产鼠李糖脂的重组大肠杆菌及其制备方法、微生物多糖、驱油用组合物和应用与流程

本发明属于微生物驱油。更具体地，本发明涉及一种产鼠李糖脂的重组大肠杆菌及其制备方法、微生物多糖、驱油用组合物和应用。

背景技术：

1、鼠李糖脂是由假单胞菌或伯克氏菌类产生的一种生物代谢性质的生物表面活性剂，具有降低油水界面张力的作用，运用于初次采油和二次采油之后的三采技术，主要作用原理有以下几种：(1)作为牺牲剂使用，减少昂贵驱油剂的用量或在地层中的损耗，和其它驱油剂复配后具有驱油效果好、见效时间长的优点，但鼠李糖脂的加入有效的减少了驱油剂的用量，大大降低了成本。(2)生物表面活性剂具有典型的生物活性，可以激活地层本源微生物，起到协同采油的作用，在油田的矿场试验水样中发现：注后半年较注前油井水样中细菌含量提高了2-3个数量级。(3)作为一种活性剂使用，鼠李糖脂本身就是一种表面活性剂，可以降低油水界面张力，复配后驱油剂油水界面张力可达到10-3mn/m的水平，从而提高原油驱替效率。

2、但由于微生物驱油技术本身具有限制因素，鼠李糖脂的生产工艺主要是利用微生物发酵，包括种子培养、菌种发酵、以及发酵液后处理等一系列过程，但现有菌株的产量受到限制，影响了其应用和推广。

3、有鉴于此，亟需提供一种提高鼠李糖脂产量的方案，以便在保持良好性能的前提下，满足高产量的需求。

技术实现思路

1、为了至少解决如上所提到的一个或多个技术问题，本发明的实施例提供了一种产鼠李糖脂的重组大肠杆菌，选自以下任一种：a)所述重组大肠杆菌包含如seq id no.1所示核苷酸序列的产鼠李糖脂的dna片段；b)所述重组大肠杆菌表达如seq id no.2所示氨基酸序列的产鼠李糖脂的肽段。

2、根据本发明的一个实施方式，所述重组大肠杆菌通过以大肠杆菌为出发菌株，植入来自铜绿假单胞菌的产鼠李糖脂的dna片段构建得到。

3、根据本发明的另一方面，提供了一种微生物多糖，所述微生物多糖由前述的重组大肠杆菌发酵制备。

4、根据本发明的另一方面，提供了一种驱油用组合物，包括：前述的微生物多糖、表面活性剂、有机酸、金属离子和水。

5、根据本发明的一个实施方式，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠。

6、根据本发明的一个实施方式，所述有机酸为柠檬酸及其盐、酒石酸及其盐、富马酸及其盐、草酸及其盐中的至少一种。

7、根据本发明的一个实施方式，所述金属离子为cu2+、fe2+、zn2+、al3+、na+和k+中的至少一种。

8、根据本发明的另一个方面，提供了一种重组大肠杆菌的制备方法，包括：获取铜绿假单胞菌的产鼠李糖脂的dna片段；将所述产鼠李糖脂的dna片段通过重组质粒植入大肠杆菌，得到重组大肠杆菌。

9、根据本发明的一个实施方式，所述重组质粒为prk293，酶切位点为sali单酶切点。

10、根据本发明的另一个方面，提供了前述的重组大肠杆菌、微生物多糖、驱油用组合物在制备驱油剂中的应用。

11、如上所提供的重组大肠杆菌，遗传性状稳定，鼠李糖脂产量高。由上述重组大肠杆菌制备的微生物多糖制备驱油剂，具有良好的流变性、增稠性和热稳定性。通过重组质粒为prk293，酶切位点为sali单酶切点，良好的保留了产鼠李糖脂的基因。

技术特征：

1.一种产鼠李糖脂的重组大肠杆菌，其特征在于，选自以下任一种：

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，

3.一种微生物多糖，其特征在于，

4.一种驱油用组合物，其特征在于，包括：

5.根据权利要求4所述的驱油用组合物，其特征在于，

6.根据权利要求4所述的驱油用组合物，其特征在于，

7.根据权利要求4所述的驱油用组合物，其特征在于，

8.一种重组大肠杆菌的制备方法，其特征在于，包括：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，

10.权利要求1或权利要求2所述的重组大肠杆菌、权利要求3所述的微生物多糖、权利要求4至7所述的驱油用组合物在制备驱油剂中的应用。

技术总结本发明属于微生物驱油技术领域，公开了产鼠李糖脂的重组大肠杆菌及其制备方法、微生物多糖、驱油用组合物和应用。产鼠李糖脂的重组大肠杆菌，选自以下任一种：a)重组大肠杆菌包含如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的产鼠李糖脂的DNA片段；b)重组大肠杆菌表达如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的产鼠李糖脂的肽段。如上所提供的重组大肠杆菌，遗传性状稳定，鼠李糖脂产量高。由上述重组大肠杆菌制备的微生物多糖制备驱油剂，具有良好的流变性、增稠性和热稳定性。通过重组质粒为pRK293，酶切位点为SalI单酶切点，良好的保留了产鼠李糖脂的基因。技术研发人员：何磊,于阅,靳丙辉,曾金雨,于景景受保护的技术使用者：北京鼎安时代科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/4