微生物组合物及其促生用途

本发明属于微生物菌肥领域，具体是微生物组合物及其促生用途。

背景技术：

1、微生物菌肥属于第三代农业肥料，天然无污染，富含微生物菌，能维持土壤养分平衡和酸碱平衡；微生物菌肥是指一类含有活性益生菌的特定制品，在农林业生产中能够发挥相应的肥料效应，起到调节养分平衡、促生增产、改善生态和抗虫抗病的功效。近年来，施用微生物菌肥已成为保障产收的重要措施。

2、但是不同农作物对微生物菌肥的需求不同，需要根据生产需求调整菌肥的特性；葡萄果实的生长和品质主要受品种、气候环境和农艺措施的影响，在栽培过程中，若管理粗放、施肥过量和肥料配比不科学等，不仅会严重影响葡萄果实的生长和品质，还会对生态环境造成极大破坏；因此，有必要提出一种微生物组合物及其促生用途。

技术实现思路

1、本发明的目的是提出一种微生物组合物及其促生用途，通过枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌制备微生物菌肥，能够活化土壤中固定的养分，提高土壤肥力，从而提高葡萄的果实品质和改善葡萄的生长状况；利用复合菌剂中不同菌剂的好氧情况，通过释放二氧化碳来促进或抑制其繁殖状态，影响其活动程度，增加其在不同时间段的繁殖速度，既可以防止过度竞争，也可防止复合菌剂施用过多且复合菌剂大量同时作用时，对葡萄生长和品质造成不好的影响。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：微生物组合物及其促生用途，包括由多种活菌复合制备的微生物菌肥；活菌种类包括枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌；其中，枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的活菌比例为2～3：1～2：1～2。

3、进一步，微生物菌肥的制备方法包括以下步骤：

4、s1：枯草芽孢杆菌菌剂的制备；

5、s1-1：活化枯草芽孢杆菌后，将枯草芽孢杆菌菌株接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，在37℃、150r/min下振荡培养24h，完成枯草芽孢杆菌种子液的制备；

6、s1-2：将培养好的枯草芽孢杆菌种子液以1％的移种量转入发酵培养基一中，在37℃、100～500r/min下培养48h，使活菌含量达到2.5×1010cfu/ml；将培养好的固态发酵物放于50℃条件下烘干，制得枯草芽孢杆菌菌剂；

7、s2：纳豆芽孢杆菌菌剂的制备；

8、s2-1：活化纳豆芽孢杆菌后，将纳豆芽孢杆菌菌株接种到种子液培养基中，在30℃、180r/min下振荡培养24h，完成纳豆芽孢杆菌种子液的制备；

9、s2-2：将纳豆芽孢杆菌种子液以1％的移种量转入发酵培养基二中，在31℃、200～400r/min下培养48h，使活菌含量达到3.0×1011cfu/ml；将培养好的固态发酵物放于50℃条件下烘干，制得纳豆芽孢杆菌菌剂；

10、s3：巨大芽孢杆菌菌剂的制备；

11、s3-1：活化巨大芽孢杆菌后，将巨大芽孢杆菌菌株接种到肉汤培养基中，在34℃、250r/min下培养22h，完成巨大芽孢杆菌种子液的制备；

12、s3-2：将培养好的巨大芽孢杆菌种子液以1％的移种量转入发酵培养基三中，在30℃、150～250r/min下培养22h，使活菌含量达到3.2×109cfu/ml；将培养好的固态发酵物放于50℃条件下烘干，制得巨大芽孢杆菌菌剂；

13、s4：复合菌剂制备；将枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌按2～3：1～2：1～2的比例混合均匀，并在28℃条件下干燥至含水率30％以下，获得复合菌剂；

14、s5：缓释骨架制备；缓释骨架包括碳酸氢钠和柠檬酸的混合物，并由明胶包裹而成。

15、s6：微生物菌肥制备；

16、s6-1：混合破碎花生粕、玉米粉、钙镁磷肥、菜籽饼、黄豆粉、麸皮和腐熟剂；

17、s6-2：将复合菌剂加入物料中，自然条件发酵5个月，温度控制在30～45℃，发酵好的物料经烘干机烘干脱水后粉碎过筛；加入缓释骨架，混合得到复合微生物菌肥。

18、进一步，s1-1中，活化枯草芽孢杆菌的方法为：将枯草芽孢杆菌接种至lb培养基中，在37℃、150r/min下振荡培养24h。

19、进一步，s1-2中，发酵培养基一的组分为1％麦麸、0.4％玉米粉、0.2％豆粕、0.3％米糠、0.1％磷酸二氢钾和0.01％碳酸钙，ph调为7.0。

20、进一步，s2-1中，活化纳豆芽孢杆菌的方法为：将纳豆芽孢杆菌接种至pda培养基中，在30℃、150r/min下振荡培养24h。

21、进一步，s2-2中，发酵培养基二的成分为2％酵母浸粉、2％麦麸、1％玉米粉、0.3％碳酸钙、0.03％氯化钠、1％酵母粉和4％大豆蛋白粉，ph调为7.0。

22、进一步，s3-1中，活化巨大芽孢杆菌的方法为：将巨大芽孢杆菌接种至tsa培养基中，在30℃、150r/min下振荡培养22h。

23、进一步，s3-2中，发酵培养基三的成分为0.25％麦芽糖、0.25％玉米粉、0.25％黄豆粉、0.5％胰蛋白胨、0.05％氯化钙和0.05％硫酸锰，ph调为7.0。

24、进一步，微生物组合物用做葡萄用微生物菌肥。

25、采用上述方案后实现了以下原理以及有益效果：

26、(1)本发明通过枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌制备微生物菌肥，在枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌联合作用下，能够活化土壤中固定的养分，改善土壤的理化性质，提高土壤肥力，改善作物的营养物质，有利于土壤团粒结构的形成，降低土壤腐败菌和致病菌数量，从而提高葡萄的果实品质和改善葡萄的生长状况；本发明利用复合菌剂中不同菌剂的好氧情况，通过释放二氧化碳来促进或抑制其繁殖状态，影响其活动程度，增加其在不同时间段的繁殖速度，既可以防止过度竞争，也可防止复合菌剂施用过多且复合菌剂大量同时作用时，对葡萄生长和品质造成不好的影响。

27、(2)本发明在施用微生物菌肥一段时间后，在下雨或浇水过多的情况下，部分明胶吸收水后膨胀软化，释放其内部的碳酸氢钠和柠檬酸；碳酸氢钠和柠檬酸与水发生反应后迅速释放大量二氧化碳气体，使该段时间内的土壤环境内二氧化碳占比较多，土壤内部处于少氧状态；由于枯草芽孢杆菌属于厌氧菌，纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌为好氧菌，在该条件下，枯草芽孢杆菌大量繁殖，纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的繁殖受到抑制；由于枯草芽孢杆菌抗逆能力极强，具有较强的抗生作用，能够抑制植物病原菌，还能够诱发植物自身抗病机制从而增强植物的抗病性能的作用。当二氧化碳气体从土壤中释放后，土壤内的氧气占比较多，此时的纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌大量繁殖，纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌具有较强的培肥能力，从而可提高化肥的利用率，抑制葡萄对硝态氮、重金属和农药的吸收，达到净化和修复土壤，降低葡萄病害发生率的目的。

技术特征：

1.微生物组合物，其特征在于：包括由多种活菌复合制备的微生物菌肥；活菌种类包括枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌；其中，枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的活菌比例为2～3：1～2：1～2。

2.根据权利要求1所述的微生物组合物，其特征在于：微生物菌肥的制备方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的微生物组合物，其特征在于：s1-1中，活化枯草芽孢杆菌的方法为：将枯草芽孢杆菌接种至lb培养基中，在37℃、150r/min下振荡培养24h。

4.根据权利要求3所述的微生物组合物，其特征在于：s1-2中，发酵培养基一的组分为1％麦麸、0.4％玉米粉、0.2％豆粕、0.3％米糠、0.1％磷酸二氢钾和0.01％碳酸钙，ph调为7.0。

5.根据权利要求4所述的微生物组合物，其特征在于：s2-1中，活化纳豆芽孢杆菌的方法为：将纳豆芽孢杆菌接种至pda培养基中，在30℃、150r/min下振荡培养24h。

6.根据权利要求5所述的微生物组合物，其特征在于：s2-2中，发酵培养基二的成分为2％酵母浸粉、2％麦麸、1％玉米粉、0.3％碳酸钙、0.03％氯化钠、1％酵母粉和4％大豆蛋白粉，ph调为7.0。

7.根据权利要求6所述的微生物组合物，其特征在于：s3-1中，活化巨大芽孢杆菌的方法为：将巨大芽孢杆菌接种至tsa培养基中，在30℃、150r/min下振荡培养22h。

8.根据权利要求7所述的微生物组合物，其特征在于：s3-2中，发酵培养基三的成分为0.25％麦芽糖、0.25％玉米粉、0.25％黄豆粉、0.5％胰蛋白胨、0.05％氯化钙和0.05％硫酸锰，ph调为7.0。

9.微生物组合物的促生用途，其特征在于：根据权利要求1-8任意一项所述的微生物组合物其促生用途为用做葡萄用微生物菌肥。

技术总结本发明公开了微生物菌肥领域的微生物组合物及其促生用途，包括由多种活菌复合制备的微生物菌肥；活菌种类包括枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌；其中，枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的活菌比例为2～3：1～2：1～2。通过枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌制备微生物菌肥，能够活化土壤中固定的养分，提高土壤肥力，从而提高葡萄的果实品质和改善葡萄的生长状况；利用复合菌剂中不同菌剂的好氧情况，通过释放二氧化碳来促进或抑制其繁殖状态，影响其活动程度，增加其在不同时间段的繁殖速度，既可以防止过度竞争，也可防止复合菌剂施用过多且复合菌剂大量同时作用时，对葡萄生长和品质造成不好的影响。技术研发人员：曾立容受保护的技术使用者：安顺学院技术研发日：技术公布日：2024/6/5