一种肾脏病、肾功能不全及AD的基因诊断试剂盒及其应用的制作方法

本发明属于基因诊断领域，具体涉及一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的新型基因诊断试剂盒及其应用。

背景技术：

1、瞬时受体电位通道(transient receptor potential channel，trpc)是细胞膜上重要的主要透ca2+的阳离子通道，最早发现于黑腹果蝇视觉传导系统。现已发现30多种哺乳动物trpc经典瞬时受体电位通道(transient receptor potential canonical，trpc)是与黑腹果蝇trpc同源性最高的trpc亚家族。trpc通道有七个家族成员，即trpc1～trpc7。人类的trpc6基因定位于第11号染色体上，含有13个外显子，共编码931个氨基酸。

2、trpc6作为trpc家族的成员之一，最近引起公众越来越多的关注，因为它与很多疾病相关。主要作用：在脑和肾脏中，trpc6参与多项生理功能。大电导钙激活钾离子通道(bkca通道)广泛表达于机体中多种细胞，并在许多生理及病理条件下，发挥着举足轻重的作用。trpc6作为一个重要的离子通道在肾脏中主要在足细胞中表达，研究发现足细胞中的trpc6对足细胞中的细胞信号转导的钙稳态的调节起着至关重要的作用。足细胞最近一直成为大家的研究热点，因为它的缺失和病变都有引发肾脏发育的缺陷，甚至导致许多疾病。正是由于足细胞在肾脏发育和疾病发生过程中发挥的关键作用,引发了越来越多的研究者着重于足细胞上的离子通道的研究。同时，有研究表明，trpc6广泛表达于神经系统，已证实一些神经系统疾病的发生发展与细胞内钙稳态的失衡有关。

3、专利文献cn112941164a公开了一种利用外周血trpc6基因测序来检测trpc6基因致病突变的方法。采用方法是采集患儿的外周血，提取基因组dna，设计多对trpc6引物，采用多重pcr法，扩增检测目的基因和高通量测序，将获得基因型数据和已有表型数据，再结合统计学方法进行数据分析。

4、专利文献cn113881765b公开了一种检测trpc6基因或其表达产物的产品在制备诊断2型糖尿病的工具中的应用。从小鼠胰腺组织提取总rna，逆转录转录得到cdna，再对cdna进行qrt-pcr检测。通过小鼠胰腺组织的trpc6基因表达水平检测，去判断2型糖尿病风险，但未见人体组织的研究数据。

5、外周血通常是指血液外周的血细胞，包括红细胞、白细胞、血小板等，可以通过检测外周血的基因相对表达量，判断是否存在异常的情况，对于疾病的诊断具有一定的指导作用。但是，现有临床上，基于外周血trpc6基因mrna相对表达量检测，还没有在一个样本检测中就可以同时实现对慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病(ad)的诊断，为此，本方案提出一种针对慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病(ad)的新型基因诊断试剂盒及其应用。

技术实现思路

1、本发明的目的就是提供一种准确率高、易操作、灵敏度高的一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的诊断技术。

2、一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，所述基因诊断试剂盒用于检测人外周血trpc6基因mrna相对表达量；

3、所述基因诊断试剂盒由两个检测试剂组成：

4、a)特异性检测人trpc6基因mrna表达量的检测试剂；

5、b)特异性检测人内参基因β-actinmrna表达量的检测试剂。

6、优选的，所述特异性检测人trpc6基因mrna表达量的检测试剂包括：针对人trpc6mrna的引物对和探针。

7、优选的，所述特异性检测人trpc6基因mrna表达量检测的引物对和探针为序列如核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物ht1-f，核苷酸序列如seq id no.2所示的下游引物ht1-r，核苷酸序列如seq id no.3所示探针ht1-p；

8、优选的，所述特异性检测人内参基因β-actin mrna表达量的检测试剂包括：针对人β-actinmrna的引物对和探针。

9、优选的，所述特异性检测人β-actin基因mrna表达量检测的引物对和探针为序列如核苷酸序列如seq id no.4所示的上游引物ha1-f，核苷酸序列如seq id no.5所示的下游引物ha1-r，核苷酸序列如seq id no.6所示探针ha1-p；

10、优选的，所述基因诊断试剂盒还包括针对人trpc6 mrna的探针和针对人β-actinmrna的探针；

11、并且所述针对人trpc6 mrna的探针包括5’端荧光基团fam，3’端淬灭基团bhq1；针对人β-actinmrna的探针包括5’端荧光基团cy5，3’端淬灭基团bhq2。

12、优选的，所述5’端荧光基团包括但不仅限于fam、hex、joe、rox、tet、cy-3、cy-5；

13、并且所述针对人trpc6 mrna的探针所包括的荧光基团和针对人β-actinmrna的探针所包括的荧光基团是不同的荧光基团。

14、优选的，所述3’端淬灭基团包括但不仅限于bhq1、bhq2、bhq3、tamra、dabcyl；

15、并且所述针对人trpc6 mrna的探针所包括的淬灭基团和针对人β-actin mrna的探针所包括的淬灭基团是不同的淬灭基团。

16、本发明还提供一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的新型基因诊断试剂盒的应用，所述试剂盒用于诊断慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病。

17、本发明相对于现有技术的有益效果为：本发明提供了一种利用由人trpc6基因和β-actin内参基因mrna的检测试剂组合，通过检测人外周血trpc6 mrna相对表达量，实现了用一个样本检测结果，就可以同时用于慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病诊断的技术手段，在生物技术和医疗领域中具有极大的应用前景。

技术特征：

1.一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述基因诊断试剂盒用于检测人外周血trpc6基因mrna相对表达量；

2.根据权利要求1所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述特异性检测人trpc6基因mrna表达量的检测试剂包括：针对人trpc6 mrna的引物对和探针。

3.如权利要求2所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述特异性检测人trpc6基因mrna表达量检测的引物对和探针为序列如核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物ht1-f，核苷酸序列如seq id no.2所示的下游引物ht1-r，核苷酸序列如seq id no.3所示探针ht1-p。

4.根据权利要求1所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述特异性检测人内参基因β-actin mrna表达量的检测试剂包括：针对人β-actinmrna的引物对和探针。

5.根据权利要求4所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述特异性检测人β-actin基因mrna表达量检测的引物对和探针为序列如核苷酸序列如seq id no.4所示的上游引物ha1-f，核苷酸序列如seq id no.5所示的下游引物ha1-r，核苷酸序列如seq id no.6所示探针ha1-p。

6.根据权利要求1所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述基因诊断试剂盒还包括针对人trpc6 mrna的探针和针对人β-actin mrna的探针；

7.根据权利要求6所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述5’端荧光基团包括但不仅限于fam、hex、joe、rox、tet、cy-3、cy-5；

8.根据权利要求6所述的慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，其特征在于，所述3’端淬灭基团包括但不仅限于bhq1、bhq2、bhq3、tamra、dabcyl；

9.根据权利要求书1-8任意一项所述的一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的新型基因诊断试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于诊断慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病。

技术总结本发明提供一种慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的基因诊断试剂盒，所述基因诊断试剂盒用于检测人外周血TRPC6基因mRNA相对表达量；所述基因诊断试剂盒由两个检测试剂组成：a)特异性检测人TRPC6基因mRNA表达量的检测试剂；b)特异性检测人内参基因β‑actinmRNA表达量的检测试剂。本发明中所提供技术方案中，所需样本为被检者外周血，具有快速、灵敏、无创检测等特点，实现了用一个样本检测结果，就可以同时用于慢性肾脏病、肾功能不全及阿尔茨海默病的诊断，具有重大的临床意义，在生物技术和医疗领域中具有极大的应用前景。技术研发人员：张高涛,雷园园,丁芹受保护的技术使用者：合肥辉宇生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/29