防治耳聋的药物在制备防治顺铂引起的急性肾损伤药物中的应用

本发明涉及医用配制品，具体涉及含来自传统中药的未确定结构的药物制剂，该药物制剂适用于防治顺铂引起的急性肾损伤。

背景技术：

1、顺铂(cddp)是一种基于铂的抗癌药物，广泛用于化疗治疗各种类型的实体瘤。这种药物通过靶向细胞dna并破坏其结构和功能完整性，阻止癌细胞的增殖。然而，顺铂的治疗使用伴随着多种副作用，如肾毒性、神经毒性和耳毒性，限制了其治疗应用。cddp主要通过肾脏排出体外，其金属铂离子在肾脏内的积累会对肾脏造成损害，导致肾小球和肾小管在功能上及形态学上的变化，进而引发显著的肾毒性。cddp的毒性效应主要集中在肾小管上，造成上皮细胞的水肿和变性，基底膜变厚，肾间质出现轻微的纤维化。这些改变最终促使肾小管上皮细胞发生凋亡和坏死，形成透明的管型结构，同时伴有血清尿素氮(bun)和血清肌酐(scr)水平的上升，进一步证实了肾脏功能的损害(陈煜.中药成分对顺铂肾毒性的保护作用及其机制的研究进展[j].肿瘤药学,2020,10(01):21-26.)。

2、目前临床治疗顺铂引起的急性肾损伤主要的措施有，比如在使用顺铂前后进行充分的水合，以稀释尿中的药物浓度，减轻对肾脏的伤害。同时，医生可能会根据患者的肾功能情况调整药物剂量，定期监测肾功能指标，以及避免使用其他可能加重肾脏负担的药物。临床中对于顺铂引起的肾损伤主要采用的药物有甘露醇、氨磷汀和氨甲环酸等，但存在有效率低，患者依从性差，同时易引起电解质紊乱等不良反应，因此对于顺铂诱导的肾损伤治疗药物的研发是一个持续的挑战和迫切的需求。

3、中医学很早就有关于急性肾损伤的记载，根据其起病急、尿量骤减、肢体水肿等发病特点，将其归属于癃闭，溺毒，关格等范畴，针对其脾肾两脏亏损，脾主运化，肾主水、司封藏，在人体水液代谢和脏腑功能方而具有重要作用。药毒属浊邪，积于脾肾，一方面伤脾损肾，功能失常，封藏失司，津液乏运，无力导邪外出而致浊邪留置；另一方面药毒内蕴，气机受阻，而产生痰饮、瘀血等病理产物，日久不去而成致病因素反伤脾肾，造成正虚邪盛的恶性循环而致本病。因此以以扶正祛邪为治则，采用健脾益气、活血行气和利水解毒的治法来防治顺铂所引起的急性肾损伤(滕之颖.琼玉膏降低顺铂肾毒性的作用及可能机制的研究[d].南京中医药大学,2015.)

4、公开号为cn 117180386a的发明专利申请公开了一种防治药源性耳聋及老年性耳聋的药物，有效成分由以下重量百分比的原料药制成：人参9～13％，黄芪31～35％，姜黄9～13％，葛根20～24％，桔梗9～13％，甘草9～13％。同时，上述专利申请还公开了下述内容：人参、黄芪为君，前者大补五脏之气，尤能补脾益肺，后者补气升阳，二者合用大补元气，使清气升举，充养耳窍；姜黄、葛根为臣，姜黄活血行气，化瘀通络，葛根通经活络，助君药升发清阳，宣通耳窍；桔梗为佐，开宣肺气，清利头目，载药上行；甘草为使，补脾益气，清热解毒，调和诸药。诸药合用，共奏补脾益肺、升举清气、化瘀通络、通窍复聪之功。但是，药源性耳聋及老年性耳聋与顺铂引起的肾损伤是两种不同的疾病，二者的发病机制和临床症状完全不同，因此本领域普通技术人员无法推断上述专利申请所述的药物能转变为防治急性肾损伤的治疗用途。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供防治耳聋的药物的新用途，即在制药中的新应用。

2、上述防治耳聋的药物的新用途是：

3、防治药源性耳聋及老年性耳聋的药物在制备防治顺铂引起的急性肾损伤药物中的应用，其中所述的防治顺铂引起的急性肾损伤药物的有效成分由以下重量百分比的原料药制成：

4、人参27～33％，黄芪16～20％，葛根16～20％，姜黄11～13％，桔梗12～15％，甘草8～10％。

5、上述应用中，所述防治药源性耳聋及老年性耳聋的药物所使用六味中药与授权公告号为cn 117180386b的专利申请相同。

6、本发明所述的应用，其中所述的原料药的最佳配比为：

7、人参29.9％，黄芪17.9％，葛根17.9％，姜黄11.9％，桔梗13.4％，甘草9.0％。

8、本发明所述的应用，其中所述的有效成分由以下方法制得：

9、(1)将所述的原料药置于中药煎锅中，加入8-12倍水浸泡1-2h，武火煮沸后文火慢煎1-2h，然后过滤，收集第一次煎液；

10、(2)药渣再加入6-10倍水，武火煮沸后文火慢煎40-60min，过滤，收集第二次煎液；

11、(3)合并两次煎液，蒸发浓缩至1g生药/ml的浓缩液，干燥后，即得所述的有效成分。

12、本发明所述的应用，其中所述的防治顺铂引起的急性肾损伤药物为常规的颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。

13、本发明所述的应用，其中所述的防治顺铂引起的急性肾损伤药物的组方中，人参大补元气，生津止渴，又能益肾气，助肾阳，为君药；黄芪补气升阳，益卫固表，利水消肿，助人参补益元气；葛根解肌退热，生津止渴，两药共为臣药；姜黄、桔梗为佐，姜黄活血行气，化瘀通络；桔梗，祛痰，利尿，以驱内邪；甘草为使，补脾益气，清热解毒，调和诸药。诸药合用，共奏补脾肾之气、活血通络、利水解毒、生津止渴之功。本发明所述应用中的药物能够明显降低肌酐和尿素氮水平，改善肾组织形态损伤，防治顺铂所致的急性肾损伤效果显著。

14、本发明所述的防治顺铂引起的急性肾损伤药物是由公开号为cn 117180386a的发明专利申请的组方转化而来，具体转化方法为：从药味配比来看，提高人参、葛根、姜黄和桔梗在方中的占比，降低黄芪和甘草在方中的占比；从组方结构来看，重用人参以其单味为君，将黄芪降为臣并与葛根合用为臣药，将姜黄降为佐并与桔梗合用为佐药。上述改进可产生以下有益效果：一、人参归脾、肺、心、肾经，可大补五脏之气，乃是扶正祛邪之药，可更好的补益肾气，助肾阳；二、黄芪利水消肿，葛根生津止渴，二者相伍，能有效促进尿液排出，排泄体内毒素，减轻肾脏负担，对急性肾损伤的恢复具有重要作用；三、姜黄归脾、胃、肝经，活血行气，化瘀通络，桔梗归肺经，宣通上焦，引药上行，两者配伍共同调节气机，确保肺与肾的气机通畅，有助于全身气血的和谐运转，使药力更好直达肾脏。

15、由上述分析可见，本发明所述防治顺铂引起的急性肾损伤药物的治法由原来的“补脾益肺”转变为“补脾肾之气，利水解毒”，大大增强了“益肾气”的功效，可以显著提高防治顺铂所致的急性损伤的效果。氨基糖苷类药物同属浊邪，易积于脾肾，同时扰乱气机，从而无力导邪外出而致浊邪留置，进而损害肾脏，造成急性肾损伤。所以防治耳聋的药物也能用于氨基糖苷类药物所致的急性肾损伤。

16、为了能更好地理解本发明的有益效果，下面将通过实施例和动物实验进一步阐明。

17、具体实施方式

18、1实验材料

19、1.1实验动物：所用的spf级雄性icr小鼠(25-30g)购自广东省医学实验动物中心，经广东省医学实验动物中心质检合格后，方可进入广东药科大学实验动物中心饲养。饲养温度控制在20-25℃，湿度40％-60％，明暗交替12h，按规定及时换水及更换垫料，实验严格遵守国家和广东省动物福利伦理与保护相关规定，动物实验编号spf2022379。

20、1.2实验材料：顺铂注射液，购于齐鲁制药有限公司；1％生理盐水，购于金客隆生物技术有限公司；戊巴比妥，购于成都格雷西亚化学技术有限公司；注射用氨磷汀，购于美罗药业股份有限公司；多聚甲醛，购于上海麦克林生化科技股份有限公司；血尿素氮测试盒和肌酐测定试剂盒，购于南京建成生物工程研究所。

21、1.3实验仪器：智能细胞成像系统，赛默飞世尔科技有限公司；多功能微孔读数仪，赛默飞世尔科技有限公司。

22、2实验方法

23、2.1溶液的配制

24、1％戊巴比妥溶液：精密称取1g戊巴比妥，加入适量蒸馏水溶解后，定容于100ml容量瓶中。

25、4％多聚甲醛溶液：精密称取10g多聚甲醛置于烧杯中，加入250ml的pbs，55℃加热搅拌，溶解后冷却至室温定容于250ml容量瓶中。

26、实验组1的受试药物：取实施例1颗粒剂，加入1％生理盐水配制成3g生药/ml的受试药物。

27、实验组2的受试药物：取实施例2颗粒剂，加入1％生理盐水配制成3g生药/ml的受试药物。

28、实验组3的受试药物：取实施例3颗粒剂，加入1％生理盐水配制成3g生药/ml的受试药物。

29、阳性对照组的受试药物：取注射用氨磷汀，加入1％生理盐水配制成0.03mg/ml的受试药物。

30、对照组的受试药物：公开号cn 117180386a的专利申请实施例1的颗粒剂，加入1％生理盐水配制成3g生药/ml的受试药物。

31、2.2受试药物对顺铂引起急性肾损伤的疗效考察

32、(1)分组及给药：将42只雄性icr小鼠随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组、对照组和实验组1-3共7组，其中空白对照组和模型组给予相应体积的生理盐水灌胃，连续14天；阳性对照组：以剂量2mg/kg腹腔注射氨磷汀，连续14天；对照组：对照组药物溶液以剂量9g生药/kg灌胃，连续14天；实验组1：实验组1药物溶液以剂量9g生药/kg灌胃，连续14天；实验组2：实验组2药物溶液以剂量9g生药/kg灌胃，连续14天；实验组3：实验组3药物溶液以剂量9g生药/kg灌胃，连续14天。第15天除空白对照组外，其余各组以剂量25mg/kg的顺铂溶液腹腔注射进行造模；72小时后，以1％戊巴比妥对各组小鼠进行麻醉后，通过摘取眼球采血，至肝素钠处理过的采血管中，3000rpm离心10min，取血浆备用；取出双肾组织称重后，保存在4％多聚甲醛。

33、(2)相关指标的检测：对各组小鼠的肾脏系数进行计算(肾脏系数＝双肾组织重量/小鼠体重×100％)；取各组的小鼠的血浆样本根据血肌酐(cre)和尿素氮(bun)试剂盒说明书检测各组小鼠血清中肌酐和尿素氮的含量；取各组小鼠肾脏组织，送至公司进行he染色观察。

34、2.3统计方法

35、结果以均数±标准差(mean±sd)表示，并采用graphpad prism 5统计软件进行分析，各组间差异比较用单因素方差分析(one-way anova)。p<0.05表示差异具统计学意义。

36、3结果与讨论

37、3.1受试药物对顺铂引起急性肾损伤小鼠的肾脏系数影响

38、实验结果如表1所示，空白对照组和模型组比较，肾脏系数显著升高(p＜0.001)，阳性对照组、对照组、实验组1、实验组2和实验组3与模型组比较，肾脏系数都有明显降低(p＜0.001，p＜0.01，p＜0.05)，实验组1-3与阳性对照组比较，肾脏系数无显著性差异(p＞0.05)，和对照组比较，显著优于对照组(p＜0.05)，综上结果说明，顺铂诱导可以显著引起急性肾损伤，对照组和实验组1-3均可缓解顺铂引起的水肿或充血，但实验组1(最佳配比)的疗效最佳，且效果显著优于对照组。

39、表1各组动物肾脏系数值(n＝6)

40、 组别 脏器系数(％) 空白对照组 <![cdata[1.70±0.11^***]]> 模型组 2.62±0.14 阳性对照组组 <![cdata[1.98±0.37^**]]> 对照组 <![cdata[2.28±0.15^*]]> 实验组1 <![cdata[1.80±0.28^***#ns]]> 实验组2 <![cdata[1.88±0.56^***#ns]]> 实验组3 <![cdata[1.91±0.25^***#ns]]>

41、注：与对照组比较#p＜0.05；与模型组比较***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05；与阳性对照组比较ns p＞0.05。

42、3.2受试药物对顺铂引起急性肾损伤小鼠的肾功能影响

43、实验结果如表2所示，空白对照组和模型组比较，肌酐和尿素氮含量都有显著升高(p＜0.001)，而阳性对照组、对照组、实验组1-3与模型组比较，肌酐和尿素氮含量都有明显降低(p＜0.001，p＜0.01)，且实验组1-3和阳性对照组比较，无显著性差异(p＞0.05)，实验组1-3和对照组比较，肌酐和尿素氮水平显著低于对照组(p＜0.001，p＜0.05)，综上结果说明，顺铂诱导可以显著升高血浆中肌酐和尿素氮的含量，对照组和实验组1-3均可缓解顺铂引起肌酐和尿素氮含量的升高，但实验组1(最佳配比)的疗效最佳，且效果优于对照组。

44、表2各组动物血浆样本中肌酐和尿素氮含量(n＝6)

45、 组别 肌酐(μmol/l) 尿素氮(μmol/l) 空白对照组 <![cdata[36.69±10.90^***]]> <![cdata[3.95±0.56^***]]> 模型组 187.13±38.27 16.03±1.59 阳性对照组 <![cdata[100.84±29.31^***]]> <![cdata[8.16±1.92^***]]> 对照组 <![cdata[149.99±6.69^**]]> <![cdata[10.35±0.71^***]]> 实验组1 <![cdata[95.04±29.99^***###ns]]> <![cdata[7.10±1.10^***###ns]]> 实验组2 <![cdata[120.95.16±29.99^***#ns]]> <![cdata[8.36±1.94^***#ns]]> 实验组3 <![cdata[122.28±8.83^***#ns]]> <![cdata[8.59±1.27^***#ns]]>

46、注：与对照组比较#p＜0.05，###p＜0.001；与模型组比较***p＜0.001，**p＜0.01；与阳性对照组比较nsp＞0.05。

47、3.3受试药物对顺铂引起急性肾损伤小鼠的肾脏组织形态影响

48、实验结果如图1所示，空白对照组肾脏组织结构完整，肾小管无扩张或萎缩，无炎性细胞浸润。模型组肾组织结构重度异常，肾小管广泛变性，肾小管上皮细胞萎缩，管腔扩张，并可见蛋白管型，管腔充盈蛋白黏液；肾小管上皮细胞空泡变性，细胞轮廓不清晰，胞浆疏松可见空泡；组织可见少量炎症细胞浸润。阳性对照组和各个给药组的肾组织损伤显著减轻，具体表现为肾组织结构排列整齐，肾小管上皮细胞坏死程度减轻，且实验组1-3的肾组织病理学损伤程度是低于对照组的肾组织病理学损伤程度。综上结果说明，对照组和实验组1-3均可有效缓解顺铂引起的急性肾损伤。

49、3.4结论

50、经过本发明药物处理过的小鼠，腹腔注射顺铂后，能够显著抑制肾脏的水肿或充血，并且抑制肌酐和尿素氮含量的升高，具有显著保护肾损伤的作用。本发明药物可以用来制备防治顺铂引起急性肾损伤的药物。