四磷酸二鸟苷的制备及应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及四磷酸二鸟苷的制备及应用。

背景技术：

1、四磷酸二鸟苷为4个磷酸基结合于两个鸟苷的化合物(gppppg)，可水解转化成三磷酸腺苷(atp)，从而为细胞供给能量。四磷酸二鸟苷目前主要作为一种功能性原料应用于化妆品行业，主要有以下功能：一、供给能量：该物质进入人体后迅速转化成atp，给皮肤细胞瞬间补充能量，唤醒因衰老或受热、uv射线、化学污染等环境因素影响而休眠的细胞。二、活化细胞：该物质进入人体后可激活细胞的各种生理活动及新陈代谢，提高细胞对多种蛋白合成能力，如内角质纤维聚集蛋白、角蛋白、胶原蛋白、纤连蛋白、热休克蛋白等，提高自我修复补充的能力。同时还能促进真皮层成纤维细胞分裂增殖，使胶原纤维、网状纤维和弹性纤维增加，调节基质中胶原酶、透明质酸、硫酸软骨素、肝素的含量和活性，维持皮肤真皮结缔组织中的水分，使结缔组织处于疏松状态，防止胶原蛋白由溶解状态变为不溶解状态，从而防止皱纹的产生，并有效修复已经形成的皱纹。三、dna保护：该物质能够有效保护dna的三维立体螺旋结构免受紫外线等环境因素的损伤。

2、专利cn201010181956.8《一种从生物体中提取gp4g的方法》公开了一种从特定生物材料中提取四磷酸二鸟苷(gp4g)的详细过程：首先，经过筛选和清洗的生物原料(如高盐环境下的卤虫卵)经过脱水和破碎处理。接着，使用低温酸性溶液进行浸取并充分搅拌，之后分离上清液。上清液经真空浓缩和碱性溶液中和处理后，收集固体析出物并重新溶解，调整ph值。随后，通过强酸性阳离子交换树脂吸附目标产物，再利用酸性洗脱剂分段洗脱并收集。之后，采用弱碱性阴离子交换树脂进行脱色脱盐。最后，在特定的真空条件下浓缩得到至少含6％gp4g的产物，根据需求进一步加工。

3、该四磷酸二鸟苷gp4g的提取方法的缺点在于其复杂的多步骤流程，不仅增加了操作难度和成本，还可能导致较高的能源消耗和环境影响，尤其是化学试剂的大量使用和废水产生。此外，尽管有尝试通过溶剂循环利用来节约资源，整个过程仍可能效率不高，影响生产速度，并且最终产物形态和纯度可能受限，需进一步处理以满足特定应用需求。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种四磷酸二鸟苷的制备方法。

2、本发明所提供的四磷酸二鸟苷的制备方法，包括如下步骤：

3、1)原料处理

4、将卤虫卵破碎，加入氢氯酸溶液，低温搅拌，离心，收集上清液，所述上清液含有四磷酸二鸟苷；

5、2)活性炭柱吸附并洗脱

6、将所得上清液加入到活性炭柱中，采用去离子水清洗去除未被吸附的杂质后，洗脱液洗脱，得到含有四磷酸二鸟苷的洗脱液；

7、3)浓缩

8、将所得含有四磷酸二鸟苷的洗脱液减压蒸发，得到浓缩溶液；

9、4)四磷酸二鸟苷的分离纯化

10、(1)向所得浓缩溶液中加入nh4hco3，并调节nh4hco3的浓度至0.001-0.005m(具体可为0.002m)，添加氨水调节ph值至8.5-9.0(具体可为8.6)；

11、(2)采用deae-纤维素柱分离纯化

12、将(1)处理后的溶液通过deae-纤维素柱，以实现针对四磷酸二鸟苷的吸附；梯度洗脱：依次用0.002m nh4hco3、0.05m nh4hco3、0.1m nh4hco3、0.15mnh4hco3、0.2mnh4hco3、0.25m nh4hco3(氨水调节ph值为8.6)溶液洗脱；分段收集0.2m nh4hco3、0.25mnh4hco3洗脱得到的洗脱液；

13、5)四磷酸二鸟苷的收集

14、边搅拌边向洗脱液中加入乙醇，晶体自然析出，静置，离心，收集沉淀，得到四磷酸二鸟苷。

15、上述方法步骤1)中，所述氢氯酸溶液的浓度为0.5-3mol/l，具体可为1mol/l；卤虫卵与氢氯酸溶液的配比可为：4g：50-100ml，具体可为4g：70ml；

16、酸性环境有助于溶解和释放卤虫卵中的核苷酸类物质。

17、所述低温搅拌的条件可为：在0-10℃的低温条件下搅拌20-60分钟，具体可为在4℃的低温条件下搅拌20分钟；

18、所述离心在离心机中进行，所述离心的条件可为：以8000-12000转/分钟(rpm)的速度离心5-20分钟，具体可为以12000转/分钟(rpm)的速度离心20分钟。

19、上述方法步骤2)中，所述活性炭柱的规格为φ2.5×3cm(直径为2.5厘米，长度为3厘米)；

20、所述去离子水的体积可为100-500ml，具体可为200ml；

21、所述洗脱液由无水乙醇、浓缩氨水(nh3·h2o，质量浓度为28％)和水按体积比2:1:2组成；

22、所述洗脱液的体积可为100-500ml，具体可为300ml。

23、上述方法步骤3)中，所述浓缩在旋转蒸发仪中进行，具体在40℃下减压蒸发。

24、上述方法步骤4)中在进行步骤(2)之前，还包括对deae-纤维素柱预处理的操作。具体可为：先用去离子水清洗柱子，然后使用缓冲液平衡柱子，其中，所述缓冲液具体可为0.01m nh4hco3溶液(ph 8.6)。

25、上述方法步骤4)(2)中，采用deae-纤维素柱(deae纤维素-52)分离纯化，用2-3柱体积(总量为150-250ml)去离子水清洗柱子，然后使用2-3柱体积(总量为150-250ml)缓冲液(0.01m nh4hco3，ph 8.6)平衡柱子；

26、梯度洗脱中每个浓度洗脱2-3个柱体积(150-250ml)。

27、上述方法步骤5)中，所述乙醇具体可为体积浓度95％的乙醇，乙醇与洗脱液的体积比可为3:1-5:1，具体可为4:1；

28、所述静置为在-4℃低温下静置2～10小时；

29、所述离心的条件可为12000rpm离心10min。

30、所得四磷酸二鸟苷的纯度为91％。

31、四磷酸二鸟苷在制备具有抗氧化和/或抗炎功能的产品中的应用也属于本发明的保护范围。

32、所述应用中，所述产品包括药品、化妆品、护肤品等。

33、与现有技术相比，本发明的方法具有以下几个优势：

34、(1)在初步处理阶段仅涉及破碎和酸性溶液浸取，流程较为简洁。而现有技术的方法包括了多个预处理步骤，如筛选、脱水、破碎等，以及后续的复杂步骤，如多次浸取、中和、吸附、洗脱和脱盐，整体流程更为复杂。

35、(2)在吸附步骤中使用了活性炭柱，这是一种常见的吸附材料，易于获取且操作简便。而现有技术中使用的是强酸性阳离子交换树脂，这类树脂通常成本较高，且操作和再生过程可能更为繁琐。而我们可以通过控制条件直接进行洗脱，减少了操作步骤和所需时间，提高了效率。

36、(3)采用deae-纤维素柱进行分离纯化，并通过梯度洗脱精确定位目标产物，这种技术能够提供良好的选择性和回收率。相比现有技术的多步骤纯化(包括阳离子交换树脂吸附、洗脱、阴离子交换树脂脱盐等)，我们的方法可以在保持纯度的同时，更加高效和具有针对性。

37、(4)本专利通过研究发现，四磷酸二鸟苷(gp4g)具有抗炎作用和抗氧化作用。四磷酸二鸟苷(gp4g)作为一种具有抗炎和抗氧化双重功效的成分，若应用于化妆品及护肤品中，将全方位提升护肤效益。gp4g的抗炎作用强化皮肤屏障功能，减轻炎症反应，减少红肿和过敏现象，提高皮肤对外界刺激的抵抗力。gp4g的抗氧化作用有助于清除自由基，减少皮肤细胞损伤，从而增强抗老化效果，对抗皮肤老化问题如皱纹、松弛和色素沉着。对于敏感肌肤，gp4g的抗炎和抗氧化双重作用可降低皮肤敏感性，减轻刺激反应，修复受损皮肤屏障。在痤疮与疤痕管理方面，其抗炎特性有助于缓解红肿炎症，减少疤痕形成，而抗氧化作用则促进皮肤修复，加速疤痕淡化。gp4g的抗炎和抗氧化功能有助于创造一个有利于细胞再生的环境，创造有利于细胞再生的环境，加快受损细胞修复过程。最后，gp4g可以抵御环境伤害，如紫外线和污染，其抗氧化作用减少黑色素过度生成，抗炎作用降低了炎症导致的色素沉着，使肌肤更加明亮。