一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法与流程

本发明涉及分析检测，具体公开了一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法。

背景技术：

1、非奈利酮，化学名为(4s)-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-甲酰胺，是一种新型非甾体类盐皮质激素受体(mr)拮抗剂，较传统的甾体类盐皮质激素受体拮抗剂有更好的亲和力和选择性，同时，非奈利酮的血浆半衰期只有约2h-3h，可以极大的降低甾体类盐皮质激素受体拮抗剂产生的高钾血症。主要用于治疗ii型糖尿病所致的成人慢性肾病。

2、非奈利酮有一个手性中心，其中s构型的非奈利酮对mr的亲和力为18nm，发挥了主要的拮抗作用。现有技术已经报道了s构型的非奈利酮的合成路线，其中，4-二甲氨基吡啶(dmap)是催化合成非奈利酮中间体5，即非奈利酮外消旋体4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-甲酰胺关键催化剂之一。dmap是一种超强亲核的酰化作用催化剂，能够显著催化高位阻、低反应性的醇和胺的酰化反应，其活性约为吡啶的104-106倍。但是，4-二甲氨基吡啶作为具有警示结构的基因毒性杂质，其在体内代谢后会产生一种叫做4-二甲氨基吡啶-n-氧化物的代谢产物，该物质可以与细胞内的蛋白质结合，导致蛋白质的结构和功能发生改变，从而影响细胞的正常代谢和生理功能。此外，4-二甲氨基吡啶-n-氧化物还可以与dna结合，导致dna损伤和突变，从而增加细胞癌变的风险。因此，在非奈利酮合成过程中，需严格控制非奈利酮中间体5中4-二甲氨基吡啶的残留，从而保证非奈利酮原料药的质量。

3、

4、目前，用于4-二甲氨基吡啶的检测方法容易出现出峰时间短、受溶剂峰干扰且峰型较差甚至出现拖尾的问题，并且，现有技术中并没有一种可用于检测非奈利酮中间体中4-二甲氨基吡啶的方法。基于此，研发一种专用于检测非奈利酮中间体中4-二甲氨基吡啶的方法对于控制非奈利酮的质量具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术中用于4-二甲氨基吡啶的检测方法容易出现出峰时间短、受溶剂峰干扰、峰型较差甚至出现拖尾的问题且并没有用于检测非奈利酮中间体中4-二甲氨基吡啶的方法的问题，本发明提供了一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法。

2、为达到上述发明目的，本发明提供了如下的技术方案：

3、本发明第一方面提供了一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法，所述非奈利酮中间体为4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3甲酰胺，所述杂质为4-二甲氨基吡啶，所述检测方法为高效液相色谱法，具体包括如下步骤：

4、步骤一、供试品溶液和对照品溶液的配制：

5、供试品溶液的配制：将4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3甲酰胺样品溶于有机醇中，得供试品溶液；

6、对照品溶液的配制：将4-二甲氨基吡啶对照品溶于有机醇中，得对照品溶液；

7、步骤二、取对照品溶液和供试品溶液，按照下述色谱条件进样检测：

8、色谱条件为：色谱柱为c18色谱柱；

9、流动相a：含磷酸的水溶液；

10、流动相b：甲醇；

11、洗脱方式：等度洗脱；

12、检测波长：275-285nm。

13、相比于现有技术，本发明提供了一种利用高效液相色谱法检测非奈利酮中间体4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3甲酰胺中4-二甲氨基吡啶的方法。该方法可以在短时间内完成非奈利酮中间体中4-二甲氨基吡啶的检测，利用其检测的4-二甲氨基吡啶与主成分分离的效果优异，检测效率高。同时，该方法具有操作简便、专属性强、灵敏度高等优点，且利用其检测非奈利酮中间体中的4-二甲氨基吡啶的含量具有良好的线性关系，良好的精密度和耐用性，各项方法验证均能符合要求。本发明提供的检测方法能够准确检测非奈利酮中间体4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3甲酰胺中4-二甲氨基吡啶的含量，可作为非奈利酮中间体质量监控的依据，有益于非奈利酮的质量控制。

14、进一步优选的，所述检测波长为280nm。

15、优选的，所述流动相a中磷酸的体积百分含量为0.08％-0.12％。

16、进一步优选的，所述流动相a中磷酸的体积百分含量为0.1％。

17、优选的，所述流动相a和流动相b的体积比为38:62-42:58。

18、进一步优选的，所述流动相a和流动相b的体积比为40:60。

19、优选的，所述有机醇为甲醇。

20、优选的，所述色谱柱的规格为4.6×250mm，填料直径为5μm。

21、进一步优选的，所述色谱柱为ultimate aq-c18。

22、优选的，步骤一中，所述对照品溶液的浓度为0.04-0.06μg/ml。

23、进一步优选的，步骤一中，所述对照品溶液的浓度为0.05μg/ml。

24、优选的，步骤一中，所述供试品溶液的浓度为0.48mg/ml-0.52mg/ml。

25、进一步优选的，步骤一中，所述供试品溶液的浓度为0.5mg/ml。

26、优选的，所述色谱条件还包括柱温为20-30℃。

27、进一步优选的，所述柱温为25℃。

28、优选的，所述色谱条件还包括进样量为10μl。

29、优选的，所述色谱条件还包括流速为0.95-1.05ml/min。

30、进一步优选的，所述流速为1.0ml/min。

31、综上所述，本发明提供了一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法，该方法具有专属性强、灵敏度高、检测快速、测试结果准确可靠等优点。同时，本发明提供的检测方法具有良好的精密度、稳定性和耐用性，各项方法验证均能符合要求，适用于非奈利酮中间体中4-二甲氨基吡啶的定量检测。利用本发明的检测方法有效解决了现有技术中用于4-二甲氨基吡啶的检测方法容易出现出峰时间短、受溶剂峰干扰、峰型较差甚至出现拖尾的问题且并没有用于检测非奈利酮中间体中4-二甲氨基吡啶的方法的问题，可作为非奈利酮质量监控的依据。

技术特征：

1.一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法，所述非奈利酮中间体为4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3甲酰胺，所述杂质为4-二甲氨基吡啶，其特征在于：所述检测方法为高效液相色谱法，具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述流动相a中磷酸的体积百分含量为0.08％-0.12％。

3.如权利要求1或2所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述流动相a和流动相b的体积比为38:62-42:58。

4.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述有机醇为甲醇。

5.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为4.6×250mm，填料直径为5μm。

6.如权利要求5所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱柱为ultimate aq-c18。

7.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：步骤一中，所述对照品溶液的浓度为0.04-0.06μg/ml；和/或

8.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括柱温为20-30℃。

9.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括进样量为10μl。

10.如权利要求1所述的非奈利酮中间体中杂质的检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括流速为0.95-1.05ml/min。

技术总结本发明涉及分析检测技术领域，具体公开了一种非奈利酮中间体中杂质的检测方法。本发明采用高效液相色谱法检测非奈利酮中间体中的杂质4‑二甲氨基吡啶，检测条件如下：色谱柱为C18色谱柱；流动相A：含磷酸的水溶液；流动相B：甲醇；等度洗脱方式进行洗脱，检测波长为273‑283nm。本发明提供的检测方法具有专属性强、灵敏度高、检测快速、测试结果准确可靠等优点，同时具有良好的精密度、稳定性和耐用性。本发明有效解决了现有技术中用于4‑二甲氨基吡啶的检测方法存在的出峰时间短、受溶剂峰干扰、峰型较差，甚至出现拖尾的问题，且并没有用于检测非奈利酮中间体中4‑二甲氨基吡啶的方法的问题，可作为非奈利酮质量监控的依据。技术研发人员：李媛,杨轩,刘璐,杨娴,曹柳,孙晓飞,李磊受保护的技术使用者：石家庄四药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/9