靶向BCMA的工程化免疫细胞及其用途的制作方法

本发明涉及免疫治疗领域，更具体地涉及一种靶向bcma的工程化免疫细胞及其用途。

背景技术：

1、多发性骨髓瘤(mm)是一种恶性浆细胞肿瘤，其肿瘤细胞起源于骨髓中的浆细胞，而浆细胞是b淋巴细胞发育到最终功能阶段的细胞。多发性骨髓瘤基本是一个无法治愈的疾病，具有高发病率及高致死率的特征。在2017年的统计数据中，美国有3万例新诊断出来的多发性骨髓瘤患者，而可能12000例将面临死亡。目前多发性骨髓瘤常见疗法有细胞毒药物治疗，蛋白酶抑制剂(硼替佐米等)、来那度胺、单克隆抗体及皮质类固醇等。但是都是部分有效，不能持久缓解，复发的几率很大。因此，多发性骨髓瘤疗法的改进就显得尤为重要。

2、因此，本领域急切地需要一种有效、复发机率小且安全的多发性骨髓瘤疗法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种靶向bcma的工程化免疫细胞及其用途。

2、本发明的另一目的是提供一种同时靶向cd19和bcma的工程化免疫细胞及其用途。

3、在本发明的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体(car)或tcr，所述car或tcr的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:9所示的抗体重链可变区，和seq id no:10所示的抗体轻链可变区。

4、在另一优选例中，所述scfv还包含位于重链可变区和轻链可变区之间的连接肽。

5、在另一优选例中，所述scfv如下式a或式b所示：

6、vh-vl,(a)；vl-vh,(b)

7、式中，vh为所述抗体重链可变区；vl为所述抗体轻链可变区；“-”为连接肽或肽键。

8、在另一优选例中，所述的vh和vl之间的连接肽为1-4个连续的seq id no:7(ggggs)所示的序列，较佳地1-4个，更佳地3-4个。

9、在另一优选例中，所述car的结构如下式i所示：

10、l-scfv-h-tm-c-cd3ζ(i)

11、式中，

12、各“-”独立地为连接肽或肽键；

13、l为无或信号肽序列；

14、h为无或铰链区；

15、tm为跨膜结构域；

16、c为共刺激信号分子；

17、cd3ζ为源于cd3ζ的胞浆信号传导序列。

18、在本发明的第二方面，提供了一种双特异性car或tcr，所述双特异性car或tcr靶向bcma和第一靶点，

19、其中，所述双特异性car中的靶向bcma的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:9所示的抗体重链可变区，和seq id no:10所示的抗体轻链可变区。

20、并且，所述的第一靶点选自下组：

21、cd138、kappa light chain、nkg2d-ligands、taci、gprc5d、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd25、cd28、cd30、cd33、cd38、cd40、cd44v6、cd47、cd52、cd56、cd57、cd58、cd79b、cd80、cd86、cd81、cd123、cd133、cd137、cd151、cd171、cd276、cll1、b7h4、bcma、vegfr-2、egfr、gpc3、pmsa、ceacam6、c-met、egfrviii、erbb2/her2、erbb3、her-2、her3、erbb4/her-4、epha2、igf1r、gd2、o-acetyl gd2、o-acetyl gd3、ghrhr、ghr、flt1、kdr、flt4、flt3、cea、ca125、ctla-4、gitr、btla、tgfbr1、tgfbr2、tgfbr1、il6r、gp130、lewis、tnfr1、tnfr2、pd1、pd-l1、pd-l2、psca、hvem、mage-a、msln、ny-eso-1、psma、rank、rorl、tnfrsf4、tweak-r、ltpr、lifrp、lrp5、muc1、muc16、tcrα、tcrβ、tlr7、tlr9、ptch1、wt-1、robol、frizzled、ox40、notch-1-4、april、cs1、mage3、claudin 18.2、folate receptorα、folate receptorβ、gpc2、cd70、baff-r、trop-2、或其组合。在另一优选例中，所述双特异性car或tcr中包含靶向cd19的抗原结合结构域。

22、在另一优选例中，所述的第一靶点为cd19，并且所述双特异性car中的靶向cd19的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:11所示的抗体重链可变区，和seq id no:12所示的抗体轻链可变区。

23、在另一优选例中，所述的第一靶点为cd19，并且所述双特异性car中的靶向cd19的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:21-30中任一所示的抗体重链可变区，和seq idno:31-36中任一所示的抗体轻链可变区。

24、具体序列如下所示

25、seq id no:21所示的cd19抗体重链可变区(h9)

26、qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewlgviwgsettyynsalksrltiskdtsksqvslklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgtlvtvss

27、seq id no:22所示的cd19抗体重链可变区(h1)

28、qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewigviwgsettyynsalksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycarhyyyggsyamdywgqgttvtvss

29、seq id no:23所示的cd19抗体重链可变区(h8)

30、qvklqesgpglvkpsetlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewigviwgsettyynsalksrvtiskdtsksqvflklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgtlvtvss

31、seq id no:24所示的cd19抗体重链可变区(h10)

32、qvklqesgpglvkpsetlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewlgviwgsettyynsalksrltiskdtsksqvflklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgtlvtvss

33、seq id no:25所示的cd19抗体重链可变区(h2)

34、qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewigviwgsettyynsalksrvtiskdtsknqvslklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgttvtvss

35、seq id no:26所示的cd19抗体重链可变区(h3)

36、qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewigviwgsettyynsalksrltiskdtsknqvslklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgttvtvss

37、seq id no:27所示的cd19抗体重链可变区(h4)

38、qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewlgviwgsettyynsalksrltiskdtsknqvslklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgttvtvss

39、seq id no:28所示的cd19抗体重链可变区(h5)

40、qvqlqesgpglvkpsqtlsvtctvsgvslpdygvswirqppgkglewlgviwgsettyynsalksrltiskdtsknqvslklssltaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgttvtvss

41、seq id no:29所示的cd19抗体重链可变区(h6)

42、qvqlqesgpglvkpsqtlsvtctvsgvslpdygvswirqppgkglewlgviwgsettyynaalksrltiskdtsknqvslklssltaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgttvtvss

43、seq id no:30所示的cd19抗体重链可变区(h7)

44、qvklqesgpglvkpsetlsltctvsgvslpdygvswirqppgkglewlgviwgsettyynsalksrltiskdtsknqfslklssvtaadtavyycakhyyyggsyamdywgqgtlvtvss

45、seq id no:31所示的cd19抗体轻链可变区(l5)

46、diqmtqspsslsasvgdrvtiscrasqdiskylnwyqqkpgkapklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytftisslqpediatyfcqqgntlpytfgggtkleik

47、seq id no:32所示的cd19抗体轻链可变区(l1)

48、diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiskylnwyqqkpgkapklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycqqgntlpytfgggtkleik

49、seq id no:33所示的cd19抗体轻链可变区(l6)

50、diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiskylnwyqqkpggavklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytftisslqpediatyfcqqgntlpytfgggtkleik

51、seq id no:34所示的cd19抗体轻链可变区(l2)

52、diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiskylnwyqqkpgkapklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytftisslqpediatyycqqgntlpytfgggtkleik

53、seq id no:35所示的cd19抗体轻链可变区(l3)

54、diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiskylnwyqqkpgkapklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpediatyycqqgntlpytfgggtkleik

55、seq id no:36所示的cd19抗体轻链可变区(l4)

56、diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdiskylnwyqqkpgkapklliyhtsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpediatyycqqantlpytfgggtkleik

57、在另一优选例中，所述双特异性car同时包含靶向所述第一靶点的抗原结合结构域和靶向所述bcma的抗原结合结构域。

58、在另一优选例中，所述双特异性car的结构如下式ii所示：

59、l-scfv1-i-scfv2-h-tm-c-cd3ζ(ii)

60、式中，

61、各“-”独立地为连接肽或肽键；

62、l为无或信号肽序列；

63、i为柔性接头；

64、h为无或铰链区；

65、tm为跨膜结构域；

66、c为共刺激信号分子；

67、cd3ζ为源于cd3ζ的胞浆信号传导序列；

68、scfv1和scfv2两者中一个为靶向第一靶点的抗原结合结构域，另一个为靶向bcma的抗原结合结构域。

69、在另一优选例中，所述的scfv1和scfv2可以是各自独立的，也可以是串联的，或者是loop的结构。

70、在另一优选例中，所述的scfv1为靶向第一靶点的抗原结合结构域，所述scfv2为靶向bcma的抗原结合结构域。

71、在另一优选例中，所述的scfv1为靶向bcma的抗原结合结构域，所述scfv2为靶向第一靶点的抗原结合结构域。

72、在另一优选例中，所述柔性接头i的序列包含1-6个，较佳地为3-5个连续的seq idno:7(ggggs)所示的序列。

73、在另一优选例中，所述柔性接头i具有如seq id no:17、18或19所示的序列。

74、在另一优选例中，所述靶向第一靶点的抗原结合结构域的结构如下式c或式d所示：

75、vl1-vh1(c)；vh1-vl1(d)

76、其中，vl1为抗第一靶点抗体轻链可变区；vh1为抗第一靶点抗体重链可变区；“-”为连接肽或肽键。

77、在另一优选例中，所述靶向cd19的抗原结合结构域的结构如下式c或式d所示：

78、vl1-vh1(c)；vh1-vl1(d)

79、其中，vl1为抗cd19抗体轻链可变区；vh1为抗cd19抗体重链可变区；“-”为连接肽或肽键。

80、在另一优选例中，所述靶向cd19的抗原结合结构域包括单克隆号fmc63抗体的重链可变区和轻链可变区。

81、在另一优选例中，所述抗cd19抗体重链可变区具有如seq id no:11所示的氨基酸序列。

82、在另一优选例中，所述抗cd19抗体轻链可变区具有如seq id no:12所示的氨基酸序列。

83、在另一优选例中，所述靶向bcma的抗原结合结构域的结构如下式a或式b所示：

84、vh-vl,(a)；vl-vh,(b)

85、式中，vh为所述抗体重链可变区；vl为所述抗体轻链可变区；“-”为连接肽或肽键。

86、在另一优选例中，所述scfv1包含如seq id no:11所示的抗体重链可变区，和如seq id no:12所示的抗体轻链可变区；且所述scfv2包含如seq id no:9所示的抗体重链可变区，和如seq id no:10所示的抗体轻链可变区。

87、在另一优选例中，所述scfv1包含如seq id no:9所示的抗体重链可变区，和如seqid no:10所示的抗体轻链可变区；且所述scfv2包含如seq id no:11所示的抗体重链可变区，和如seq id no:12所示的抗体轻链可变区。

88、在另一优选例中，所述的scfv1和/或scfv2为鼠源、人源、人源和鼠源嵌合、或者全人源化的单链抗体可变区片段。

89、在另一优选例中，所述双特异性car的结构如下式iii或iii’所示：

90、l-vl3-scfv3-vh3-h-tm-c-cd3ζ(iii)

91、l-vh3-scfv3-vl3-h1-tm-c-cd3ζ(iii’)

92、式中，

93、各“-”独立地为连接肽或肽键；

94、元件l、h、tm、c和cd3ζ如上所述；

95、scfv3为靶向bcma的抗原结合结构域，vh3为抗所述第一靶点抗体重链可变区，且vl3为抗所述第一靶点抗体轻链可变区；或者scfv3为靶向所述第一靶点的抗原结合结构域，vh3为抗bcma抗体重链可变区，且vl3为抗bcma抗体轻链可变区。

96、在另一优选例中，所述scfv3包括seq id no:9所示的抗体重链可变区，和seq idno:10所示的抗体轻链可变区。

97、在另一优选例中，所述vh3具有如seq id no:9所示的抗体重链可变区，和vl3具有如seq id no:10所示的抗体轻链可变区。

98、在另一优选例中，所述scfv3包含如seq id no:11所示的抗体重链可变区，和如seq id no:12所示的抗体轻链可变区；且所述vh3具有如seq id no:9所示的抗体重链可变区，和vl3具有如seq id no:10所示的抗体轻链可变区。

99、在另一优选例中，所述scfv3包含如seq id no:9所示的抗体重链可变区，和如seqid no:10所示的抗体轻链可变区；且所述vh3具有如seq id no:11所示的抗体重链可变区，和vl3具有如seq id no:12所示的抗体轻链可变区。

100、在另一优选例中，所述car的结构如图1所示。

101、在另一优选例中，所述的l为选自下组的蛋白的信号肽：cd8、cd28、gm-csf、cd4、cd137、或其组合。

102、在另一优选例中，所述l为cd8来源的信号肽。

103、在另一优选例中，所述l具有如seq id no:16或1所示的氨基酸序列。

104、在另一优选例中，所述的h为选自下组的蛋白的铰链区：cd8、cd28、cd137、或其组合。在另一优选例中，所述的h各自独立地为cd8来源的铰链区。

105、在另一优选例中，所述h具有如seq id no:8所示的氨基酸序列。

106、在另一优选例中，所述的tm为选自下组的蛋白的跨膜区：cd28、cd3 epsilon、cd45、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、或其组合。在另一优选例中，所述的tm各自独立地为cd8或cd28来源的跨膜区。在另一优选例中，所述cd8来源的跨膜区具有如seq id no:7所示的氨基酸序列。

107、在另一优选例中，所述cd28来源的跨膜区具有如seq id no:6所示的氨基酸序列。

108、在另一优选例中，所述的c为选自下组的蛋白的共刺激信号分子：ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd70、cd134、4-1bb(cd137)、pd1、dap10、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、nkg2d、gitr、tlr2、或其组合。在另一优选例中，所述的c为cd28和/或4-1bb来源的共刺激信号分子。

109、在另一优选例中，所述4-1bb来源的共刺激信号分子具有如seq id no:5所示的氨基酸序列。

110、在另一优选例中，所述cd28来源的共刺激信号分子具有如seq id no:4所示的氨基酸序列。

111、在另一优选例中，所述cd3ζ具有如seq id no:3所示的氨基酸序列。

112、在另一优选例中，所述car(优选地c端或n端)还包括细胞自杀元件。

113、在另一优选例中，所述细胞自杀元件与所述car或所述双特异性car的l或cd3ζ通过t2a连接。

114、在本发明的第三方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码本发明第一所述的car或tcr或第二方面所述的双特异性car或tcr。

115、在本发明的第四方面，提供了一种载体，所述的载体含有本发明第三方面所述的核酸分子。

116、在另一优选例中，所述的载体选自下组：dna、rna、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体、转座子、或其组合。

117、在另一优选例中，所述载体为慢病毒载体。

118、在本发明的第五方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本发明第四方面所述的载体、或染色体中整合有外源的本发明第三方面所述的核酸分子、或表达本发明第一所述的car或tcr或第二方面所述的双特异性car或tcr。

119、在本发明的第六方面，提供了一种工程化的免疫细胞，所述的免疫细胞含有本发明第四方面所述的载体、或染色体中整合有外源的本发明第三方面所述的核酸分子、或表达本发明第一方面所述的car或tcr或第二方面所述的双特异性car或tcr。

120、在另一优选例中，所述免疫细胞具有选自下组的一种或多种特征：

121、(a)所述免疫细胞的pd-1基因表达是被沉默的；

122、(b)所述免疫细胞为t细胞，且所述t细胞的tcr基因表达是被沉默的；和

123、(c)所述免疫细胞表达外源性细胞自杀元件；

124、(d)所述免疫细胞表达或分泌pd-1抗体、pd-l1抗体、cd47抗体、tim3抗体、lag3抗体、tigit抗体、ox40抗体、icos抗体、il7、cxcl19、il21、il15、il2、il18、或其组合；和

125、(e)所述免疫细胞的细胞因子相关信号通路被增强，其中所述细胞因子选自下组：il7、cxcl19、il21、il15、il2、il18、或其组合。

126、在另一优选例中，所述的工程化的免疫细胞选自下组：

127、(i)嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)；或

128、(ii)嵌合抗原受体nk细胞(car-nk细胞)。

129、在另一优选例中，所述免疫细胞表达外源性细胞自杀元件。

130、在另一优选例中，所述的免疫细胞中car与细胞自杀元件共表达。

131、在另一优选例中，所述的car与细胞自杀元件通过自剪切元件相连接。

132、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件位于car的n端或c端。

133、在另一优选例中，所述的自剪切元件包括2a序列或ires序列，优选为：p2a和t2a。

134、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件选自下组：hsv-tk、icasp9、δcd20、mtmpk、δcd19、rqr8、egfrt、或其组合。

135、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件的结构如下式iv所示：

136、l2-d-f(iv)

137、式中，

138、各“-”独立地为连接肽或肽键；

139、l2为任选的信号肽序列；

140、d为自杀开关元件；

141、f为跨膜元件。

142、在另一优选例中，所述的信号肽为来源gm-csfr的信号肽。

143、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件选自下组：截短的表皮生长因子受体(egfrt)、截短的cd19(cd19t)基因、诱导的胱天蛋白酶9基因(icasp9)、hsv-tk、δcd20、mtmpk、或其组合。

144、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件为egfrt。

145、在另一优选例中，所述的工程化的免疫细胞用于自体免疫治疗和/或异体免疫治疗。

146、在另一优选例中，所述的工程化的免疫细胞可以杀伤具有克隆增值能力的肿瘤细胞。

147、在另一优选例中，与表达本发明第一方面所述car的免疫细胞相比，表达第二方面所述的双特异性car的免疫细胞具有更长的体内存活时间。

148、在另一优选例中，所述的体内包括自体体内或异体体内。

149、在本发明的第七方面，提供了一种工程化的免疫细胞，所述免疫细胞含有外源的第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒用于表达靶向第一靶点的第一car或第一外源tcr，所述第二表达盒用于表达靶向bcma的第二car或第二外源tcr；

150、或所述免疫细胞表达所述靶向第一靶点的第一car或第一外源tcr和所述靶向bcma的第二car或第二外源tcr；

151、其中，所述第二car或第二外源tcr中靶向bcma的抗原结合结构域(scfv)包括seqid no:9所示的抗体重链可变区，和seq id no:10所示的抗体轻链可变区；

152、并且，所述的第一靶点选自下组：

153、cd138、kappa light chain、nkg2d-ligands、taci、gprc5d、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd25、cd28、cd30、cd33、cd38、cd40、cd44v6、cd47、cd52、cd56、cd57、cd58、cd79b、cd80、cd86、cd81、cd123、cd133、cd137、cd151、cd171、cd276、cll1、b7h4、bcma、vegfr-2、egfr、gpc3、pmsa、ceacam6、c-met、egfrviii、erbb2/her2、erbb3、her-2、her3、erbb4/her-4、epha2、igf1r、gd2、o-acetyl gd2、o-acetyl gd3、ghrhr、ghr、flt1、kdr、flt4、flt3、cea、ca125、ctla-4、gitr、btla、tgfbr1、tgfbr2、tgfbr1、il6r、gp130、lewis、tnfr1、tnfr2、pd1、pd-l1、pd-l2、psca、hvem、mage-a、msln、ny-eso-1、psma、rank、rorl、tnfrsf4、tweak-r、ltpr、lifrp、lrp5、muc1、muc16、tcrα、tcrβ、tlr7、tlr9、ptch1、wt-1、robol、frizzled、ox40、notch-1-4、april、cs1、mage3、claudin 18.2、folate receptorα、folate receptorβ、gpc2、cd70、baff-r、trop-2、或其组合。

154、在另一优选例中，所述的第一靶点为cd19，并且第一car中靶向cd19的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:11所示的抗体重链可变区，和seq id no:12所示的抗体轻链可变区。

155、在另一优选例中，所述第二car为本发明第一方面所述的car。

156、在另一优选例中，所述第一car和第二car定位于所述免疫细胞的细胞膜。

157、在另一优选例中，所述免疫细胞的细胞膜上表达有靶向cd19的第一car和靶向bcma的第二car。

158、在另一优选例中，所述的第一表达盒和第二表达盒位于相同或不同的载体上。

159、在另一优选例中，所述的第一表达盒和第二表达盒位于同一载体。

160、在另一优选例中，所述第一car的结构如下式v所示：

161、l-scfv1’-h-tm-c-cd3ζ(v)

162、式中，

163、各“-”独立地为连接肽或肽键；

164、元件l、h、tm、c和cd3ζ如上所述；

165、scfv1’为靶向cd19的抗原结合结构域。

166、在另一优选例中，所述第一car和第二car通过2a肽连接。

167、在另一优选例中，所述2a肽的序列如seq id no:2所示。

168、在另一优选例中，所述免疫细胞内还包括细胞自杀元件。

169、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件与所述双特异性car通过t2a连接(或串联)。

170、在另一优选例中，所述的细胞自杀元件与所述第一car和/或所述第二car通过t2a连接。

171、在另一优选例中，所述免疫细胞的pd1基因表达是被沉默的。

172、在另一优选例中，所述“pd-1基因表达是被沉默的”指pd-1基因不表达或低表达。

173、在另一优选例中，所述“低表达”指所述免疫细胞pd-1基因的表达量g1与正常免疫细胞pd-1基因的表达量g0的比值，即g1/g0≤0.5，较佳地g1/g0≤0.3，更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，最佳地为0。

174、在另一优选例中，所述“低表达”指所述car-t细胞pd-1基因的表达量g1与正常t细胞pd-1基因的表达量g0的比值，即g1/g0≤0.5，较佳地g1/g0≤0.3，更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，最佳地为0。

175、在本发明的第八方面，提供了一种制剂，所述制剂含有本发明第一或二方面所述的car或tcr、或本发明第六或七方面所述的工程化的免疫细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

176、在另一优选例中，所述制剂为液态制剂。

177、在另一优选例中，所述制剂的剂型为注射剂。

178、在另一优选例中，所述制剂中所述工程化的免疫细胞的浓度为1×103-1×108个细胞/ml，较佳地1×104-1×107个细胞/ml。

179、在另一优选例中，所述car包括双特异性car。

180、在本发明的第九方面，提供了一种本发明第一或二方面所述的car或tcr、或本发明第六或七方面所述的工程化的免疫细胞的用途，用于制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。

181、在另一优选例中，所述肿瘤为血液肿瘤。

182、在另一优选例中，所述血液肿瘤选自下组：急性髓细胞白血病(aml)、多发性骨髓瘤(mm)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性淋巴白血病(all)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、或其组合。

183、在另一优选例中，所述癌症或肿瘤为多发性骨髓瘤。

184、在另一优选例中，所述癌症或肿瘤为淋巴瘤。

185、在另一优选例中，所述的淋巴瘤选自下组：霍奇金淋巴瘤(hl)、弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡淋巴瘤(fl)、慢性淋巴细胞白细胞(cll)、小淋巴细胞淋巴瘤(sll)、边缘区淋巴瘤(mzl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、伯基特淋巴瘤(bl)和复杂b细胞非霍奇金淋巴瘤。

186、在另一优选例中，所述癌症或肿瘤包括复发性癌症或肿瘤。

187、在另一优选例中，所述药物或制剂通过杀伤具有克隆增值能力的肿瘤细胞治疗癌症或肿瘤。

188、在另一优选例中，所述的具有克隆增值能力的肿瘤细胞包括克隆形成细胞、肿瘤细胞前体细胞、肿瘤祖细胞。

189、在本发明的第十方面，提供了一种制备工程化免疫细胞的方法，所述的工程化免疫细胞表达本发明第一方面或第二方面所述的car或tcr，包括以下步骤：将本发明第三方面所述的核酸分子或本发明第四方面所述的载体转导入免疫细胞内，从而获得所述工程化免疫细胞。

190、在另一优选例中，所述免疫细胞为t细胞或nk细胞。

191、在本发明的第十一方面，提供了一种制备工程化免疫细胞的方法，包括以下步骤：

192、(1)提供一待改造的免疫细胞；和

193、(2)将用于表达靶向第一靶点的第一car的第一表达盒导入到所述免疫细胞；和

194、(3)将用于表达靶向bcma的第二car的第二表达盒导入到所述免疫细胞，从而获得所述的工程化免疫细胞，

195、其中，所述第二car中靶向bcma的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:9所示的抗体重链可变区，和seq id no:10所示的抗体轻链可变区；

196、并且，所述的第一靶点选自下组：

197、cd138、kappa light chain、nkg2d-ligands、taci、gprc5d、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd25、cd28、cd30、cd33、cd38、cd40、cd44v6、cd47、cd52、cd56、cd57、cd58、cd79b、cd80、cd86、cd81、cd123、cd133、cd137、cd151、cd171、cd276、cll1、b7h4、bcma、vegfr-2、egfr、gpc3、pmsa、ceacam6、c-met、egfrviii、erbb2/her2、erbb3、her-2、her3、erbb4/her-4、epha2、igf1r、gd2、o-acetyl gd2、o-acetyl gd3、ghrhr、ghr、flt1、kdr、flt4、flt3、cea、ca125、ctla-4、gitr、btla、tgfbr1、tgfbr2、tgfbr1、il6r、gp130、lewis、tnfr1、tnfr2、pd1、pd-l1、pd-l2、psca、hvem、mage-a、msln、ny-eso-1、psma、rank、rorl、tnfrsf4、tweak-r、ltpr、lifrp、lrp5、muc1、muc16、tcrα、tcrβ、tlr7、tlr9、ptch1、wt-1、robol、frizzled、ox40、notch-1-4、april、cs1、mage3、claudin 18.2、folate receptorα、folate receptorβ、gpc2、cd70、baff-r、trop-2、或其组合。

198、在另一优选例中，所述步骤(2)可在步骤(3)之前、之后、同时或交替进行。

199、在另一优选例中，当步骤(1)中的待改造的免疫细胞已经表达第一car或第二car时，则步骤(2)或步骤(3)可以省略。

200、在本发明的第十二方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒用于制备本发明第六或七方面所述的工程化的免疫细胞，且所述试剂盒含有容器，以及位于容器内的本发明第三方面所述的核酸分子、或本发明第四方面所述的载体。

201、在本发明的第十三方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒用于制备本发明第六或七方面所述的工程化的免疫细胞，且所述试剂盒含有容器，以及位于容器内的：

202、(1)第一核酸序列，所述第一核酸序列含有第一表达盒，所述的第一表达盒用于表达靶向第一靶点的第一car；和

203、(2)第二核酸序列，所述第二核酸序列含有第二表达盒，所述的第二表达盒用于表达所述靶向bcma的的第二car；

204、其中，所述第二car中靶向bcma的抗原结合结构域(scfv)包括seq id no:9所示的抗体重链可变区，和seq id no:10所示的抗体轻链可变区；

205、并且，所述的第一靶点选自下组：

206、cd138、kappa light chain、nkg2d-ligands、taci、gprc5d、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd25、cd28、cd30、cd33、cd38、cd40、cd44v6、cd47、cd52、cd56、cd57、cd58、cd79b、cd80、cd86、cd81、cd123、cd133、cd137、cd151、cd171、cd276、cll1、b7h4、bcma、vegfr-2、egfr、gpc3、pmsa、ceacam6、c-met、egfrviii、erbb2/her2、erbb3、her-2、her3、erbb4/her-4、epha2、igf1r、gd2、o-acetyl gd2、o-acetyl gd3、ghrhr、ghr、flt1、kdr、flt4、flt3、cea、ca125、ctla-4、gitr、btla、tgfbr1、tgfbr2、tgfbr1、il6r、gp130、lewis、tnfr1、tnfr2、pd1、pd-l1、pd-l2、psca、hvem、mage-a、msln、ny-eso-1、psma、rank、rorl、tnfrsf4、tweak-r、ltpr、lifrp、lrp5、muc1、muc16、tcrα、tcrβ、tlr7、tlr9、ptch1、wt-1、robol、frizzled、ox40、notch-1-4、april、cs1、mage3、claudin 18.2、folate receptorα、folate receptorβ、gpc2、cd70、baff-r、trop-2、或其组合。

207、在另一优选例中，所述的第一和第二核酸序列位于相同或不同的容器内。

208、在另一优选例中，所述的第一和第二核酸序列位于同一表达载体中。

209、在本发明的第十四方面，提供了一种本发明第六或七方面所述的工程化的免疫细胞的用途，用于预防和/或治疗癌症或肿瘤。

210、在另一优选例中，所述癌症或肿瘤为多发性骨髓瘤。

211、在本发明的第十五方面，提供了一种治疗疾病的方法，包括给需要治疗的对象施用适量的本发明第六或七方面所述的细胞、或本发明第五方面所述的制剂。

212、在另一优选例中，所述疾病为癌症或肿瘤。

213、在本发明的第十六方面，提供了一种增强免疫细胞体内存活能力或增强免疫细胞对具有克隆增值能力的肿瘤细胞的杀伤能力的方法，包括(a)同时在所述的免疫细胞中表达外源的第一表达盒和第二表达盒，其中所述第一表达盒用于表达靶向cd19的第一car，所述第二表达盒用于表达靶向bcma的第二car；或(b)在所述的免疫细胞中表达第二方面所述的双特异性car。

214、在另一优选例中，所述方法构建的免疫细胞如本发明第六和第七方面所述。

215、在另一优选例中，所述的第一表达盒和第二表达盒与本发明第七方面中的第一表达盒和第二表达盒具有相同含义。

216、在另一优选例中，所述的体内包括自体体内或异体体内。

217、在本发明的第十七方面，提供了一种增强靶向bcma的工程化的免疫细胞的体内存活能力或对具有克隆增值能力的肿瘤细胞的杀伤能力的方法，包括在所述的工程化的免疫细胞中表达外源的第一表达盒，所述第一表达盒用于表达靶向cd19的第一car。

218、在另一优选例中，所述的第一表达盒与本发明第七方面中的第一表达盒和第二表达盒具有相同含义。

219、在另一优选例中，所述靶向bcma的工程化的免疫细胞为表达本发明第一方面所述的car的免疫细胞。

220、在另一优选例中，所述的体内包括自体体内或异体体内。

221、在本发明的第十八方面，提供了一种第一表达盒用途，所述第一表达盒用于表达靶向cd19的第一car，用于增强靶向bcma的工程化的免疫细胞的体内存活能力或对具有克隆增值能力的肿瘤细胞的杀伤能力，或者，用于制备一试剂盒，所述的试剂盒用于用于增强靶向bcma的工程化的免疫细胞的体内存活能力或对具有克隆增值能力的肿瘤细胞的杀伤能力。

222、在另一优选例中，所述的体内包括自体体内或异体体内。

223、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。