一种约氏乳杆菌及其应用

本发明属于益生菌，具体来说，涉及约氏乳杆菌在制备用于增敏免疫治疗的产品中的用途，尤其涉及约氏乳杆菌与生孢梭菌组合物在制备用于增敏抗pd-1抗体的产品中的用途。

背景技术：

1、肿瘤免疫治疗可重启机体正常免疫反应，减少肿瘤免疫逃逸和免疫耐受，有效控制与清除肿瘤。多种免疫检查点抑制剂药物(icis)如程序性细胞死亡蛋白-1(pd-1)及其配体pd-l1抗体已用于临床肿瘤免疫治疗。icis可增强t细胞活化，从而增加免疫细胞对肿瘤细胞的毒性杀伤作用。然而结直肠癌等实体瘤对抗pd-1抗体的有效率较低，其与肿瘤免疫抑制微环境及肿瘤组织中cd8+ t细胞，特别是干性cd8+ t细胞浸润数量不足有关。

2、肠道菌群或可通过调控免疫微环境进而调节肿瘤免疫治疗反应，如双歧杆菌可增加树突状细胞的交叉抗原提呈改善抗cd47抗体的疗效。目前发现约氏乳杆菌作为乳杆菌属的成员，具有调控机体免疫的功能，并且其可能与免疫治疗的敏感性相关，但是其是否能够增敏免疫治疗仍未知。此外，生孢梭菌作为梭菌属的成员，是自然环境中人和实验动物肠道内的常驻菌，既往报道可以促进小鼠轴突再生、表皮神经支配和感觉功能恢复，调控宿主免疫微环境和色氨酸代谢过程，但其对免疫治疗的作用未有报道。细菌微生态之间存在着复杂的合作与竞争，有些细菌互相竞争营养物质，而有些细菌互利互惠。细菌之间的复杂关系也有待进一步揭示。

3、综上，由于在实体瘤中免疫检查点抑制剂的有效率低，限制了其在临床上的广泛应用。鉴于此，亟需开发一种能够增敏免疫检查点抑制剂的产品。

技术实现思路

1、本发明第一个目的在于，提供一种约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001。约氏乳杆菌(ljsj001菌)为自主分离获得并典藏。

2、所述ljsj001菌是从健康人群粪便中分离出来，种水平通过16s rdna测序鉴定确认，并保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(china general microbiologicalculture collection center,cgmcc)，保藏编号为：cgmcc no.29884，菌株名称：约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)-ljsj001菌。

3、进一步的，还可提供一种包含所述的约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001的菌剂。更进一步的，所述菌剂中还可以含有生孢梭菌。

4、进一步的，还可提供一种约氏乳杆菌培养物，由所述的约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001制备得到。所述培养物中含有所述约氏乳杆菌活菌、所述约氏乳杆菌菌体成分及其衍生物和所述约氏乳杆菌的代谢物中的至少一种。更进一步的，所述培养物中还含有生孢梭菌、生孢梭菌菌体成分及其衍生物和生孢梭菌的代谢物中的至少一种；所述培养物制备方法可以包括：将所述约氏乳杆菌或还有生孢梭菌接种至培养基或无菌溶剂中得到；其制备方法并不唯一，只要是由所述约氏乳杆菌或还有生孢梭菌培养制得即可。

5、本发明第二个目的在于，提供如上任一所述的约氏乳杆菌、菌剂或菌培养物在制备用于增敏肿瘤免疫治疗的产品中的用途。

6、进一步的，所述约氏乳杆菌为保藏编号为cgmcc29884的约氏乳杆菌ljsj001；

7、进一步的，如上任一所述的约氏乳杆菌、菌剂或菌培养物能够显著增加肿瘤内cd8+t细胞的数量；

8、进一步的，所述的免疫治疗(包括但不限于)抗pd-1抗体治疗；

9、进一步的，所述的肿瘤(包括但不限于)为结直肠癌。

10、本发明的第三个目的在于，提供约氏乳杆菌药品组合物在增敏肿瘤免疫治疗药品制备中的应用；

11、进一步的，所述药品组合物中包括有约氏乳杆菌ljsj001与生孢梭菌，二者cfu配比为0.001：1到1:1000之间，优选配比为1:1。

12、进一步的所述的免疫治疗(包括但不限于)抗pd-1抗体治疗；

13、进一步的所述的肿瘤(包括但不限于)为结直肠癌。

14、此外，本发明中所述产品、药品或药品组合物包括如上任一所述的约氏乳杆菌、菌剂或菌培养物；还可以包括药学上可接受的载体和/或辅料；

15、所述药学上可接受的载体包括溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、矫味剂、矫嗅剂、着色剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、ph调节剂、稳定剂、表面活性剂和/或防腐剂。

16、所述产品、药品或药品组合物的剂型包括固体饮料、丸剂、片剂、散剂、胶囊、颗粒剂、凝胶剂、栓剂、膏剂、混悬剂、乳剂、合剂、溶液剂、注射剂、口服液、灌肠剂或管饲制剂等。

17、本发明至少具有如下优点及有益效果：

18、(1)本发明通过研究发现，约氏乳杆菌能够显著增敏小鼠免疫治疗，表现为小鼠肿瘤明显缩小，浸润的cd8+t细胞显著增加，且实验小鼠未表现出异常反应，表明约氏乳杆菌能够有效用于增敏小鼠肿瘤免疫治疗。约氏乳杆菌为食品目录益生菌，无有毒有害作用，应用前景广发。

19、(2)本发明通过研究发现，约氏乳杆菌与生孢梭菌组合使用，能够显著增敏小鼠免疫治疗，效果较单用约氏乳杆菌更优，表现为小鼠肿瘤明显缩小，且实验小鼠未表现出异常反应，表明组合使用约氏乳杆菌与生孢梭菌能够有效用于增敏小鼠肿瘤免疫治疗。生孢梭菌为益生菌，无有毒有害作用，应用前景广发。

技术特征：

1.约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001，其特征在于，所述约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：cgmccno.29884。

2.包含如权利要求1所述的约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001的菌剂。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中还含有生孢梭菌。

4.一种菌培养物，其特征在于，由如权利要求1所述的约氏乳杆菌(lactobacillusjohnsonii)ljsj001培养制得。

5.根据权利要求4所述的菌培养物，其特征在于，由如权利要求1所述的约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)ljsj001和生孢梭菌联合培养制得。

6.权利要求1所述的约氏乳杆菌或权利要求2或3所述的菌剂或权利要求4或5所述的菌培养物在制备增敏肿瘤免疫治疗产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的免疫治疗为抗pd-1抗体治疗。

8.根据权利要求6所述的肿瘤为结直肠癌。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述产品中含有如权利要求1所述的约氏乳杆菌或权利要求2或3所述的菌剂或权利要求4或5所述的菌培养物中的一种或多种，还包括药学上可接受的载体和/或辅料。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述产品的剂型为固体饮料、丸剂、片剂、散剂、胶囊、颗粒剂、凝胶剂、栓剂、膏剂、混悬剂、乳剂、合剂、溶液剂、注射剂、口服液、灌肠剂或管饲制剂中的至少一种。

技术总结本发明属于益生菌技术领域，涉及一种约氏乳杆菌及其应用。本发明的约氏乳杆菌为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)LJSJ001保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CGMCC NO.29884。本发明中约氏乳杆菌能够显著增敏小鼠免疫治疗，表现为小鼠肿瘤明显缩小，浸润的CD8<supgt;+</supgt;T细胞显著增加，且实验小鼠未表现出异常反应；约氏乳杆菌与生孢梭菌组合使用，亦能够显著增敏小鼠免疫治疗，效果较单用约氏乳杆菌更优，表明组合使用约氏乳杆菌与生孢梭菌更能有效用于增敏小鼠肿瘤免疫治疗。约氏乳杆菌为食品目录益生菌，生孢梭菌为益生菌，两者皆无有毒有害作用，具有广泛应用潜质，可在临床上与免疫检查点抑制剂联合应用，为预防或治疗肿瘤提供了一种新策略。技术研发人员：王良静,陈淑洁,贾丁佳成,王其温,戚亚东,王岚受保护的技术使用者：浙江大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18