一种鱼精蛋白效价检测方法与流程

本发明属于生物领域，尤其涉及光谱仪光纤探头及硫酸鱼精蛋白效价的测定。

背景技术：

1、《中国药典》2020年版四部通则1213硫酸鱼精蛋白生物测定法，详述了硫酸鱼精蛋白效价的测定方法，通过兔血浆凝结状况来判定其效价。具体操作方法如下：

2、(1)肝素标准品溶液的制备：精密称取肝素标准品适量，按标示效价加0.9％氯化钠溶液溶解成几种不同浓度的溶液，相邻两种浓度每1m l中所含肝素效价(单位)相差应相等，且不超过5个单位，一般可配成每1ml中含85单位、90单位、95单位、100单位、105单位、110单位、115单位、120单位、125单位的溶液。

3、(2)供试品溶液的制备：供试品如为粉末，精密称取适量，按干燥品计算，加0.9％氯化钠溶液溶解使成每1ml中含1mg的溶液；供试品如为注射液，则按标示量加0.9％氯化钠溶液稀释至同样浓度。

4、(3)测定法：取管径均匀(0.8cm×3.8cm)、清洁干燥的小试管8支，第1管和第8管为空白对照管，加入0.9％氯化钠溶液0.2m l，第2～7管为供试品管，每管均加入供试品溶液0.1ml，再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液0.1m l，立即混匀。取刚抽出的兔血适量，分别加入上述8支试管内，每管0.8m l，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，将小试管置37℃±0.5℃恒温水浴中，从采动物血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过2分钟；如用血浆，则分别于上述各管中加入0.7m l的血浆，置于37℃±0.5℃恒温水浴中预热5～10分钟，每管分别加入1％氯化钙溶液0.1m l，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间。观察并记录各管凝结时间。

5、(4)结果判断：两支对照管的凝结时间相差不得超过1.35倍。在供试品管的凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间150％的各管中，以肝素浓度最高的一管作为终点管。

6、同样重复5次，5次试验测得终点管的肝素浓度，相差不得大于10个单位，5次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白供试品(干燥品)1mg中和肝素的效价(单位)。

7、但检测中所用的兔血浆所用数量较多，导致成本大幅增加，且需要在恒温环境下进行测定，单次测定样本较少，影响最终测定效果。

技术实现思路

1、本发明实施例的目的在于提供一种鱼精蛋白效价检测方法，旨在解决上述背景技术中存在的问题。

2、本发明实施例是这样实现的，一种鱼精蛋白效价检测方法，包括以下步骤：

3、(1)硫酸鱼精蛋白溶液的配制

4、称取硫酸鱼精蛋白，加0.05mo l/l酸溶液溶解，稀释成0.7mg/ml的溶液；

5、(2)肝素钠标准品溶液的配制

6、称取肝素钠标准品，加水溶解，稀释成不同效价浓度的肝素钠标准品溶液；

7、(3)检定法

8、取试管，每个试管中加入硫酸鱼精蛋白溶液，再加入等体积的肝素钠标准品溶液，立即混匀，插入光纤探头，并开始计时，静置5分钟，在500nm波长下，测定每个试管中混合液的吸光度，吸光度相差不超过10％的试管中，以肝素钠浓度最低的管作为终点管，即硫酸鱼精蛋白的效价。

9、本发明实施例提供的一种鱼精蛋白效价检测方法，与现有技术相比，具有的优点和积极效果：

10、经过多次实验，本发明测定的硫酸鱼精蛋白的效价，与《中国药典》2020年版规定的硫酸鱼精蛋白生物测定法所测得的效价完全一致，但进行对比发现，本发明的优势在于(1)所用试剂少，无需兔血浆及氯化钙，能降低实验成本；(2)结果判断更加准确客观；(3)实验更简便，不需要进行恒温控制；(4)实验快捷，可同时测定多份样品。

技术特征：

1.一种鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中所用的酸溶液为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸、硫酸等有机酸或无机酸，浓度为0.005mol/l-0.005mol/l，ph范围为2.0-6.0。

3.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中硫酸鱼精蛋白溶液的浓度为0.2mg/ml-2.0mg/ml。

4.根据权利要求3所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中硫酸鱼精蛋白溶液的浓度为0.7mg/ml。

5.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的不同效价浓度的肝素钠标准品溶液之间的效价浓度差为2iu/ml-10iu/ml。

6.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的不同效价浓度的肝素钠标准品溶液的效价浓度范围为80iu/ml-120iu/ml。

7.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中测定吸光度的设备为光谱仪。

8.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中测定吸光度的方式为光纤探头在线检测。

9.根据权利要求1所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中测定吸光度的光的波长为400nm-700nm。

10.根据权利要求9所述的鱼精蛋白效价检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中测定吸光度的光的波长为500nm。

技术总结《中国药典》2020年版四部通则1213系测定硫酸鱼精蛋白供试品(T)中和肝素钠标准品(S)所致延长新鲜兔血或猪、兔血浆凝结时间的程度，以测定供试品的效价，该法中血浆凝结是一个渐变过程，血浆凝结终点的判断靠人眼观察，主观性强，误差大，需要多次重复试验，另外观察需要将试管取出观察，频繁的观察会导致试管脱离恒温环境，影响凝结的时间；本发明专利采用光纤探头，500nm波长下测定溶液吸光度，测定硫酸鱼精蛋白的效价，终点判断准确，可以同时测定多个样品。技术研发人员：汪红梅,霍立,胡延贵,袁永勃,王远莉受保护的技术使用者：重庆士立德医药科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/20