一种沙棘益生菌复合制剂的制备及其应用

本发明涉及沙棘益生菌复合制剂及其缓解便秘的应用，属于微生物。

背景技术：

1、便秘是一种常见的消化系统疾病，主要指排便次数少、频率低，在不使用泻剂的情况下，每周排便次数小于3次，粪便量少、粪便干结、排便费力、排便同时并伴有腹痛、腹胀等症状，长期便秘可能导致肠损伤、肠毒素积累，甚至增加结肠癌的风险。由于便秘的病因比较复杂，加之便秘的个体差异比较大，所以目前治疗便秘的原则就是个性化治疗和综合治疗相结合，目的主要是用于缓解便秘的症状，提高肠道转运时间，同时消除便秘的病因。因此，便秘的预防以及缓解作用具有重要的理论与社会意义。

2、到目前为止，泻药是便秘最常见的治疗方法；然而，这些药物的有效性可能会因病情的根本原因而异，且有一定的副作用。泻药最常见的副作用包括腹泻、胃部不适、呕吐和胃痉挛。特别是，含有吸收性差的离子(如镁或磷酸盐)的渗透性泻药可引起代谢紊乱，尤其是在存在肾损害的情况下。此外，由于便秘可能由多种因素引起，并且可能具有重叠效应，因此药物治疗存在局限性，例如低应答率和停药后频繁复发。所以，通过给予合生元、益生元或益生菌来调节肠道微生物菌群可能是缓解便秘的一种新颖的方法。

3、益生菌(如乳杆菌、双歧杆菌、革兰氏阳性球菌)是一种非致病微生物，当摄入适量时，会对宿主的健康产生好处。其作用是调整宿主肠道微生物平衡，降低过敏原、提高免疫力、抗炎等。越来越多的证据表明，益生菌可能在缓解便秘症状方面起到有益的作用，是近年来临床上常用的治疗便秘的调节剂，因为益生菌能产生有机酸(乳酸和乙酸)，降低ph值，有效抑制肠道致病菌，调节肠道菌群平衡保护肠黏膜层，提高了宿主免疫细胞、改善胃肠道消化系统及平滑肌收缩功能，避免了药物而引起的副作用，进而对机体健康产生影响。

4、因此，仍需找到一种干预或缓解方式，既能够在预防和/或缓解便秘的方面发挥根本上的作用，同时，也不会给便秘患者带来任何潜在的安全隐患，并且成本低廉，这对改善便秘及异常肠道菌群有着重要意义。

技术实现思路

1、基于上述问题，本发明要解决的技术问题是提供可以缓解便秘的沙棘益生菌复合制剂。

2、为解决本发明的技术问题，本发明提供了一株副干酪乳杆菌smn-lbk，所述副干酪乳杆菌smn-lbk已于2017年7月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno.m2017429。

3、所述副干酪乳杆菌smn-lbk是本课题组源于新疆塔城地区传统乳制品马奶酒中分离得到的，该菌株经测序分析，通过16s rdna测序得到的序列在ncbi中进行核酸序列比对，结果显示菌株为副干酪乳杆菌，命名为副干酪乳杆菌smn-lbk。

4、所述副干酪乳杆菌smn-lbk在mrs培养基上的菌落呈现乳白色、表面光滑、圆形凸起。

5、本发明的第二个目的在于提供一种用于预防和/或缓解便秘的产品，所述产品含有上述的副干酪乳杆菌smn-lbk。

6、在本发明的一种实施方式中，所述产品包含食品或药品。

7、在一种实施方式中，所述药品含有上述副干酪乳杆菌smn-lbk(药物载体和/或药用辅料。

8、在一种实施方式中，所述食品包含含有上述副干酪乳杆菌smn-lbk的保健食品；或所述食品包含使用含有上述副干酪乳杆菌smn-lbk的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品、肉制品、或果蔬制品。

9、在一种实施方式中，所述发酵剂的制备方法为将上述副干酪乳杆菌smn-lbk按照占培养基总质量3％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养16h，得到培养液；将培养液8000rpm下离心，得到菌体；将菌体用0.85％无菌生理盐水重悬，得到发酵剂。

10、在一种实施方式中，所述培养基为优化后的mrs培养基。

11、在一种实施方式中，所述副干酪乳杆菌smn-lbk的活菌数不低于1×109cfu/ml或1×109cfu/g。

12、本发明的第三个目的在于提供一种沙棘益生菌复合制剂，所述沙棘益生菌复合制剂包括所述的副干酪乳杆菌smn-lbk、沙棘原液。

13、在一种实施方式中，所述副干酪乳杆菌smn-lbk的活菌数为不低于1×109cfu/ml或1×109cfu/g；

14、沙棘原液添加量为2％-12％，优选地为10％。

15、在一种实施方式中，所述复合制剂还包括保护剂。

16、在一种实施方式中，所述保护剂包括海藻糖、蔗糖、脱脂奶粉、山梨醇中一种或多种。

17、本发明的第四个目的在于提供一种沙棘益生菌复合制剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：

18、步骤1，菌体培养、离心收集菌体；

19、步骤2，向菌体中添加沙棘原液、保护剂；

20、步骤3，冻干得到所述沙棘益生菌复合制剂。

21、在一种实施方式中，所述方法为：步骤1，将副干酪乳杆菌smn-lbk以接入mrs液体培养基中培养后，转入新鲜的mrs液体培养基中培养后，离心、洗涤得到菌体；

22、步骤2，将沙棘汁在5000rpm下离心，取上清液得到沙棘原液，调节其ph为6.0，向步骤1得到的菌体中添加2％-12％沙棘原液后，加入上述保护剂溶液，保护剂溶液与菌体质量等比例添加，混合后溶液重悬；

23、步骤3，预冻后进行真空冷冻干燥。

24、有益效果

25、1、本发明沙棘——副干酪乳杆菌益生菌粉，简称(沙棘益生菌复合剂)，此复合剂具有缓解便秘(功能性便秘)的作用，具体体现在：

26、(1)显著提高便秘小鼠的水分含量、粪便的重量及首粒排黑便时间；

27、(2)显著提高便秘小鼠的小肠推进率；

28、(3)显著提高便秘小鼠胃肠神经递质水平中生长抑素(ss)、血管活性肠肽(vip)的含量；

29、(4)显著降低便秘小鼠胃肠神经递质水平中胃动素(mtl)、胃泌素(gas)的含量；

30、(5)有效缓解便秘小鼠结肠组织的损伤；

31、(6)显著调节便秘小鼠肠道菌群多样性及组成；

32、(7)显著调节便秘小鼠肠道菌群代谢产物；

33、(8)显著调节便秘小鼠粪便中短链脂肪酸(scfas)的含量

34、因此，副干酪乳杆菌smn-lbk在制备预防和/或缓解便秘的产品(如食品、药品及保健品)中，具有巨大的应用前景。

35、2、副干酪乳杆菌smn-lbk是益生菌的一种，目前已被纳入卫生部下发的《可用于食品的菌种名单》，因此，本发明使用的副干酪乳杆菌smn-lbk不会给便秘患者带来任何潜在的安全隐患。

36、3、副干酪乳杆菌smn-lbk的培育过程仅需培养基以及一些培养条件的控制，成本相对低廉，与造价昂贵的生物制剂相比，不会对便秘患者带来太大的经济负担。

37、4、本发明提供的一种沙棘益生菌复合制剂能够提高便秘小鼠的提高便秘小鼠粪便重量、粪便含水量和小肠推进率，减少首粒排黑便时间，并能减轻便秘小鼠结肠组织的受损程度；同时，还上调了血清中肠胃调节肽中mtl、gas含量，下调了ss、vip含量；显著提高便秘小鼠模型肠道内的有益菌的丰度，而降低有害菌的丰度，在一定程度上促进便秘特征性肠道菌群趋于正常化；同时，显著调节了便秘小鼠的差异代谢产物及短链脂肪酸中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量，表明包含副干酪乳杆菌smn-lbk的微生物制剂对于功能性便秘的相关疾病具有较好的靶向缓解作用。

38、5、本发明提供了一种乳酸菌的复合物，包括益生元(沙棘)，上述益生元能够和乳酸菌及复合保护剂中的物质协同发挥各自的作用，在提高乳酸菌的活性的同时保证了产品的营养性。

39、6、本发明提供了一种微生物制剂的方法，通过菌体培养、离心、加入保护剂真空冷冻干燥，此方法简单，操作便捷。经上述方法得到沙棘益生菌粉，该菌粉有食用方便、活菌数高、贮存稳定、抗氧化性强的优点。

40、生物材料保藏

41、一株副干酪乳杆菌smn-lbk，分类学命名为lactobacillus paracasei，已于2017年7月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no.m2017429，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，中国典型培养物保藏中心。