一种苏合香丸指纹图谱检测方法及应用

本发明属于中药检测，具体涉及一种苏合香丸指纹图谱检测方法及应用。

背景技术：

1、苏合香丸历史悠久，最早见于自唐·《玄宗开元广济方》，原名“吃力伽(白术丸)”，沈括谓其“本出《广济方》，谓之白术丸，后人编入《外台》”，“《千金方》云真宗朝尝出苏合香酒赐近臣，又赐苏合香丸”。《太平惠民和剂局方》卷三，改名苏合香丸。为著名的温通开窍药。

2、苏合香丸呈黑褐色有光泽的大蜜丸，破碎后断面为棕黄色。苏合香丸由苏合香、安息香、冰片、水牛角浓缩粉、人工麝香、檀香、沉香、丁香、香附、木香、乳香(制)、荜茇、白术、诃子肉、朱砂等十五味药材配伍组成，其中苏合香、安息香共为君药，以辟秽化痰、通行气血；木香、白檀香、沉香、乳香、丁香、香附为臣，助行气解郁、散寒止痛、辟秽化浊、活血化痰，气畅血行则痰浊降而窍闭开。目前，在20版《中国药典》一部苏合香丸项下采用气相色谱法测定挥发性物质龙脑、丁香酚的含量。但是苏合香中成分复杂，还含有一些其它非挥发性的必要成分。因此，有必要基于hplc建立苏合香丸指纹图谱，同时建立了基于指纹图谱的指标成分含量测定方法，以一次样品制备、一次进样分析，同时完成定性和定量分析，用于对成方制剂中苏合香丸进行有效的质量控制。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种苏合香丸指纹图谱检测方法及应用，采用优化条件的高效液相色谱方法建立了苏合香丸指纹图谱，并且同时对五种主要药味成分(没食子酸、肉桂酸、丁香酚、胡椒碱、木香烃内酯)进行定量分析。本发明中方法通过指纹图谱和多成分含量测定可以比较全面地反映苏合香丸的主要指标成分，实现多成分定量控制苏合香丸质量，提高质控水平。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种苏合香丸指纹图谱检测方法，所述指纹图谱至少包括没食子酸、肉桂酸、胡椒碱、丁香酚和木香烃内酯的色谱峰；所述检测方法是采用高效液相色谱法检测供试品溶液和对照品溶液，并结合外标法，将供试品溶液的液相色谱图与对照品溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间获得苏合香丸指纹图谱，所述高效液相色谱法的检测条件包括：以0.05％v/v磷酸水溶液和甲醇为流动相，其中，a相为甲醇，b相为0.05％v/v磷酸水溶液；梯度洗脱的具体程序为：

3、0-15min，按照体积比，流动相a由5％增加至20％，流动相b由95％降低至80％；

4、15-40min，按照体积比，流动相a由20％增加至45％，流动相b由80％降低至55％；

5、40-70min，按照体积比，流动相a由45％增加至85％，流动相b由55％降低至15％；

6、70-80min，按照体积比，流动相a由85％降低至5％，流动相b由15％增加至95％；

7、80-85min，按照体积比，5％流动相a，95％流动相b。

8、优选地，所述高效液相色谱法的检测条件还包括：柱温为28-32℃，更优选为30℃；检测波长为215-225nm，更优选为220nm；流速为0.9-1.1ml/min，更优选为1.0ml/min。

9、优选地，所述高效液相色谱法的检测条件还包括：供试品溶液和对照品溶液的配制，其中，供试品溶液的制备包括：称取苏合香丸破碎，加入硅藻土混匀，加入体积浓度为80％的甲醇溶液提取，分离出上清液，得到供试品溶液；对照品溶液的制备包括：分别称取没食子酸、肉桂酸、胡椒碱、丁香酚和木香烃内酯对照品，加体积浓度为80％的甲醇溶液溶解并定容，得到对照品溶液。

10、优选地，所述供试品溶液的制备中，苏合香丸加入的重量为3g，体积浓度为80％的甲醇溶液加入体积为50ml；和/或，采用超声提取方式，更优选地，超声提取时间为15-30min，进一步优选为15min；和/或，采用离心后微滤的方式分离出上清液，更优选地，离心时间为5min，频率为10000转/分钟；和/或，微滤采用的滤膜孔径为0.45μm。

11、优选地，所述对照品溶液的制备中，所述对照品溶液中各成分的含量为：没食子酸0.04092-0.4092mg/ml、肉桂酸0.01035-0.1035mg/ml、丁香酚0.06315-0.6315mg/ml、胡椒碱0.02552-0.2552mg/ml、木香烃内酯0.39987-3.9987mg/ml；更优选地，所述对照品溶液中各成分的含量为：没食子酸0.4092mg/ml、肉桂酸0.1035mg/ml、丁香酚0.6315mg/ml、胡椒碱0.2552mg/ml、木香烃内酯3.9987mg/ml。

12、本发明第二方面提供同时检测苏合香丸中5种指标药味成分含量的方法，所述5种成分为：没食子酸、肉桂酸、胡椒碱、丁香酚和木香烃内酯的色谱峰；该方法是采用高效液相色谱法并结合外标法，检测一系列不同浓度的混合对照品标准溶液，绘制标准工作曲线；再检测供试品溶液，将检测结果代入所述标准工作曲线，得到苏合香丸中5种指标药味成分含量；所述高效液相色谱法的检测条件包括：以0.05％v/v磷酸水溶液和甲醇为流动相，其中，a相为甲醇，b相为0.05％v/v磷酸水溶液；梯度洗脱的具体程序为：

13、0-15min，按照体积比，流动相a由5％增加至20％，流动相b由95％降低至80％；

14、15-40min，按照体积比，流动相a由20％增加至45％，流动相b由80％降低至55％；

15、40-70min，按照体积比，流动相a由45％增加至85％，流动相b由55％降低至15％；

16、70-80min，按照体积比，流动相a由85％降低至5％，流动相b由15％增加至95％；

17、80-85min，按照体积比，5％流动相a，95％流动相b。

18、优选的，所述高效液相色谱法的检测条件还包括：柱温为28-32℃，更优选为30℃；检测波长为215-225nm，更优选为220nm；流速为0.9-1.1ml/min，更优选为1.0ml/min。

19、优选的，所述高效液相色谱法的检测条件还包括：溶液的配制，所述溶液包括供试品溶液、对照品溶液，其中，供试品溶液的制备包括：称取苏合香丸破碎，加入硅藻土混匀，加入体积浓度为80％的甲醇溶液提取，分离出上清液，得到供试品溶液；对照品溶液的制备包括：分别称取没食子酸、肉桂酸、胡椒碱、丁香酚和木香烃内酯对照品，加体积浓度为80％的甲醇溶液溶解并定容，得到对照品溶液。

20、优选的，所述供试品溶液的制备中，苏合香丸加入的重量为3g，体积浓度为80％的甲醇溶液加入体积为50ml；和/或，采用超声提取方式，更优选地，超声提取时间为15-30min，进一步优选为15min；和/或，采用离心后微滤的方式分离出上清液，更优选地，离心时间为5min，频率为10000转/分钟；和/或，微滤采用的滤膜孔径为0.45μm。

21、优选地，所述对照品溶液的制备中，所述对照品溶液中各成分的含量为：没食子酸0.04092-0.4092mg/ml、肉桂酸0.01035-0.1035mg/ml、丁香酚0.06315-0.6315mg/ml、胡椒碱0.02552-0.2552mg/ml、木香烃内酯0.39987-3.9987mg/ml；更优选地，所述对照品溶液中各成分的含量为：没食子酸0.4092mg/ml、肉桂酸0.1035mg/ml、丁香酚0.6315mg/ml、胡椒碱0.2552mg/ml、木香烃内酯3.9987mg/ml。

22、如上所述，本发明的一种苏合香丸指纹图谱的检测方法及应用，采用优化反应条件的高效液相方法建立了苏合香丸的指纹图谱，同时此方法又可以对苏合香丸中5种指标药味成分进行定量分析，实现一次样品分析，同时完成定性和定量分析。其中，本发明采用流动相：0.05v/v％磷酸水溶液-甲醇系统，这种流动相系统在梯度洗脱条件下能使被分离化合物保持较好的分离度和峰形。同时，本发明通过对苏合香丸中5种指标成分的定量分析，定量分析结果中5种指标药味成分的回归方程的相关系数r均大于0.9994，线性关系良好。能保持供试品溶液在12h内稳定，稳定性和重复性试验的峰面积和保留时间rsd值均小于3％，稳定性、重复性良好。并且，高、中、低三个浓度加样回收率均在94～105％之间，rsd值在3％以内。因此，本发明中方法测定苏合香丸中各指标成分结果可靠，样品测定方法简便易行，可作为苏合香丸中5种指标成分的质控方法，实现多成分定量控制苏合香丸质量，提高苏合香丸质控水平，也为其他复方制剂中同样指标成分质量控制提供一定的参考。