一种用于糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用

本发明涉及生物医疗领域，尤其涉及一种用于糖尿病视网膜病变诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用。

背景技术：

1、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，dr)是糖尿病最常见和严重的微血管并发症之一，是导致糖尿病患者视力下降的主要原因。随着糖尿病发病率的增长，dr的发病率正在迅速上升，预计到2045年全球糖尿病患者人数将达到7亿。血糖的异常升高导致视网膜微血管损害，造成视网膜出血、渗出、黄斑水肿、玻璃体积血，视网膜脱离等一系列眼底表现。目前临床上常用影像学方法(如广角视网膜成像、光学相干断层扫描等)来筛查和诊断dr。然而，由于dr在病变前期存在一定隐匿性，临床症状在眼底图像上往往难以察觉，导致很多患者就医时病情已到中晚期，视力已受到了不可逆地损害。目前，糖尿病视网膜病变的治疗方式主要是激光、药物和手术三大类。此类治疗主要针对已有视力损伤、眼底增殖性血管病变的晚期患者，起到延缓疾病进展的作用。然而，对于恢复dr患者视觉质量的效果有限，并且存在有创性操作、疗效不佳和费用高昂等问题。因此，针对糖尿病视网膜病变的诊断和干预，找到灵敏且应用方便的检测标记物，具有十分重要的临床意义。

2、分泌蛋白是指在细胞内合成后分泌到细胞外起作用的蛋白质，主要包括细胞因子、生长因子、补体、降解酶类、抗体、肽类激素和免疫球蛋白等具有重要生理功能的蛋白质。在各种疾病发生过程中，疾病相关细胞会分泌出诸如细胞因子和蛋白水解酶等多种蛋白质，参与调控疾病的发生发展。房水属于眼内液，处于动态循环中，其成分与眼部的局部生理及病理环境密切相关。房水比血液更能反映眼内微环境的变化，对房水中分泌蛋白的表达进行检测可以反映疾病的状态。

3、三叶因子家族(trefoil factor family，tff)是一类含有一个或几个三叶因子结构域的小分子多肽，又称三叶肽(trefoil peptide)。tff2是tff家族的一员，是一种具有耐酸、耐热和抗蛋白酶水解作用的分泌蛋白。目前的报道显示，在肿瘤浸润和已出现淋巴结和血行转移的患者中，tff2的表达明显增加。持续分泌的tff2通过介导癌基因和抑癌基因的改变，影响肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等病理进程。但tff2在糖尿病视网膜病变中的作用尚未得到广泛探索。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明提出了一种诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的生物标志物tff2。所述生物标志物在糖尿病视网膜病变患者房水中的表达水平高于非糖尿病视网膜病变患者，差异具有统计学意义。采用tff2的表达水平检测糖尿病视网膜病变时，其roc曲线的auc值为0.9122，诊断值为864.534pg/ml。由此可知，tff2作为dr的诊断标志物，具有较高的诊断灵敏度、特异性和准确性。检测样本中tff2可早期发现dr并采取相应的治疗措施，可以有效延缓疾病的进展，减少并发症的发生。

2、在体外细胞实验中，本发明发现tff2可促进视网膜血管内皮细胞增殖、迁移、成管及出芽，从而加速新生血管的形成；tff2还通过影响内皮细胞通透性，增加视网膜新生血管的渗透性，加剧疾病进展。因此，tff2可能成为dr治疗的潜在靶点。通过干预tff2的表达，有望拮抗内皮细胞的促血管生成相关表型，从而延缓dr的发生发展。

3、本发明的技术方案是这样实现的：

4、第一方面，本发明提供了一种检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的产品中的应用，所述生物标志物为tff2。

5、在一些优选的实施例中，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术、色谱技术、质谱技术检测所述生物标志物水平的试剂。

6、在一些优选的实施例中，所述试剂包括如下中的一种或多种：(1)特异性识别所述生物标志物的探针；(2)特异性扩增所述生物标志物的引物；(3)特异性结合所述生物标志物编码的蛋白的结合剂。

7、进一步地，在一些优选的实施例中，所述样本为房水。

8、房水是前房中的无色透明的液体，可为眼内组织提供营养和氧气、排出代谢产物以及维持眼压。由于房水直接与眼内组织接触，能够直接反映眼内微环境的变化，更好地揭示眼部病变情况。此外，正常情况下房水的成分相对稳定，不容易受到外界因素的干扰，检测结果的准确性高。

9、在一些优选的实施例中，所述试剂盒包括qpcr试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、elisa试剂盒和电化学发光检测试剂盒中的一种或多种。

10、在一些优选的实施例中，所述试剂盒选自elisa试剂盒，组分包括：辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体、标准品、显色液和终止液。

11、更进一步地，在一些优选的实施例中，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

12、在一些优选的实施例中，所述诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的步骤包括：s1采集待测患者的房水样本；s2检测房水样本中的生物标志物的蛋白表达量，若蛋白表达量高于864.534pg/ml，则待测患者为糖尿病视网膜病变。

13、第二方面，本发明提供了检测样本中生物标志物的试剂在制备预后评估糖尿病视网膜病变的产品中的应用，所述生物标志物为tff2，根据所述生物标志物的蛋白表达水平的变化，对糖尿病视网膜病变的预后进行评估，所述样本为房水。

14、第三方面，本发明还提供了tff2抑制剂在制备治疗和预防糖尿病视网膜病变药物中的应用，其特征在于，所述治疗和预防糖尿病视网膜病变药物用于抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管、出芽、通透性增加中的一种或多种病理行为，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

技术特征：

1.检测样本中生物标志物的试剂在制备诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为tff2。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、蛋白免疫技术、色谱技术、质谱技术检测所述生物标志物水平的试剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括如下中的一种或多种：(1)特异性识别所述生物标志物的探针；(2)特异性扩增所述生物标志物的引物；(3)特异性结合所述生物标志物编码的蛋白的结合剂。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述样本采集自房水。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括qpcr试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、elisa试剂盒和电化学发光检测试剂盒中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒选自elisa试剂盒，组分包括：辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体、标准品、显色液和终止液。

7.根据权利要求1-3、5-6中任一项所述的应用，其特征在于，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

8.根据权利要求1-3、5-6中任一项所述的应用，其特征在于，所述诊断或辅助诊断糖尿病视网膜病变的步骤包括：s1采集待测患者的房水样本；s2检测房水样本中的生物标志物的蛋白表达量，若蛋白表达量高于864.534pg/ml，则待测患者为糖尿病视网膜病变。

9.检测样本中生物标志物的试剂在制备预后评估糖尿病视网膜病变的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为tff2，根据所述生物标志物的蛋白表达水平的变化，对糖尿病视网膜病变的预后进行评估，所述样本为房水。

10.tff2抑制剂在制备治疗和预防糖尿病视网膜病变药物中的应用，其特征在于，所述治疗和预防糖尿病视网膜病变药物用于抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管、出芽、通透性增加中的一种或多种病理行为，所述糖尿病视网膜病变为增殖性糖尿病视网膜病变，病理特征为伴发视网膜新生血管。

技术总结本发明涉及生物医疗领域，尤其涉及一种用于糖尿病视网膜病变(DR)诊断的生物标志物、检测试剂盒及其应用。本发明提出了一种创新性解决方案，利用生物标志物TFF2对DR进行诊断和辅助诊断。本发明通过检测患者房水样本中TFF2的表达水平，验证了其在DR诊断中的有效性。研究数据显示，TFF2作为DR诊断指标的ROC曲线AUC值高达0.9122，表明其具有极高的灵敏度、特异性和准确性。这一结果显著提升了DR早期诊断的可靠性和精确度。此外，本发明研究发现TFF2通过促进视网膜血管内皮细胞的增殖、迁移、成管、出芽以及增加内皮细胞通透性等过程，显著促进了新生血管的形成，从而加剧了DR的进展。因此，本发明不仅提出了一种高效、精准的DR诊断方法，还为未来DR的治疗策略提供了重要的理论支持和实践指导。技术研发人员：颜标,姚进,张荟颖,张秋阳,刘青,王逢圣,祝悦受保护的技术使用者：南京医科大学眼科医院技术研发日：技术公布日：2024/11/4