一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法与流程

本发明属于分析测试，更具体的说是涉及一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法。

背景技术：

1、含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物(氯代(吡啶并[3,2,1-ij][1,6]萘啶-1-基)丁基双(2-氯乙基)氨基甲酸酯衍生物)为自主研发的的一类新的用于肿瘤或癌症治疗的化合物，在【1】(一类含氮芥的槐定碱类衍生物及其制备方法和用途，zl201710319723.1)和【2】(sophoridine derivatives induce apoptosis and autophagy to suppress thegrowth of triple-negative breast cancer through inhibition ofmtor signaling[j].chemmedchem,2022,17:e202100434)中公布了此类化合物的合成方法和用途，并且我们通过研究发现此类化合物在体内外实验中显示出强大的抗白血病、宫颈癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞增殖的活性，且对正常细胞的毒性较低。此类化合物在作为药物特别是用于肿瘤或癌症治疗方面具有良好的应用前景，但由于其尚未建立纯度检测方法、无法定量，以至于不能有效控制其质量、保证药物疗效，严重影响了此类化合物的药物转化进程。因此，建立快速准确有效的化合物纯度检测方法，具有质量及疗效的双重评估价值，对于推进此类化合物向高效低毒的抗肿瘤药物转化、有效保证临床疗效具有重要意义。

2、目前氯代(吡啶并[3,2,1-ij][1,6]萘啶-1-基)丁基双(2-氯乙基)氨基甲酸酯衍生物没有合适的质量评价方法。由于这类化合物极性较大，在以c18色谱柱、氨基色谱柱为主要检测手段的反向系统色谱上均不易保留，用hplc法检测较为困难；化合物与溶剂最大吸收波长相近，溶剂的吸收会影响检测结果的准确性，给准确定量带来困难；系列衍生化合物结构相似、极性相近，致使分离困难，并且样品中存在与该化合物不易分离的未知杂质，导致难以建立有效准确的质量分析方法，影响化合物的质量控制和后续转化应用。

3、因此，如何提供一种快速、准确、检出限低的含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、为了克服现有技术中的缺点和不足，本发明提供了一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，采用hplc-dad方法结合离子对试剂检测得到衍生物待测物的纯度；

4、所述衍生物的结构式如下所示：

5、

6、优选的，所述衍生物为r1、r2中的一种或两种混合物；

7、r1、r2的结构式如下所示：

8、

9、r1：4-((1r,3ar,3a1s,10as)-2-((3-氯苯基)磺酰基)十氢-1h,4h-吡啶并[3,2,1-ij][1,6]萘啶-1-基)丁基双(2-氯乙基)氨基甲酸酯；

10、r2：4-((1r,3ar,3a1s,10ar)-2-(4-氯苄基)十氢-1h,4h-吡啶并[3,2,1-ij][1,6]萘啶-1-基)丁基双(2-氯乙基)氨基甲酸酯。

11、优选的，所述hplc-dad的控制条件包括：

12、色谱柱为c18柱；

13、检测波长为210-220nm；

14、流动相a为0.003-0.008m的庚烷磺酸钠水溶液；

15、流动相b为甲醇；

16、梯度洗脱的具体操作为：

17、0～t1 min，流动相a含量为a1，流动相b含量为100％-a1，流速为0.3～0.8ml/min；

18、t1～t2 min，流动相a含量为a2，流动相b含量为100％-a2，流速为0.6～1.2ml/min；

19、t2～t3 min，流动相a含量为a3，流动相b含量为100％-a3，流速为0.3～1.0ml/min；

20、其中，7≤t1≤8，9≤t2≤20，12≤t3≤45；2％≤a1≤7％，4％≤a2≤10％，2％≤a3≤8％，且a1≤a3＜a2。

21、优选的，所述流动相a为0.005m庚烷磺酸钠水溶液。

22、上述技术方案的有益效果为：选用此流动相，r1和r2分离效果好，能完全分离。

23、优选的，所述检测波长为214nm。

24、上述技术方案的有益效果为：214nm波长下r1和r2都有较强吸收且无溶剂干扰。dad检测器在波长214nm下检测到r1和r2的峰型最好、响应值高，并且可以和相邻杂质峰达到基线分离，证实了该波长选择的正确性。

25、优选的，还包括样品预处理，具体操作如下：

26、(1)将200～300目硅胶经105℃活化12h，采用洗脱剂石油醚-乙酸乙酯1：1湿法装柱，再用4倍柱体积石油醚-乙酸乙酯1：1洗柱，称取衍生物合成粗品，用硅胶拌样上样，洗脱剂洗脱，收集目标样品，旋转蒸发仪低温旋除溶剂，真空干燥除溶剂残留，得到可以直接给药的纯化样品，即待测物；

27、(2)加入甲醇溶解待测物，定容摇匀，作为供试品溶液，按照高低浓度对比法，先配制100％浓度的供试品溶液，然后稀释20倍得到5％浓度的溶液，作为对照溶液，计算供试品纯度。

28、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，具有以下有益效果：

29、(1)本发明采用hplc-dad方法结合离子对试剂进行检测，检测到r1和r2的峰型最好、响应值高，并且可以和相邻杂质峰达到基线分离，专属性良好，检出限低、精密度好、稳定性高，能够快速准确地实现检测。

30、(2)现有技术仅使用hplc法分析电离能力比较强的r1和r2样品时，样品在反相色谱柱上的保留时间很短、甚至不保留。相比单纯的hplc，本发明采用hplc-dad方法结合离子对试剂检测，可将分析物上的离子进行结合，形成在柱子上有保留的分子，从而增加保留时间、改善峰型，使样品得以检测。

31、(3)r1和r2结构相近、极性相似，不易分离，与hplc结合其他检测试剂相比较，本发明采用的hplc-dad结合离子对试剂的方法，能够通过引入离子对改变r1和r2的极性以及其在色谱柱上的分离性质，使其完全分离。

32、(4)本发明采用hplc-dad方法结合离子对试剂进行检测，有效避免了溶剂吸收对待测化合物的干扰，同时排除了样品和溶剂极性差异出现的倒峰现象，并且该方法能够同时分离离子化和非离子化物质，更加准确的分离出待测化合物和未知杂质，保证了待测物纯度检测结果的准确。

技术特征：

1.一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，其特征在于，采用hplc-dad方法结合离子对试剂检测得到衍生物待测物的纯度；

2.根据权利要求1所述的一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，其特征在于，所述衍生物为r1、r2中的一种或两种混合物；

3.根据权利要求1所述的一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，其特征在于，所述hplc-dad的控制条件包括：

4.根据权利要求3所述的一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，其特征在于，所述流动相a为0.005m庚烷磺酸钠水溶液。

5.根据权利要求3所述的一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，其特征在于，所述检测波长为214nm。

6.根据权利要求1所述的一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法，其特征在于，还包括样品预处理，具体操作如下：

技术总结本发明属于分析测试技术领域，公开了一种含氮芥的槐定碱类氯代苯基衍生物的检测方法。本发明采用HPLC‑DAD方法结合离子对试剂检测得到衍生物待测物的纯度。HPLC‑DAD的控制条件包括：色谱柱为C18柱；检测波长为210‑220nm；流动相A为0.003‑0.008M庚烷磺酸钠水溶液；流动相B为甲醇。本发明检测到R1和R2的峰型最好、响应值高，并且可以和相邻杂质峰达到基线分离，专属性良好，检出限低、精密度好、稳定性高，能够快速准确地实现检测。技术研发人员：傅予,张岩,刘庆焕,李冬冬,代霖霖,支爽,杨子博,李萌,王晓辉,王慧,张娜,郑夺,张桂贤,陈冠,张婷受保护的技术使用者：天津市医药科学研究所（天津市医药与健康研究中心）技术研发日：技术公布日：2024/11/4