一种诱导永福报春苣苔多倍体的方法

本发明属于植物多倍体育种，具体涉及一种诱导永福报春苣苔多倍体的方法。

背景技术：

1、永福报春苣苔(primulinayungfuensis)是苦苣苔科报春苣苔属的多年生草本植物。它主要分布于我国广西壮族自治区的桂林市等地海拔200-450米的石灰岩山林背阴处岩壁或山洞附近。永福报春苣苔的基生叶形状为椭圆形、椭圆状卵形或卵形，顶端钝或微钝，基部宽楔形，边缘有浅钝齿或浅波状。叶子的上表面被有紫色毛，下表面为紫色，部分植株叶脉为明显银白色。花序为聚伞花序，着生1-6朵筒状淡紫色花冠，花期为3月。永福报春苣苔为目前市场上接受度较高的报春苣苔属花卉，有着艳丽且较大的长筒状花朵、繁密的花量以及华丽的叶纹，生长繁殖迅速且相对较耐旱。

2、对于观赏花卉而言，植株的多倍化效应可能会带来叶片增多、花器官增大、色素含量增加、抗逆性提高以及恢复杂种后代育性等诸多优势。永福报春苣苔目前未报道多倍体的诱导方法，所培育的花卉品种均为二倍体。开发永福报春苣苔的多倍体诱导技术，有利于提高其观赏价值，也为后续的育种开发提供新的遗传资源。

技术实现思路

1、本发明针对永福报春苣苔的上述不足，提供了一种诱导永福报春苣苔多倍体的方法，填补了永福报春苣苔多倍体诱导方法的空白。本发明通过组织培养获得永福报春苣苔组培无菌苗，再利用无菌苗叶片为多倍体诱导的外植体，以含有质量分数0.05％的秋水仙素和体积分数2％的二甲基亚砜的ms培养基为多倍体诱导培养基，诱导15d，再将诱导后的永福报春苣苔外植体转移至芽分化培养基上诱导分化不定芽，不定芽生长至2-3cm高度后即可出瓶移栽，驯化生长30-60d后取植株材料进行流式细胞术鉴定倍性，即可获得永福报春苣苔多倍体。利用该方法可快速获得永福报春苣苔多倍体，整个诱导及出芽、移栽、鉴定过程时间为4-5个月，转化率最高达到63.33％。

2、本发明的目的是提供一种诱导永福报春苣苔多倍体的方法，包括如下步骤：

3、s1.在无菌环境下将消毒后的永福报春苣苔叶片切割成小块，接种于芽分化培养基进行不定芽分化培养，每培养30d继代一次，至获得2-3cm高的永福报春苣苔组培无菌苗；

4、s2.从所获得的永福报春苣苔组培无菌苗上分离出1-2cm长的无菌苗叶片，接种于多倍体诱导培养基中诱导培养15d；

5、s3.将在多倍体诱导培养基中诱导培养15d后的无菌苗叶片转移至芽分化培养基中进行再生芽分化培养，至无菌苗叶片分化出再生芽；

6、s4.将再生芽接种至生根培养基中进行生根培养，并培养至再生芽高2-3cm后，移栽至混合基质中继续培养，获得永福报春苣苔多倍体植株；

7、所述的芽分化培养基组成如下：2mg/l 6-ba、1mg/l naa，余量为ms培养基；

8、所述的多倍体诱导培养基组成如下：质量分数为0.01％-0.05％的秋水仙素、体积分数为2.0％的二甲基亚砜，余量为ms培养基；

9、所述的生根培养基组成如下：0.5mg/l iba，余量为1/2ms培养基。

10、优选，步骤s1所述的消毒为将永福报春苣苔叶片用清水冲洗干净，用体积分数为75％的酒精浸泡15s，再用体积分数为0.05％的升汞水溶液浸泡10min，用无菌水洗涤叶片4-5次。

11、优选，所述的步骤s1中的小块为5mm×5mm的方形小块。

12、优选，所述的培养的条件为温度25±2℃、光强60μmol/m2/s、每天12小时光照。

13、优选，所述的步骤s2中的接种为叶片近轴面朝上，叶柄稍插入培养基中。

14、优选，所述的步骤s4中的混合培养基为赤玉土∶泥炭∶珍珠岩∶火山岩按照体积比1∶2∶1∶1混合所得的基质。

15、本发明的有益效果：

16、1.该方法能够高效诱导永福报春苣苔多倍体，填补了永福报春苣苔无多倍体诱导技术的空白。

17、2.多倍体诱导率高，达到了63.33％，嵌合体率低，所需诱导时间短，整个诱导、出芽、移栽以及鉴定的过程时间为4-5个月，对于永福报春苣苔的育种开发具有重要的应用前景。

技术特征：

1.一种诱导永福报春苣苔多倍体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s1中的消毒为将永福报春苣苔叶片用清水冲洗干净，用体积分数为75％的酒精浸泡15s，再用体积分数为0.05％的升汞水溶液浸泡10min，用无菌水洗涤叶片4-5次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s1中的小块为5mm×5mm的方形小块。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的培养的条件为温度25±2℃、光强60μmol/m2/s、每天12小时光照。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s2中的接种为叶片近轴面朝上，叶柄稍插入培养基中。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤s4中的混合培养基为赤玉土∶泥炭∶珍珠岩∶火山岩按照体积比1∶2∶1∶1混合所得的基质。

技术总结本发明公开了一种诱导永福报春苣苔多倍体的方法。本发明以永福报春苣苔组培无菌苗的叶片为外植体，以添加了浓度为质量分数为0.01％的秋水仙素和体积分数为2％的二甲基亚砜的MS培养基作为多倍体诱导培养基，通过混培法诱导永福报春苣苔多倍体，四倍体的诱导率最高达到63.33％。本发明为首个永福报春苣苔的多倍体诱导体系，填补了技术空白，对于永福报春苣苔的园艺育种与应用有较高的价值。技术研发人员：陈雅平,傅佳鑫,康明受保护的技术使用者：中国科学院华南植物园技术研发日：技术公布日：2024/9/17