一种具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物及其制备方法和应用

本发明属于桑叶活性成分提取，具体涉及一种具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、桑叶中富含黄酮类化合物，主要以黄酮苷类形式存在，桑叶黄酮分子结构中有葡萄糖苷、芸香糖苷、鼠李糖糖苷等，由此衍生出一系列黄酮苷类化合物，桑叶黄酮种类丰富，约占桑叶干重的2%，具有降血糖、抗菌消炎、抗氧化、抗肿瘤、保护心脑血管等作用，因此具有重要的研究价值。现有对桑叶黄酮的研究较多，但对桑叶黄酮提取物的进一步资源加工利用未见更多报道。

技术实现思路

1、本发明是为了对桑叶黄酮提取物的深度利用进一步的研究分析，提供了一种具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物及其制备方法和应用。

2、本发明采用如下技术方案：一种具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法，包括如下步骤：

3、（1）桑叶黄酮提取：取新鲜桑叶原料，按料液比为1:10-1:12加入70%乙醇热回流提取2-3次，每次提取时间为90-100min，提取结束后，分离合并两次提取液；

4、（2）桑叶黄酮提取物纯化：采用大孔树脂ab-8柱层析分离纯化步骤（1）的桑叶黄酮提取物，以体积分数为40%的乙醇为洗脱液，最大上样体积为7-8bv，上样液浓度为1-2mg/ml，上样液流速为1-2ml/min，收集纯化后的桑叶黄酮洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥；

5、（3）桑叶黄酮水解：将桑叶黄酮粉末溶于纯净水中，加入蜗牛酶，调节溶液ph至5.5-6.0,于25-40℃条件下酶解48h，酶解结束后沸水灭酶8-12min，冷却后离心8-10min，收集上清液得到桑叶黄酮酶解物。

6、进一步的，所述步骤（3）中蜗牛酶的添加量为2000-4000u/g。

7、进一步的，对桑叶黄酮提取物及桑叶黄酮酶解物中总黄酮含量测定时，以nano2al(no3)3naoh 显色法进行测定，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线方程为：y=12.36x-0.0032，r2=0.9998。

8、进一步的，所述步骤（2）中洗脱液用量为5-6bv，洗脱液流速为1.5ml/min。

9、具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法得到的桑叶黄酮酶解物，所述桑叶黄酮酶解物的分子量为250-350，桑叶黄酮酶解物组分中以黄酮苷元为主。

10、具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法得到的桑叶黄酮酶解物的应用，桑叶黄酮酶解物具有抗炎效果，能够够用于斑马鱼炎性肠病药物的制备。

11、采用hplc-ms对桑叶黄酮酶解前后的成分进行分析可知：在桑叶黄酮提取物中检出但在桑叶黄酮酶解物中未检出的成分含有芦丁、槲皮素-3β-d-葡萄糖苷、山奈酚-3-半乳糖苷-6〞-鼠李糖-3〞-鼠李糖苷、落新妇苷、山奈酚-3-o-芸香糖苷、芹菜素-5-β-d-葡萄糖苷、槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖基-(1-6)-β-吡喃葡萄糖苷、橙皮苷、报春黄苷、木犀草素-3',7-二葡萄糖苷、樱花苷等 13 种黄酮苷类化合物。

12、在桑叶黄酮酶解物中检出，但在桑叶黄酮提取物中未检出的成分包括：木犀草素、高良姜素、二氢槲皮素、芒柄花黄素、圣草素、大黄素、易鼠李素、大豆苷元、异甘草素等10种成分。

13、在桑叶黄酮提取物中的明显的芦丁信号峰在酶解后基本消失，这表明，蜗牛酶将芦丁转化为了槲皮素，表明蜗牛酶可以水解云香糖苷，蜗牛酶对α-苷键及半乳糖苷键均有脱除作用，可见酶解后化合物山奈酚-3-半乳糖苷-6''-鼠李糖-3'''-鼠李糖苷信号峰消失，而山奈酚信号峰增强。蜗牛酶水解糖苷键的能力与苷键的位置无关，分布在 3,5,7 等位置的苷键均可被脱除，与糖苷键的构型有一定关系，一般 β-苷键很容易被脱除，而 α-苷脱除反应时间相对较长。

14、 桑叶黄酮酶解物中对 ibd 发挥作用的核心成分包括山奈酚、芹菜等、桑色素、漆黄素、槲皮素，共作用于 ibd 相关靶点 391 个，共有靶点ppi 网络显示，桑叶黄酮酶解物治疗ibd的核心靶点包括src、hsp90aa1、akt1、pik3r1、mapk1、mapk3、prkaca、esr1、hsp90ab1、egfr；go富集分析和 kegg 通路富集分析结果表明，桑叶黄酮酶解物可以通过mtor 信号通路、nod 样受体信号通路、胰高血糖素信号通路、类固醇激素生物合成、精氨酸与脯氨酸代谢等氨基酸代谢通路发挥作用。该研究结果表明桑叶黄酮酶解物成分治疗 ibd具有多靶点、多通路协同发挥作用的特点。

15、本发明的优点具体如下：

16、（1）本发明采用蜗牛酶水解桑叶黄酮制备得到桑叶黄酮酶解物，蜗牛酶能够对桑叶黄酮中的糖苷键具有较好的水解能力，桑叶黄酮转化率为88.73%，叶黄酮提取物酶解前化合物的分子量集中在450-700间，酶解后分子量明显变小，集中在250-350之间，成分分析酶解后的组分含10种黄酮苷元为主，小分子量的酶解产物为桑叶黄酮的深度资源开发奠定了基础；

17、（2）本发明中的酶解法条件温和，步骤易于操作，酶解脱苷后制备得到的桑叶黄酮酶解物抗炎活性增强，为桑叶黄酮酶解物作为抗斑马鱼ibd药物的使用提供了重要意义。

技术特征：

1.一种具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中蜗牛酶的添加量为2000-4000u/g。

3.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法，其特征在于：对桑叶黄酮提取物及桑叶黄酮酶解物中总黄酮含量测定时，以 nano2al(no3)3naoh 显色法进行测定，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线方程为：y=12.36x-0.0032，r2=0.9998。

4.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中洗脱液用量为5-6bv，洗脱液流速为1-2ml/min。

5.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法得到的桑叶黄酮酶解物，其特征在于：所述桑叶黄酮酶解物的分子量为250-350，桑叶黄酮酶解物组分中以黄酮苷元为主。

6.根据权利要求5所述的具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物的制备方法得到的桑叶黄酮酶解物的应用，其特征在于：桑叶黄酮酶解物具有抗炎效果，能够用于斑马鱼炎性肠病药物的制备。

技术总结本发明涉及一种具有抗炎活性的桑叶黄酮酶解物及其制备方法和应用，采用蜗牛酶对桑叶黄酮提取物进行水解，蜗牛酶的添加量为2000‑4000U/g，酶解温度为25‑40℃酶解36‑48h。本发明采用酶解法水解糖苷制备得到桑叶黄酮酶解物，制备方法简单，步骤易于操作，桑叶黄酮酶解物的分子量与酶解前大大降低，且抗炎活性效果提升，为桑叶高值化利用提供了基础。技术研发人员：赵丁,贾东升,耿旭芳,田溪,王嫚,陈宇婷,刘杰受保护的技术使用者：河北医科大学技术研发日：技术公布日：2024/8/1