包含激肽释放酶相关肽酶2抗原结合结构域的免疫缀合物及其用途的制作方法

本发明提供免疫缀合物，诸如放射性缀合物，其包含结合激肽释放酶相关肽酶2(hk2)蛋白的抗原结合结构域，以及制备和使用它们的方法。

背景技术：

1、对于男性而言，前列腺癌是第二常诊断出的癌症和第六大癌症致死原因，在全世界男性中占总新癌症病例的约14％以及总癌症死亡的约6％。基于疾病的程度、激素状态以及是否存在可检测到的转移，将前列腺癌从被诊断出到死亡的过程最恰当地分类为以下一系列临床分期：局部疾病、放射疗法或外科手术后前列腺特异性抗原(psa)的水平升高但不存在可检测到的转移，以及在非去势或去势期的临床转移。虽然外科手术、放射或这两者的组合对于患有局部疾病的患者可能有效，但是这些患者中有相当比例会患上复发性疾病，如通过psa的水平升高所证实，复发可导致转移发展，特别是在高风险组中-转变为该疾病的致死期。

2、雄激素耗竭疗法(adt)是具有以下通常可预见到的结果的标准治疗：psa水平下降，肿瘤不增殖的稳定期，然后是psa水平升高并再生长为去势难治性疾病。在过去，adt一直是转移性前列腺癌患者的护理标准。

3、激肽释放酶相关肽酶2(hk2，hk2)是具有对前列腺组织和前列腺癌有特异性的雄激素受体(ar)驱动表达的胰蛋白酶样酶。hk2表达限于前列腺和前列腺癌组织，然而最近已展示出，在通过类固醇激素适当活化ar-途径后，在乳腺癌系和原代患者样品中可检测到hk2(美国专利公布2018/0326102)。当前列腺的高度结构化组织在过度增大或恶性转化后受损时，发生无催化活性的hk2逆行释放到血液中。

4、仍然需要用于治疗和诊断目的的下一代hk2靶向疗法。

技术实现思路

1、本发明的实施方案涉及一种用于治疗用途或显像的抗-hk2放射性缀合物，其包含与结合放射性金属的螯合剂缀合的抗原结合结构域。根据特定的实施方案，与包含全长抗体的抗hk2放射性缀合物相比，包含抗原结合结构域的抗hk2放射性缀合物具有更短的半衰期。

2、在许多情况下，免疫球蛋白g(igg)在人中的循环半衰期为大约10天-21天。完整igg中的fc结构域能够结合新生儿fc受体(fcrn)，从而导致抗体再循环和最小的内体降解。fcrn在血清igg体内稳态以及igg分子从母亲到胎儿的胎盘转移中起关键作用。胞饮作用后，早期内体的酸性环境允许igg(以及白蛋白)与fcrn结合，这提供了免于降解的保护并且促进了igg运输回到细胞外环境，其中这些分子在暴露于生理ph时离解回到循环中。

3、抗原结合结构域诸如fab的循环半衰期趋于比igg的循环半衰期短得多。由于fab片段缺乏fc结构域，fcrn介导的增强的半衰期机制缺乏，因此单独的fab具有较短的半衰期(例如，小于24小时，或小于12小时，并且在一些情况下为约2小时-3小时)。

4、本发明的一个实施方案提供了一种免疫缀合物，该免疫缀合物包含：与对激肽释放酶相关肽酶2(hk2)具有结合特异性的抗原结合结构域缀合的治疗部分。

5、根据某些实施方案，治疗部分为细胞毒性剂。

6、根据某些实施方案，治疗部分为显像剂。

7、根据某些实施方案，治疗部分包含放射性金属。合适的放射性金属的非限制性示例包括：225ac、177lu、32p、47sc、67cu、77as、89sr、90y、99tc、105rh、109pd、111ag、131i、149tb、152tb、155tb、153sm、159gd、165dy、166ho、169er、186re、188re、194ir、198au、199au、211at、212pb、212bi、213bi、223ra、255fm、227th、177lu、62cu、64cu、67ga、68ga、86y、89zr和111in。

8、根据某些实施方案，治疗部分为包含225ac的细胞毒性剂。

9、根据某些实施方案，治疗部分为包含111in或64cu的显像剂。

10、根据某些实施方案，治疗部分包含放射性金属络合物，其中该放射性金属络合物包含与螯合剂结合的放射性金属，并且其中该螯合剂与对激肽释放酶相关肽酶2(hk2)具有结合特异性的抗原结合结构域缀合。

11、根据某些实施方案，螯合剂为1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)、s-2-(4-异硫氰基苄基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(nota)、1,4,8,11-四氮杂环十二烷-1,4,8,11-四乙酸(teta)、3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-4-(s)-(4-异硫氰基苄基)-3,6,9-三乙酸(pcta)、5-s-(4-氨基苄基)-1-氧杂-4,7,10-三氮杂环十二烷-4,7,10-三(乙酸)(do3a)或它们的衍生物。

12、根据某些实施方案，螯合剂为dota。

13、根据某些实施方案，螯合剂为h2bp18c6或h2bp18c6衍生物。

14、根据某些实施方案，放射性金属络合物为如本文所述的式(i-m)或式(ii-m)或式(iii-m)的放射性络合物，其中r11包含对激肽释放酶相关肽酶2(hk2)具有结合特异性的抗原结合结构域，并且m为放射性金属。

15、根据某些实施方案，放射性金属络合物为如本文所述的式(iv-m)或式(v-m)或式(vi-m)的放射性络合物，其中r4包含对激肽释放酶相关肽酶2(hk2)具有结合特异性的抗原结合结构域，并且m+为放射性金属。

16、根据某些实施方案，治疗部分为澳瑞他汀衍生物，诸如mmae(一甲基澳瑞他汀e)或mmaf(一甲基澳瑞他汀f)。

17、根据某些实施方案，结合hk2的抗原结合结构域为scfv、(scfv)2、fv、fab、f(ab')2、fd、dab或vhh。

18、根据某些实施方案，对hk2具有结合特异性的抗原结合结构域为fab。

19、根据某些实施方案，抗原结合结构域包含分别为seq id no:170(syyws)、seq idno:171(yiyysgstnynpslks)、seq id no:172(ttifgvvtpnfyygmdv)、seq id no:173(rasqgissyla)、seq id no:174(aastlqs)和seq id no:175(qqlnsyplt)的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3。

20、根据某些实施方案，结合hk2的抗原结合结构域包含与seq id no:162

21、(qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsggsissyywswirqppgkglewigyiyysgstnynpslksrvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyycagttifgvvtpnfyygmdvwgqgttvtvss)的vh有至少80％(例如，至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的vh和与seq id no:163

22、(diqmtqspsflsasvgdrvtitcrasqgissylawyqqkpgkapkfliyaastlqsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyycqqlnsypltfgggtkveik)的vl有至少80％(例如，至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％)同一性的vl。

23、根据某些实施方案，结合hk2的抗原结合结构域包含seq id no:162的vh和seq idno:163的vl。

24、根据某些实施方案，抗原结合结构域为fab，其包含：a)分别为seq id no:170、171、172、173、174和175的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3；和/或b)seq id no:162的vh和seq id no:163的vl。

25、根据某些实施方案，该免疫缀合物为短半衰期免疫缀合物。

26、根据某些实施方案，治疗受试者的表达hk2的癌症的方法包括向该受试者施用治疗有效量的根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物。

27、根据某些实施方案，减少受试者中表达hk2的肿瘤细胞的量的方法包括向该受试者施用治疗有效量的根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物。

28、根据某些实施方案，治疗受试者的前列腺癌的方法包括向该受试者施用治疗有效量的根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物。

29、根据某些实施方案，该前列腺癌是复发性前列腺癌、难治性前列腺癌、恶性前列腺癌或去势难治性前列腺癌、或它们的任何组合。

30、根据某些实施方案，该前列腺癌是转移性去势难治性前列腺癌。

31、根据某些实施方案，检测受试者的前列腺癌的存在的方法，该方法包括向怀疑患有前列腺癌的受试者施用根据前述实施方案中任一项所述的免疫缀合物，以及使该缀合物所结合的生物结构可视化(例如，通过计算机断层扫描或正电子发射断层扫描)，从而检测前列腺癌的存在，其中该免疫缀合物优选包含显像剂，诸如111-in或64-cu。根据某些实施方案，该方法包括将治疗部分与对激肽释放酶相关肽酶2(hk2)具有结合特异性的抗原结合结构域缀合。

32、根据某些实施方案，制备如本文所述的放射性免疫缀合物的方法包括将放射性金属与螯合剂结合，该螯合剂与对激肽释放酶相关肽酶2(hk2)具有结合特异性的抗原结合结构域缀合。

33、根据某些实施方案，短半衰期放射性免疫缀合物包含放射性金属络合物，其中该放射性金属络合物包含与螯合剂结合的225ac，并且其中该螯合剂与对hk2具有结合特异性的fab缀合，所述fab包含分别为seq id no:170、171、172、173、174和175的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3。根据某些实施方案，所述fab包含seq id no:162的vh和seqid no:163的vl。