一种载脂蛋白A1抗体检测试剂盒和方法与流程

本发明涉及一种试剂盒，具体涉及一种提高载脂蛋白a1检测效率和准确度的技术。

背景技术：

1、载脂蛋白a1(apolipoprotein a1，apoa1)是一种重要的脂质结合蛋白，在人体中起着至关重要的作用。它是高密度脂蛋白(hdl)中最主要的蛋白质成分之一，占据了hdl颗粒的大部分质量。

2、血清或血浆中载脂蛋白a1与其相对应的抗体在液体中结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，浊度高低反映样品中载脂蛋白a1的含量。后者可由校准品所作的剂量/反应曲线算出。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。

3、然而，该方法在实践应用中也存在一定的问题，一方面这种检测方法需要的混合时间较长，先要加入r1进行混合3至5分钟，然后再加入r2混合3-5分钟进行检测，总体占用时间较长，而时间过短之后则使得载脂蛋白a1与抗体的结合率下降，进而造成检测结果不准确；另一方面，尽管经过了较长时间的混合，但是仍然可能存在载脂蛋白a1与抗体结合不充分的问题，会有5％至15％的载脂蛋白a1由于没有发生抗体结合而无法被检出，这样也会造成检测结果偏低。

技术实现思路

1、为解决上述技术中存在的问题，本发明提供一种提高载脂蛋白a1抗体检测准确度的技术。

2、本发明提供的一种载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其包括r1试剂和r2试剂，所述r1试剂包括缓冲剂、防腐剂和带负电荷纳米微粒；r2试剂中包括防腐剂和改进血清蛋白，所述改进血清蛋白为带正电荷乙酰化蛋白。

3、优选地，缓冲剂为ph7.2至7.7的tris缓冲液，tris缓冲液的浓度为80mmol/l至120mmol/l；

4、r1和r2中的防腐剂0.7-1.2g/l；

5、防腐剂为下列物质中的至少一种：叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯或乙基汞硫代硫酸钠；

6、带负电荷纳米微粒浓度为0.01g/l至0.10g/l。

7、优选地，带负电荷纳米微粒为带负电荷的纳米二氧化硅；

8、优选地，带正电荷乙酰化蛋白的浓度为20-40g/l。

9、优选地，改进血清蛋白为乙酰化牛血清蛋白，乙酰化牛血清蛋白的cas号为：9048-46-8。

10、优选地，r1试剂和载脂蛋白a1检测样本使用前进行预处理：超声条件下混合30秒至1分钟，获得负载有负电荷纳米二氧化硅的载脂蛋白a1检测样本。

11、优选地，纳米二氧化硅表面的氧化物官能团羟基和硅酸根与水分子发生反应，形成负电荷；

12、r1试剂的ph值为7.5至7.7。

13、本发明提供的所述的载脂蛋白a1抗体检测试剂盒的检测方法，其包括下面的步骤：

14、s1：向载脂蛋白a1检测样本中加入试剂r1，混合时间30秒至2分钟，抗原位点暴露，待测样品与试剂r1按体积比为1：200至1：20，记录吸光度od-a1；

15、s2:向步骤s1的混合液中加入试剂r2，试剂r2与试剂r1按体积比为1：3至1:5加入，记录吸光度od-a2；

16、s3:使用载脂蛋白a1校准品在全自动生化分析仪上通过内置曲线拟合模式拟合标准曲线，根据吸光度自动计算出待测样品中载脂蛋白a1的浓度。

17、优选地，还包括下面的步骤：待测样品与试剂r1按体积比为1：200至1：50；试剂r2与试剂r1按体积比为1:4。

18、本发明的有益效果为：本发明在r1试剂中加入负电荷微粒，而在r2试剂中加入正电荷血清，两者混合之后基于电荷吸引，能够实现快速吸附形成用于检测的物质，缩短了混合需要的时间，并且检测结果的精准度得到了保证，避免了游离待检测物无法被检测出的问题。

技术特征：

1.一种载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，包括r1试剂和r2试剂，所述r1试剂包括缓冲剂、防腐剂和带负电荷纳米微粒；r2试剂中包括防腐剂和改进血清蛋白，所述改进血清蛋白为带正电荷乙酰化蛋白。

2.根据权利要求1载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，

3.根据权利要求1载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，

4.根据权利要求1载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，带正电荷乙酰化蛋白的浓度为20-40g/l。

5.根据权利要求1载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，改进血清蛋白为乙酰化牛血清蛋白，乙酰化牛血清蛋白的cas号为：9048-46-8。

6.根据权利要求1载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，r1试剂和载脂蛋白a1检测样本使用前进行预处理：超声条件下混合30秒至1分钟，获得负载有负电荷纳米二氧化硅的载脂蛋白a1检测样本。

7.根据权利要求5载脂蛋白a1抗体检测试剂盒，其特征在于，纳米二氧化硅表面的氧化物官能团羟基和硅酸根与水分子发生反应，形成负电荷；

8.根据权利要求1-7中任一项所述的载脂蛋白a1抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括下面的步骤：

9.根据权利要求1-6中任一项所述的载脂蛋白a1抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括下面的步骤：待测样品与试剂r1按体积比为1：200至1：50；试剂r2与试剂r1按体积比为1:4。

技术总结本发明提供一种载脂蛋白A1抗体检测试剂盒和方法，其包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括缓冲剂、防腐剂和带负电荷纳米微粒；R2试剂中包括防腐剂和改进血清蛋白，所述改进血清蛋白为带正电荷乙酰化蛋白。本发明在R1试剂中加入负电荷微粒，而在R2试剂中加入正电荷血清，两者混合之后基于电荷吸引，能够实现快速吸附形成用于检测的物质，缩短了混合需要的时间，并且检测结果的精准度得到了保证，避免了游离待检测物无法被检测出的问题。技术研发人员：孙文勇,周会敏,何婷婷受保护的技术使用者：东软威特曼生物科技（南京）有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/17