一种捻转血矛线虫四期幼虫培养基及培养方法

本发明涉及一种捻转血矛线虫四期幼虫培养基及培养方法，属于生物领域。

背景技术：

1、捻转血矛线虫(haemonchus contortus)是一种寄生在牛羊等反刍动物皱胃内的一种吸血性寄生线虫，在全世界范围内广泛流行，其生活史包括自由生活阶段和寄生生活阶段。四期(l4)是寄生生活的起始阶段，该时期生活环境发生巨大变化，迁移至宿主皱胃黏膜基底部开始以吸血为生，在发育至四期末期时，由于吸血量增大而引起宿主动物贫血、消瘦，严重者甚至造成宿主动物死亡，给养殖业带来巨大经济损失。该寄生虫的防控主要依靠化学药物，但长期不合理的药物滥用，已经导致全球范围内严重的耐药性问题。

2、捻转血矛线虫是一种吸血性寄生线虫药物开发的模式生物，寄生期体外培养平台的建立可大大节约药物筛选的实验成本。此外，从捻转血矛线虫肠道内提取的天然蛋白例如h-11、h-gal-gp等已被证实具有非常高的免疫保护力，但由于虫体获取需要价格高昂的活体动物，致使商业化疫苗一直无法大规模生产。因此捻转血矛线虫体外培养平台，尤其是寄生期体外培养平台的建立对寄生虫的防控具有重要意义，在药物和疫苗研发生产等方面都具有极大的应用价值。

3、但是捻转血矛线虫体外培养平台的建立却发展缓慢，目前，自由生活阶段(虫卵-三期幼虫)的体外培养体系早已建立，包括粪菌培养法和培养基培养法都已成熟，但是寄生阶段的体外培养却发展缓慢，目前主要停滞在四期早期，截止现在还没有可以商业应用的捻转血矛线虫四期幼虫的培养体系。

4、参考文献：

5、1.arsenopoulos kv,fthenakis gc,katsarou ei,papadopoulose.haemonchosis:achallenging parasitic infection of sheep and goats.animals(basel),2021,11(2):3632.nikolaou s,gasser rb.prospects for exploringmolecular developmental processes inhaemonchus contortus.int j parasitol,2006,36:859-868

6、3.stoll nr.in vitro conditions favoring ecdysis at the end of thefirst parasitic stage ofhaemonchus contortus(nematoda).growth,1940,4:383-406

7、4.stringfellow f.cultivation of haemonchus contortus(nematoda:trichostrongylidae)

8、frominfective larvae to the adult male and the egg-laying female.thejournal ofparasitology,1986,339-345

9、5.niciura scm,minho ap,mcintyre j,benavides mv,okino ch,esteves sn,chagasacs,amarante aftd.in vitro culture of parasitic stages of haemonchuscontortus.

10、rev bras parasitol vet.2023jan 13；32(1):e010122.

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种捻转血矛线虫四期幼虫培养基及培养方法，该培养基可以培养捻转血矛线虫至四期末期，并提高幼虫的存活率和发育率。

2、上述目的是通过以下技术方案实现的：

3、一种捻转血矛线虫四期幼虫培养基，包括基础培养基和辅助成分，所述辅助成分的种类及其占基础培养基的含量为：

4、

5、优选地，所述基础培养基由nctc-109和lb组成，二者的体积比为1:2。

6、优选地，所述辅助成分的种类及其占基础培养基的含量为：

7、

8、优选地，所述离心血的制备方法如下：将新鲜脱纤维蛋白绵羊血反复冻融，然后高速离心，收集上清，4℃保存。

9、本发明提供的培养基能将捻转血矛线虫从四期早期培养至四期末期，存活率可达90％以上。

10、本发明进一步提供一种培养捻转血矛线虫四期幼虫的方法，包括以下步骤：将脱鞘三期幼虫发育为四期幼虫，然后加入到所述的培养基中进行培养至四期末期。

11、优选地，所述培养的条件是：温度39℃，co2含量20％。

12、本发明的有益效果是：

13、本发明实现了捻转血矛线虫四期末期幼虫的体外培养，有利于促进该寄生虫的相关药物和疫苗研发，对寄生虫的防控具有重要意义。本发明所培养的四期幼虫存活率和发育率高，同时还具有培养周期短，操作简单，培养基原料易于获取，生产成本低等优点。

技术特征：

1.一种捻转血矛线虫四期幼虫培养基，包括基础培养基和辅助成分，其特征在于：所述辅助成分的种类及其占基础培养基的含量为：

2.如权利要求1所述的捻转血矛线虫四期幼虫培养基，其特征在于：所述基础培养基由nctc-109和lb组成，二者的体积比为1:2。

3.如权利要求1所述的捻转血矛线虫四期幼虫培养基，其特征在于：所述辅助成分的种类及其占基础培养基的含量为：

4.如权利要求1所述的捻转血矛线虫四期幼虫培养基，其特征在于，所述离心血的制备方法如下：将新鲜脱纤维蛋白绵羊血反复冻融，然后高速离心，收集上清，4℃保存。

5.权利要求1-4任一项所述的培养基在培养捻转血矛线虫四期幼虫中的应用。

6.一种培养捻转血矛线虫四期幼虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：将脱鞘三期幼虫发育为四期幼虫，然后加入到权利要求1-4任一项所述的培养基中进行培养。

7.如权利要求6所述的培养捻转血矛线虫四期幼虫的方法，其特征在于：所述培养的条件是，温度39℃，co2含量20％。

技术总结本发明公开了一种捻转血矛线虫四期幼虫培养基，包括基础培养基和辅助成分，所述辅助成分由丙酮酸、非必须氨基酸、L‑谷氨酰胺、三抗、胎牛血清、离心血、L‑谷胱甘肽组成。本发明还公开了一种培养捻转血矛线虫四期幼虫的方法，包括将脱鞘三期幼虫发育为四期幼虫，然后加入到所述培养基中进行培养至四期末期幼虫的步骤。本发明实现了捻转血矛线虫四期幼虫的体外培养，有利于促进该寄生虫的相关药物和疫苗研发，对寄生虫的防控具有重要意义。技术研发人员：胡敏,刘璐,张宗山,王春群,刘慧,叶莉莎,刘峰,张耀,伍思敏受保护的技术使用者：华中农业大学技术研发日：技术公布日：2024/8/27