一种米库氯铵及其有关物质的高效液相色谱检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种米库氯铵及其有关物质的高效液相色谱检测方法。

背景技术：

1、米库氯铵是一种非去极化神经肌肉阻滞剂，用于全身麻醉的辅助用药，使骨骼肌松弛，以利于气管插管和机械通气。神经肌肉阻滞剂根据作用机制分为去极化和非去极化；根据作用时间分为短效、中效、长效三类。去极化药物具有严重的副作用，例如心脏骤停，恶性高温、心律失常等。短效药物比长效药物更具有安全性，持续时间长的药物可导致严重的脑损伤。

2、米库氯铵是目前临床上唯一的短效非去极化肌松药，起效快、作用时间短、无蓄积作用，可迅速恢复。米库氯铵不依赖器官代谢，可被血浆中的胆碱酯酶快速降解，没有潜在神经毒性，可广泛应用于神经外科实践。米库氯铵是唯一不需要常规进行拮抗的肌松药，肌松残余发生率远远低于其他非去极化肌松药，无明显组胺释放，过敏反应发生率低。

3、米库氯铵属于多手性中心化合物，市场上销售的成药是反-反式、反-顺式、顺-顺式三种异构体的混合物，比例通常为52-62％，34-40％，4-8％，米库氯铵成品中还含有明显的四种降解杂质，即反式季铵醇(杂质a)、顺式季铵醇(杂质b)、反式季铵酯(杂质c)、顺式季铵酯(杂质d)，(e)-辛-4-烯-1，8-二酸是合成米库氯铵的的关键物料，容易发生在成品中的情况，同时该杂质也是米库氯铵潜在的降解杂质之一，需要进行控制。结构式如下：

4、杂质c：

5、

6、杂质d：

7、

8、(e)-辛-4-烯-1，8-二酸：

9、

10、目前关于米库氯铵的分析检测方法非常少，专利us4761418报道了检测米库氯铵三种异构体和四种杂质的的色谱分离方法，但是其采用三氟乙酸和硫酸做流动相，不仅影响样品的稳定性，同时也会腐蚀仪器设备，将导致样品检测结果的不稳定性增大，且设备难以长久运行此方法，不适合工业生产的的检测需求；中国专利申请cn107782821a公开了一种米库氯铵三种异构体和有关物质的检测方法，但对其他杂质检测能力不足，且检测非常耗时，导致试剂用量较大，污染环境，同时增加企业的研发和生产成本负担；cn117434167a公布了一种米库氯铵中(e)-辛-4-烯-1，8-二酸的检测方法，但是该方法仅适用于米库氯铵中(e)-辛-4-烯-1，8-二酸的检测，对于其他杂质无法适用。

11、面对目前米库氯铵及其有关物质检测方法存在的问题，有必要建立一种米库氯铵分析检测方法，能全面准确的分析检测米库氯铵中的各种杂质，保证药品质量，同时能兼顾合理、高效的特点，降低分析成本，降低企业研发压力。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种新的米库氯铵的检测方法。该方法利用高效液相色谱仪可以在短时间内实现对米库氯铵三种异构体、五种降解杂质以及其他杂质的快速分离检测。

2、本发明的第一个目的是提供一种米库氯铵及其有关物质的高效液相色谱检测方法，色谱条件为：

3、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，规格30～250mm×2.1～4.6mm，1.6～5.0μm；

4、柱温：10～50℃；

5、检测器：紫外检测器；

6、检测波长：210nm～360nm；

7、流动相a：体积比水溶液:有机溶剂＝9:1～5:5；

8、流动相b：体积比水溶液:有机溶剂＝10:0～0:10；

9、流速：0.2～1.5ml/min；

10、进样体积：1～100μl；

11、洗脱方式：梯度洗脱；

12、所述米库氯铵包括米库氯铵反-反式、反-顺式、顺-顺式三种异构体；所述有关物质包括

13、

14、优选地，梯度洗脱的条件为

15、 时间(分钟) 流动相a(％) 流动相b(％) 0 100～95 0～5 3.6 95～90 5～10 4.5 90-85 10～15 7.5 85～75 15～25 9.1 80～75 20～25 16.3 75～70 25～30 19.6 60～55 40～45 27.0 60～55 40～45 27.5 100～5 0～5 30.0 100～5 0～5

16、。

17、优选地，所述色谱柱为agilent poroshell 120ec-c18，150mm×3.0mm，2.7μm，所述柱温为30℃，所述流速为0.8ml/min，所述进样体积为5μl。

18、优选地，检测模式为双波长模式，检测波长为210～290nm。

19、优选地，所述检测波长为210nm和280nm。

20、优选地，流动相a和流动相b中的水溶液各自独立的选自纯水、含盐缓冲液和不含盐缓冲液中的至少一种；流动相a和流动相b的有机溶剂各自独立的选自甲醇、异丙醇和乙腈中的至少一种。

21、优选地，所述含盐缓冲液选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、乙酸铵、甲酸铵、碳酸氢钠、碳酸氢钠缓冲液中的至少一种；含盐缓冲液和不含盐缓冲液选择氨水、氢氧化钠、磷酸、甲酸、乙酸中的至少一种来调节它们各自的水溶液的ph。

22、优选地，所述含盐缓冲液浓度为0～0.15mol/l，ph为2.0～7.0；所述不含盐缓冲液的ph为2.0～7.0。

23、优选地，所述含盐缓冲液浓度为0.07～0.15mol/l，ph为2.0～4.0；所述不含盐缓冲液的ph为2.0～4.0。

24、优选地，具体步骤如下：

25、步骤1：制备供试品溶液：取米库氯铵供试品，用流动相a溶解并稀释，制成浓度为0.1～2.0mg/ml的供试品溶液；

26、步骤2：精密量取上述供试品溶液1～100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；

27、色谱条件为：

28、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，规格150mm×3.0mm，2.7μm；

29、柱温：30℃；

30、检测波长：210nm和280nm；

31、流动相a：体积比0.075mmol/l磷酸二氢钾溶液:甲醇:乙腈＝75:20:5；

32、流动相b：体积比乙腈:水溶液＝8:2，所述水溶液为磷酸调节纯水至ph 3.0；

33、流速：0.8ml/min；

34、进样体积：5μl；

35、洗脱方式：梯度洗脱：

36、 时间(分钟) 流动相a(％) 流动相b(％) 0 100～95 0～5 3.6 95～90 5～10 4.5 90-85 10～15 7.5 85～75 15～25 9.1 80～75 20～25 16.3 75～70 25～30 19.6 60～55 40～45 27.0 60～55 40～45 27.5 100～5 0～5 30.0 100～5 0～5

37、。

38、本发明还提供上述的方法在检测米库氯铵反-反式、反-顺式、顺-顺式三种异构体及其有关物质中的用途。

39、本发明的优点：

40、本发明方法简单，操作方便，高效快捷，采用对仪器友好且常见廉价的流动相，在30min内实现对米库氯铵三种异构体、五种降解杂质及其他杂质的分离检测，该方法选择的流动相不会对仪器造成损害，检测时间大幅缩短，试剂用量大幅减少，且杂质分离效果更好，检出更加全面，是更加高效、合理的分析方法。样品稳定性良好，保证了产品质量，更有利于企业的生产及日常检测，提高效率，大幅减少检测成本。