抗猴痘病毒A35R蛋白的单克隆抗体8D7或其抗体片段的制作方法

本发明涉及单克隆抗体，具体涉及一种抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7。

背景技术：

1、猴痘是由猴痘病毒(monkeypox virus，mpxv)引起的人畜共患病。猴痘病毒是一种双链dna病毒，属痘病毒科、脊痘病毒亚科、正痘病毒属。猴痘患者的典型症状包括头部和身体疼痛、发烧、喉咙痛、疲劳、淋巴结肿大和典型的皮疹。2022年5月起，猴痘在多个国家迅速传播。

2、猴痘病毒a35r蛋白是细胞外包膜病毒粒子(extracellular enveloped virions，eev)的包膜成分，控制肌动蛋白尾部的产生，是病毒在细胞间扩散传播中所必须的。猴痘病毒a35r蛋白是刺激机体产生中和抗体的主要抗原位点之一，是疫苗主要的保护性位点，同时也是血清学检测的潜在靶点，可用于病毒的特异性鉴定和疾病诊断。抗猴痘病毒a35r单克隆抗体可用于胶体金快速检测试剂盒，作为现有猴痘病源检测方法的补充，辅助检测疑似患者，筛查重点人群，填补部分落后地区mpxv检测的空白。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段，其重链包含如seq id no.1～3所示的氨基酸序列构成的cdr1、cdr2、cdr3，轻链包含如seq id no.4～6所示的氨基酸序列构成的cdr1、cdr2、cdr3。

2、作为一种优选的实施方式，所述抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段包含如seq id no.7所示的重链可变区和如seq id no.8所示的轻链可变区。

3、作为一种优选的实施方式，所述抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段的重链氨基酸序列为seq id no.7所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的具有同样功能的氨基酸序列或与seq id no.7所示的氨基酸序列具有95％以上同源性且具有同样功能的氨基酸序列；和/或，所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列为seq id no.8所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的具有同样功能的氨基酸序列或与seq id no.8所示的氨基酸序列具有95％以上同源性且具有同样功能的氨基酸序列。

4、该单克隆抗体8d7特异性好，结合活性和亲和力较高，可用于胶体金快速检测试剂盒，为检测猴痘病毒a35r蛋白奠定了基础。

5、本发明的目的之二还在于保护编码上述抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段的核苷酸分子。

6、优选的，所述多核苷酸分子具有seq id no.9所示的核苷酸序列；和/或，所述多核苷酸分子具有seq id no.10所示的核苷酸序列。

7、本发明的目的之三还在于保护包含上述核苷酸分子的工程细胞、重组载体。

8、本发明的目的之四还在于保护用于检测猴痘病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述的单克隆抗体或抗体片段，或上述核苷酸分子编码的单克隆抗体或抗体片段。

9、本发明的目的之五还在于保护上述单克隆抗体或抗体片段在制备检测猴痘病毒试剂盒中的应用。

10、本发明的目的之六还在于保护上述单克隆抗体或抗体片段在制备抑制、预防、治疗猴痘病毒药物中的应用。

技术特征：

1.一种抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段，其特征在于，重链包含如seq id no.1～3所示的氨基酸序列构成的cdr1、cdr2、cdr3，

2.根据权利要求1所述的抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段，其特征在于，包含如seq id no.7所示的重链可变区和如seq id no.8所示的轻链可变区。

3.根据权利要求1所述的抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段，其特征在于，所述单克隆抗体的重链氨基酸序列为seq id no.7所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的具有同样功能的氨基酸序列或与seq id no.7所示的氨基酸序列具有95％以上同源性且具有同样功能的氨基酸序列；和/或，所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列为seq id no.8所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸序列后形成的具有同样功能的氨基酸序列或与seq id no.8所示的氨基酸序列具有95％以上同源性且具有同样功能的氨基酸序列。

4.编码权利要求1或2或3所述的抗猴痘病毒a35r蛋白的单克隆抗体8d7或其抗体片段的核苷酸分子。

5.根据权利要求4所述的核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子具有seq idno.9所示的核苷酸序列；和/或，所述多核苷酸分子具有seq id no.10所示的核苷酸序列。

6.包含权利要求4或5所述的核苷酸分子的工程细胞、重组载体。

7.用于检测猴痘病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2或3所述的单克隆抗体或抗体片段，或权利要求4或5所述的核苷酸分子编码的单克隆抗体或抗体片段。

8.权利要求1或2或3所述的单克隆抗体或抗体片段，或权利要求4或5所述的核苷酸分子编码的单克隆抗体或抗体片段在制备检测猴痘病毒试剂盒中的应用。

9.权利要求1或2或3所述的单克隆抗体或抗体片段，或权利要求4或5所述的核苷酸分子编码的单克隆抗体或抗体片段在制备抑制、预防、治疗猴痘病毒药物中的应用。

技术总结本发明具体涉及一种抗猴痘病毒A35R蛋白的单克隆抗体8D7。本发明先将MPXV A35S基因序列通过linker(Gly<subgt;4</subgt;Ser)<subgt;3</subgt;进行了重复串联，然后用其作为免疫原，筛选得到了抗猴痘病毒A35R蛋白的单克隆抗体8D7，该单克隆抗体重链包含如SEQ ID NO.1～3所示的氨基酸序列构成的CDR1、CDR2、CDR3，轻链包含如SEQ ID NO.4～6所示的氨基酸序列构成的CDR1、CDR2、CDR3。将其进一步实验研究发现，其特异性好，结合活性和亲和力较高，可用于胶体金快速检测试剂盒，为检测猴痘病毒A35R蛋白奠定了基础。技术研发人员：欧阳蕾,吴佩璇,师江龙,周建花,潘勇兵受保护的技术使用者：武汉生物制品研究所有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/8/16