LILRB多肽及其用途的制作方法

背景技术：

技术实现思路

1、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了lilrb多肽，其能够结合如seq id no：3所示的hla-g多肽，并且具有位于lilrb的d1结构域的氨基酸位置40至60的至少一个突变，其中与不包含至少一个突变的相同长度和序列的lilrb多肽相比，该lilrb多肽具有提高的稳定性和/或对hla-g的提高的亲和力。

2、根据本发明的一些实施方案，lilrb选自lilrb1和lilrb2。

3、根据本发明的一些实施方案，lilrb为lilrb2，并且至少一个突变位于选自对应于seq id no：1的s45、i49、t50和v57的氨基酸位置。

4、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了lil2b2多肽，其能够结合如seq idno：3所示的hla-g多肽，并且具有位于选自对应于seq id no：1的s45、i49、t50和v57的氨基酸位置的至少一个突变，其中，与不包含至少一个突变的相同长度和序列的lilrb2多肽相比，该lilrb2多肽具有提高的稳定性和/或对hla-g的提高的亲和力。

5、根据本发明的一些实施方案，位于s45处的突变包括s45r、s45n、s45q、s45h、s45l、s45k、s45m、s45f、s45w或s45y突变，位于i49处的突变包括i49r、i49k、i49f或i49y突变，位于t50处的突变包括t50r、t50n、t50l、t50k、t50f、t50w或t50y突变，和/或位于v57处的突变包括v57r、v57k、v57f或v57w突变。

6、根据本发明的一些实施方案，位于s45处的突变包括s45q突变，位于i49处的突变包括i49k突变，位于t50处的突变包括t50f突变，和/或位于v57处的突变包括v57r突变。

7、根据本发明的一些实施方案，至少一个突变包括至少两个突变。

8、根据本发明的一些实施方案，至少一个突变包括位于s45的突变和位于i49、t50和/或v57点的其他突变。

9、根据本发明的一些实施方案，lilrb2多肽包括s45n和t50r突变、s45y和t50k突变、s45r和i49f突变、s45q和v57r突变、s45q和i49k突变、或s45y和t50n突变。

10、根据本发明的一些实施方案，lilrb2多肽与如seq id no：1所示的lilrb2多肽相比对hla-g具有提高的亲和力。

11、根据本发明的一些实施方案，lilrb2多肽与如seq id no：1所示的lilrb2多肽相比具有提高的稳定性。

12、根据本发明的一些实施方案，lilrb2多肽氨基酸序列与选自seq id no：5、seq idno：7、seq id no：9、seq id no：11、seq id no：13、seq id no：15、seq id no：17、seq idno：19、seq id no：21和seq id no：23的氨基酸序列至少90％一致。

13、根据本发明的一些实施方案，lilrb2多肽氨基酸序列包含选自seq id no：5、seqid no：7、seq id no：9、seq id no：11、seq id no：13、seq id no：15、seq id no：17、seqid no：19、seq id no：21和seq id no：23的氨基酸序列。

14、根据本发明的一些实施方案，lilrb2多肽氨基酸序列如seq id no：5、seq id no：7、seq id no：9、seq id no：11、seq id no：13、seq id no：15、seq id no：17、seq id no：19、seq id no：21或seq id no：23所示。

15、根据本发明的一些实施方案，lilrb为lilrb1，并且至少一个突变位于对应于seqid no：102的选自t43、i47、t48和v55的氨基酸位置。

16、根据本发明的一些实施方案，位于t43处的突变包括t43r、t43n、t43q、t43h、t43l、t43k、t43m、t43f、t43w或t43y突变，位于i47处的突变包括i47r、i47k、i47f或i47y突变，位于t48处的突变包括t48r、t48n、t48l、t48k、t48f、t48w或t48y突变，和/或位于v55处的突变包括v55r、v55k、v55f或v55w突变。

17、根据本发明的一些实施方案，位于v55处的突变包括v55r突变。

18、根据本发明的一些实施方案，lilrb1多肽与如seq id no：102所示的lilrb1多肽相比对hla-g具有提高的亲和力。

19、根据本发明的一些实施方案，lilrb1多肽与如seq id no：102所示的lilrb1多肽相比具有提高的稳定性。

20、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了包含lilrb多肽和连接至lilrb多肽上的非蛋白部分的组合物。

21、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了包含lilrb2多肽和连接至lilrb2多肽的非蛋白部分的组合物。

22、根据本发明的一些实施方案，非蛋白部分选自药物、化学品、小分子、多核苷酸、可检测的部分、聚乙二醇(peg)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚苯乙烯马来酸酐共聚物(sma)和二乙烯基醚与马来酸酐共聚物(divema)。

23、根据本发明的一些实施方案，非蛋白部分为二聚化部分。

24、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了融合多肽，其包含连接至异源蛋白部分的lilrb多肽。

25、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了融合多肽，其包含连接至异源蛋白部分的lilrb2多肽。

26、根据本发明的一些实施方案，异源蛋白部分为二聚化部分。

27、根据本发明的一些实施方案，异源蛋白部分包含抗体或其片段的fc结构域。

28、根据本发明的一些实施方案，fc结构域为igg1或igg4的fc结构域。

29、根据本发明的一些实施方案，fc结构域被修饰以改变其与fc受体的结合、降低其免疫活化功能和/或改善融合蛋白的半衰期。

30、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了二聚体，其包含lilrb多肽、组合物或融合多肽。

31、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了二聚体，其包含lilrb2多肽、组合物或融合多肽。

32、根据本发明的一些实施方案，二聚体为异二聚体。

33、根据本发明的一些实施方案，异二聚体的第一单体包含lilrb多肽，并且第二单体包含选自sirpα、pd1、tigit和siglec10的蛋白质的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够结合其天然结合对。

34、根据本发明的一些实施方案，异二聚体的第一单体包括lilrb2多肽，并且第二单体包含选自sirpα、pd1、tigit和siglec10的蛋白质的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够结合其天然结合对。

35、根据本发明的一些实施方案，异二聚体的第一单体包含lilrb多肽，并且第二单体包含sirpα的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够结合cd47。

36、根据本发明的一些实施方案，异二聚体的第一单体包含lilrb2多肽，并且第二单体包含sirpα的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能够结合cd47。

37、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了异二聚体，其包含第一单体和第二单体，所述第一单体包含融合多肽，并且所述第二单体包含连接至抗体或其片段的fc结构域的sirpα的氨基酸序列，其中sirpα的氨基酸序列能够结合cd47。

38、根据本发明的一些实施方案，sirpα的氨基酸序列与seq id no：27或seq id no：88至少90％一致。

39、根据本发明的一些实施方案，sirpα的氨基酸序列包含seq id no：27或seq idno：88。

40、根据本发明的一些实施方案，sirpα的氨基酸序列如seq id no：27或seq id no：88所示。

41、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了包含二聚体的组合物，其中二聚体是组合物中lilrb的主要形式。

42、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了包含二聚体的组合物，其中二聚体是组合物中lilrb2的主要形式。

43、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了编码lilrb多肽、融合多肽或二聚体的多核苷酸。

44、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了编码lilrb2多肽、融合多肽或二聚体的多核苷酸。

45、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了核酸构建体，其包含编码lilrb多肽、融合多肽或二聚体的多核苷酸，以及用于引导多核苷酸在宿主细胞中表达的调控元件。

46、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了核酸构建体，其包含编码lilrb2多肽、融合多肽或二聚体的多核苷酸，以及用于引导多核苷酸在宿主细胞中表达的调控元件。

47、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了宿主细胞，其包含lilrb多肽、融合多肽或二聚体、多核苷酸、或核酸构建体。

48、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了宿主细胞，其包含lilrb2多肽、融合多肽或二聚体、多核苷酸、或核酸构建体。

49、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了制备多肽的方法，该方法包括将多核苷酸或核酸构建体引入宿主细胞或培养宿主细胞。

50、根据本发明的一些实施方案，所述方法包括分离lilrb多肽、融合多肽或二聚体。

51、根据本发明的一些实施方案，所述方法包括分离lilrb2多肽、融合多肽或二聚体。

52、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了在有需求的对象中治疗与表达hla-g的病理性细胞相关的疾病的方法，所述方法包括向对象施用治疗有效量的lilrb多肽、组合物、融合多肽或二聚体、多核苷酸、核酸构建体或宿主细胞，从而治疗对象的疾病。

53、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了在有需求的对象中治疗与表达hla-g的病理性细胞相关的疾病的方法，所述方法包括向对象施用治疗有效量的lilrb2多肽、组合物、融合多肽或二聚体、多核苷酸、核酸构建体或宿主细胞，从而治疗对象的疾病。

54、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了lilrb多肽、组合物、融合多肽或二聚体、聚核苷酸、核酸构建物或宿主细胞，其用于在有需求的对象中治疗与表达hla-g的病理性细胞相关的疾病。

55、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了lilrb2多肽、组合物、融合多肽或二聚体、聚核苷酸、核酸构建物或宿主细胞，其用于在有需求的对象中治疗与表达hla-g的病理性细胞相关的疾病。

56、根据本发明的一些实施方案，疾病为癌症。

57、根据本发明的一些实施方案，癌症选自胰腺癌、乳腺癌、皮肤癌、结直肠癌、胃癌和卵巢癌。

58、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了激活免疫细胞的方法，该方法包括在lilrb多肽、组合物、融合多肽或二聚体、多核苷酸、核酸构建体或宿主细胞的存在下体外激活免疫细胞。

59、根据本发明的一些实施方案的方面，提供了激活免疫细胞的方法，该方法包括在lilrb2多肽、组合物、融合多肽或二聚体、多核苷酸、核酸构建体或宿主细胞的存在下体外激活免疫细胞。

60、根据本发明的一些实施方案，激活是在表达hla-g的细胞的存在下进行的。

61、除非另有定义，否则本文所用的所有技术和/或科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。尽管在本发明实施例的实践或测试中可以使用与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料，但示例性方法和/或材料描述如下。如有冲突，以专利说明书、包括定义为准。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的而不旨在限制。