一种混菌发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法与流程

本发明涉及几丁质制备，具体为一种混菌发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法。

背景技术：

1、蛋白酶是水解蛋白质肽键的一类酶的总称。蛋白酶的作用是将组成蛋白的大分子多肽水解为寡肽或氨基酸。在全球酶制剂市场中微生物蛋白酶是最重要的酶之一。蛋白酶是生物体生理上必需的，它们广泛存在于植物、动物和微生物中。与动物、植物蛋白酶相比微生物蛋白酶具有生产成本低、方便提取、生产工艺简单等优点。按照酶作用的ph条件分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶。酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下将蛋白质和多肽键水解的酶类。酸性蛋白酶具有良好的耐酸性，是重要的工业酶制剂并广泛地应用于饲料加工、轻工、酿造、皮革以及食品加工等行业。

2、南极磷虾分布在南大洋辐合区以南的水域，属甲壳动物纲磷虾目，其成体虽小，但生物量庞大，拥有较高的生物利用价值。南极磷虾粉主要成分为蛋白质、矿物质和几丁质。因此，可作为制备几丁质的原料。提取几丁质的方法主要包括化学法和生物法。化学法需采用强酸脱矿物质和强碱脱蛋白，不仅对甲壳素的分子链有一定的破坏，且能耗高，对环境污染较严重，而且其中的蛋白、钙质等矿物质均无法回收。酶解法相较于化学法反应条件更为温和，对几丁质的主链结构影响更小，但反应时间长，成本高且无法彻底去除虾壳中的蛋白质。

3、微生物发酵法通过产蛋白酶和有机酸菌株分解虾壳中的蛋白质和矿物质进而获得几丁质。该方法在生产过程中不使用化学试剂，具备环境友好性。然而，微生物发酵法存在野生菌株产酸产酶能力较低的问题，导致制备几丁质受到限制。高活性产酸产酶菌株的缺乏成为工业化应用的瓶颈。解决上述问题不仅有助于几丁质的绿色开发，还能降低生产成本，减少环境污染；为此提供了一种混菌发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法，混菌发酵南极磷虾粉制备几丁质具有操作简便高效，生产成本低，环境友好等特点。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种混菌发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法，以解决上述背景技术提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种阿氏普利斯特菌priestiaaryabhattai cd28与发酵粘液乳杆菌limosilactobacillusfermentum fua033在混合发酵南极磷虾粉制备几丁质中的应用。

3、作为本发明的一种优选技术方案，阿氏普利斯特菌priestia aryabhattai cd28已于2024年6月17日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc no.30969，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

4、作为本发明的一种优选技术方案，发酵粘液乳杆菌已于2023年9月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmccno.28447，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

5、一种阿氏普利斯特菌priestia aryabhattai cd28与发酵粘液乳杆菌limosilactobacillusfermentum fua033混合发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法，具体步骤如下：

6、步骤一：挑取limosilactobacillusfermentum fua033单菌落至mrs肉汤中，priestia aryabhattai cd28单菌落至种子培养基中，180rpm，37℃培养24h，获得种子液；

7、步骤二：称取5g南极磷虾粉至250ml三角瓶中，加蒸馏水至料液比1：5，8％葡萄糖，121℃灭菌，接种7％limosilactobacillusfermentum fua033种子液和priestiaaryabhattai cd28种子液，并调od值相同，将limosilactobacillus fermentum fua033和priestia aryabhattai cd28置于转速为160rpm，37℃摇床培养6d；

8、步骤三：发酵后滤渣离心并用蒸馏水清洗至ph中性，烘干，所得的滤渣即为几丁质。

9、作为本发明的一种优选技术方案，步骤二中的limosilactobacillusfermentumfua033和priestia aryabhattai cd28接种比例1：4

10、作为本发明的一种优选技术方案，所述顶盖盒与反应釜密封相连。

11、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用产乳酸的limosilactobacillusfermentum fua033和产酸性蛋白酶的priestia aryabhattai cd28混合发酵南极磷虾粉制备几丁质，具有操作简便高效，生产成本低，终产品成分单一，环境友好等特点，同时可以对发酵液中的蛋白肽、钙等营养物质进行回收，而且几丁质在发酵过程不会被水解。

技术特征：

1.一种阿氏普利斯特菌priestia aryabhattai cd28与发酵粘液乳杆菌limosilactobacillusfermentum fua033在混合发酵南极磷虾粉制备几丁质中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：阿氏普利斯特菌priestia aryabhattaicd28已于2024年6月17日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc no.30969，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：发酵粘液乳杆菌limosilactobacillusfermentum fua033已于2023年9月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc no.28447，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

4.一种如权利要求1所述的阿氏普利斯特菌priestia aryabhattai cd28与发酵粘液乳杆菌limosilactobacillusfermentum fua033混合发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法，其特征在于：具体步骤如下：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤二中的limosilactobacillusfermentum fua033和priestia aryabhattai cd28接种比例1：4。

技术总结本发明涉及几丁质制备技术领域，具体公开了一种混菌发酵南极磷虾粉制备几丁质的方法，步骤一：挑取发酵粘液乳杆菌FUA033单菌落至MRS肉汤中，阿氏普利斯特菌CD28单菌落至种子培养基中，180rpm，37℃培养24h，获得种子液；步骤二：称取5g南极磷虾粉至250mL三角瓶中，加蒸馏水至料液比1：5，8％葡萄糖，121℃灭菌，接种7％发酵粘液乳杆菌FUA033种子液和阿氏普利斯特菌CD28种子液，将发酵粘液乳杆菌FUA033和阿氏普利斯特菌CD28置于转速为160rpm，37℃摇床培养6d；步骤三：发酵后滤渣离心并用蒸馏水清洗至pH中性，烘干得几丁质。本方法操作简便高效，生产成本低，环境友好。技术研发人员：房耀维,桂家进,胡亚东,潘明轩,周兴虎,焦学,陈昱光,钱津,杨光,刘姝,侯晓月受保护的技术使用者：江苏省沿海开发投资有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/18