18、保藏日期：2024年2月28日

19、保藏编号：cctcc no:v202412

20、保藏机构：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心

21、地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(第一附小校校内正门对面)。

22、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

23、本发明通过从自然界分离获得一株大口黑鲈弹状病毒株msrv-0509，通过蚀斑纯化，并进行生物学特性研究证实该msrv-0509株为一株弱毒株并具有良好的免疫原性，具有免疫持久、效果好、安全可靠等优点；可以作为大口黑鲈弹状病毒弱毒疫苗的候选株。免疫研究结果显示腹腔注射和浸泡免疫都可以起有效的保护作用，浸泡免疫免疫效果更好，攻毒后也可以有效的保护幼苗，为开发有效的弹状病毒浸泡疫苗提供了技术支持。

技术特征：

1.大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株，其特征在于，命名为鲈弹状病毒msrv-0509，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:v202412。

2.权利要求1所述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株在制备抗鱼类弹状病毒疫苗中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，所述鱼类为鲈鱼、鳜鱼、乌鳢、笋壳鱼中的至少一种。

4.权利要求1所述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株在制备防治鱼类弹状病毒病制剂中的应用。

5.一种抗大口黑鲈弹状病毒疫苗，其特征在于，所述疫苗的活性成分包含权利要求1所述的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株。

6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为弱毒疫苗。

7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为浸泡免疫疫苗。

8.根据权利要求7所述的疫苗的制备方法，其特征在于，包括步骤：

9.根据权利要求8所述的疫苗的制备方法，其特征在于，所述培养采用的培养基为含2％低熔点琼脂糖、5％fbs的l15培养基。

10.一种防治大口黑鲈弹状病毒的制剂，其特征在于，该制剂中含有权利要求1所述的大口黑鲈弹状病毒病毒株。

技术总结本发明涉及病毒领域，具体涉及大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株及其应用。提供的大口黑鲈弹状病毒弱毒病毒株，保藏编号为CCTCC NO：V202412。该病毒株具有弱毒性，且具有良好的免疫原性，可用于大口黑鲈弹状病毒弱毒疫苗的开发，对鱼类弹状病毒防治具有重要意义。技术研发人员：梁红茹,孔明慧,付小哲,罗霞,李宁求,林强,牛银杰,马福宝受保护的技术使用者：中国水产科学研究院珠江水产研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/18