产过氧化氢杀菌的水质微生物调理剂及其制备方法

本发明属于微生物菌剂领域，具体涉及一种产过氧化氢杀菌的水质微生物调理剂及其制备方法。

背景技术：

1、随着我国人民生活水平的提高，对水产品的消费需求不断增加。水产养殖在渔业生产中已经占据主导地位。然而，水产养殖废水的大量排放对近岸海域的水质造成极大影响。大规模养殖导致的水环境污染以及抗生素在水产病害防治中的过度使用等问题，严重制约了我国水产养殖业的发展。高密度的水产养殖模式伴随着投料量的急剧增加，会产生大量的剩料和动物粪便等有机物，从而引起池塘水体富营养化，影响养殖动物的生长。随着水体富营养化程度的加剧，有害微生物的变异和疾病传播的风险也不断增加。因此，发展操作简单、成本低廉的水产养殖原位调节净化技术显得尤为重要。这种技术不仅具有水体循环使用的优势，还能减少尾水排放，同时获得高质量的水产品，具有重要的实际应用价值。

2、工厂化高密度养殖带来的亚硝酸盐胁迫和病原菌增加的双重压力制约着工程化养殖的推广应用。为了使高密度的水产养殖动物减少传染病的风险，在投喂饲料的同时会掺入大量的抗生素。在养殖水体中的抗生素诱导细菌产生抗生素抗性基因，并随着养殖水体的排出长距离大范围的进行传播，对公众健康造成严重威胁。微生物控制的开发与利用是解决水产病害的一种重要技术手段。通过水质微生物调理剂的添加应用，大量病原菌被杀灭或抑制，进而实现了保护水产动物的目的。目前，尚未有筛选获得具有脱除氨氮和亚硝酸盐且能同时消杀抗性细菌的复合功效水质微生物调理剂的报道。

3、本发明开发了具有脱除氨氮、亚硝酸盐且能同时消杀抗性细菌以及游离的抗性基因的复合功效水质微生物调理剂，然后进行合理混合制备出水质微生物调理剂，各混合菌株优势互补形成高效的微生物群落，抑制和杀灭多种致病菌，同时促进水产养殖系统中大部分氨氮、亚硝态氮和硝态氮转变为氮气予以脱除，实现养殖水体的原位养护，对于高密度水产养殖提质增效具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种具有脱除氨氮和亚硝酸盐且能同时消杀抗性细菌的复合功效水质微生物调理剂。

2、本发明的技术方案为：一种产过氧化氢杀菌的水质微生物调理剂，所述水质微生物调理剂主要由酵母菌、乳酸菌、放线菌和光合细菌按照5∶5∶1∶1的比例组成。

3、进一步地，所述水质微生物调理剂为液体剂，有效活菌数不低于1.0×109cfu/ml。

4、进一步地，所述酵母菌为酿酒酵母(saccharomyces-cerevisiae)；乳酸菌由乳杆菌(lentilactobacillus)、乳酸杆菌(lactobacillus)、副干酪乳杆菌(lacticaseibacillus)和液体乳杆菌(liquorilactobacillus)组成；放线菌由分枝杆菌(mycobacterium)、棒状杆菌(corynebacterium)、康奈斯氏杆菌(conexibacter)和微杆菌(microbacterium)组成；光合细菌为红假单胞菌(rhodopseudomonas)。

5、上述所述的水质微生物调理剂的制备方法，包括如下步骤：

6、(1)将酵母菌、乳酸菌、放线菌和光合细菌分别进行液体培养；

7、(2)将步骤(1)得到的四种菌液按比例混合即得水质微生物调理剂。

8、进一步地，所述酵母菌液体培养的方法为：将活化后的酵母菌接种到酵母培养基中，发酵条件：温度26-38℃，通气比1:0.4，培养时间24-72h，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

9、进一步地，所述乳酸菌液体培养的方法为：将活化后的乳酸菌接种到乳酸菌培养基中，发酵条件：密闭发酵，温度26-38℃，培养时间24-72h，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

10、进一步地，所述放线菌液体培养的方法为：将活化后的放线菌接种到放线菌培养基中，发酵条件：密闭发酵，温度20-30℃，培养时间7-14d，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

11、进一步地，所述光合细菌液体培养的方法为：将活化后的光合细菌接种到光合细菌培养基中，发酵条件：28-30℃，光照培养24-72h，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

12、上述所述的水质微生物调理剂在调理水质，产过氧化氢，杀灭抗性细菌及抗性基因，降低水体氨氮、亚硝氮盐含量，增强水产养殖动物免疫力，降低发病率或促进水产养殖动物生长中的应用。

13、通过实验验证，使用该水质微生物调理剂，通过定时定量添加到南美白对虾、加州鲈鱼、四大家鱼等水产养殖水体中，不仅能够有效降低水中的氨氮和亚硝酸盐，控制水质，减少换水用量，而且可以提高养殖密度，促进水产养殖动物生长，具有重要的应用前景。

14、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

15、本发明开发了具有脱除氨氮、亚硝酸盐且能同时消杀抗性细菌以及游离的抗性基因的复合功效水质微生物调理剂，然后进行合理混合制备出水质微生物调理剂，各混合菌株优势互补形成高效的微生物群落，抑制和杀灭多种致病菌，同时促进水产养殖系统中大部分氨氮、亚硝态氮和硝态氮转变为氮气予以脱除，实现养殖水体的原位养护，对于高密度水产养殖提质增效具有重要的现实意义。

技术特征：

1.一种产过氧化氢杀菌的水质微生物调理剂，其特征在于，所述水质微生物调理剂主要由酵母菌、乳酸菌、放线菌和光合细菌按照5∶5∶1∶1的比例组成。

2.根据权利要求1所述的水质微生物调理剂，其特征在于，所述水质微生物调理剂为液体剂，有效活菌数不低于1.0×109cfu/ml。

3.根据权利要求1所述的水质微生物调理剂，其特征在于，所述酵母菌为酿酒酵母(saccharomyces-cerevisiae)；乳酸菌由乳杆菌(lentilactobacillus)、乳酸杆菌(lactobacillus)、副干酪乳杆菌(lacticaseibacillus)和液体乳杆菌(liquorilactobacillus)组成；放线菌由分枝杆菌(mycobacterium)、棒状杆菌(corynebacterium)、康奈斯氏杆菌(conexibacter)和微杆菌(microbacterium)组成；光合细菌为红假单胞菌(rhodopseudomonas)。

4.权利要求1-3任一项所述的水质微生物调理剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌液体培养的方法为：将活化后的酵母菌接种到酵母培养基中，发酵条件：温度26-38℃，通气比1:0.4，培养时间24-72h，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述光合细菌液体培养的方法为：将活化后的光合细菌接种到光合细菌培养基中，发酵条件：28-30℃，光照培养24-72h，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述放线菌液体培养的方法为：将活化后的放线菌接种到放线菌培养基中，发酵条件：密闭发酵，温度20-30℃，培养时间7-14d，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述光合细菌液体培养的方法为：将活化后的光合细菌接种到光合细菌培养基中，发酵条件：28-30℃，光照培养24-72h，培养密度为1.0×109-1013cfu/ml。

9.权利要求1-3任一项所述的水质微生物调理剂在调理水质，产过氧化氢，杀灭抗性细菌及抗性基因，降低水体氨氮、亚硝氮盐含量，增强水产养殖动物免疫力，降低发病率或促进水产养殖动物生长中的应用。

技术总结本发明公开了一种产过氧化氢杀菌的水质微生物调理剂及其制备方法，属于微生物菌剂领域，选择混合菌群进行培养，包括酵母菌、乳酸菌、放线菌和光合细菌作为水质微生物调理剂，进行扩大培养，并按照5:5:1:1混合比例投入养殖水体调理水质，在实验室内培养条件下，72h内过氧化氢产量达0.57mg/L，4h内可以将游离的抗性基因从初始浓度的5ng/μL降低至约1ng/μL，杀灭抗性细菌及抗性基因。在实际应用中，能够降低底泥中抗性基因90％以上，降低水体氨氮、亚硝氮盐含量的应用，以及增强高密度水产养殖动物免疫力，降低发病率，促进水产养殖动物生长中的应用。技术研发人员：刘新会,董璐,李立平,李鹏程,李柏翰,薛萌竹,夏国慧,张欣,张瀚丹,刘锡勤受保护的技术使用者：北京师范大学技术研发日：技术公布日：2024/6/18