新型HPV16非HLA限制性T细胞疫苗、组合物及其使用方法与流程

本发明的具体实施方式总体涉及新型hpv16疫苗，具体的涉及非hla限制性t细胞疫苗、组合物及其使用方法。

背景技术：

1、利用hpv e6和e7蛋白抗原进行治疗性疫苗接种已经证明其在治疗hpv诱发的癌症(如宫颈癌、肛门癌、外阴癌、阴道癌和头颈癌)以及癌前瘤样病变中的高度可能性。由于进行抗原交叉提呈以诱发hpv特异性t细胞应答的能力有限，hpv治疗性疫苗接种的最早方法取决于单个cd8+短肽表位的参与和提呈。即使是在经评估的被选定hla-a2人群中，这些基于肽的hpv疫苗由于hla-a2表位的限制性展示出非常有限的适用性。克服该癌症疫苗重大缺陷的更近的方法集中在两个关键方法或平台上：1. 被编码进入生物载体(如改良病毒和细菌)的hpv全长蛋白dna的递送；2. 覆盖整个全长hpv16 e6和e7蛋白质序列的多个重叠长多表位肽的使用。这两个方法的研究方向都是克服使用短的单表位hla-a2肽所面临的患者基因限制，从而处理广大患者人群，这两个方法在人类临床试验中都显示了潜在的希望。

2、计算机模拟的肽结合分析已经被有效地用于理解免疫原性肽的潜在结合能力。但该技术尚未被更高效的用于设计特性简单但仍可能用于解决具有各种基因背景的广大患者人群的需求的癌症疫苗。

3、t细胞介导一系列免疫响应，包括负责清除细胞间病原体、被病毒感染的细胞和肿瘤细胞的免疫响应以及负责移植排斥和自身免疫的免疫响应。t细胞免疫系统适于识别陌生细胞以及变化的自体细胞并将它们从身体里清除。t细胞对肽抗原的识别是通过t细胞受体(tcr)进行的。该过程要求由位于抗原提呈细胞(apc)-例如树突细胞-的表面的主要组织相容性复合体(mhc)分子将肽抗原提呈至tcr。人类mhc分子被称为人类组织相容性白细胞抗原(hla)。肽抗原与mhc分子相连，其相连的方式使得t细胞受体能够识别由mhc分子和具体肽的组合形成的独特结构。t细胞功能性的限制性方面在于mhc分子中的多态性以及可与mhc相结合的独特肽的范围过宽，从而导致了多样化的识别模式使得给定mhc-肽组合仅可由一小部分t细胞克隆识别。

4、有两种主要类型的mhc分子涉及抗原提呈：i类和ii类。mhc i类分子由带有3个区的alpha链以及跨膜区和胞浆区组成。mhc i类分子广泛的分布和存在于所有有核细胞上。mhc ii类分子由自我结合形成异质二聚体的alpha链和beta链组成。每个链具有两个胞外区以及跨膜区和胞内区。mhc ii类分子的分布比i类分子更加有限，并存在例如抗原提呈细胞(apcs)上。

5、已经针对特定抗原被特异性激活的细胞毒性t淋巴细胞(ctl)能够杀死含有或表达所述抗原的细胞。ctl的tcr在mhc i类分子环境中识别抗原。辅助性t淋巴细胞(th细胞)的重要作用是ctl响应的最佳诱导，它们也可以在维持ctl记忆中起作用。th细胞的tcr在mhc ii类分子环境中识别抗原。

6、对初始抗原识别t细胞的治疗性疫苗接种已经被证明是旨在通过激活患者免疫系统来治疗早期和晚期疾病的主动式癌症免疫疗法的可行选项。通过治疗性疫苗接种激活的各种机能特异性的攻击和摧毁抗原表达癌细胞并忽略正常细胞。治疗性癌症疫苗原则上可以有效的抑制肿瘤生长并治疗常规疗法(如手术、放疗和化疗)束手无策的复发肿瘤。治疗前列腺癌的治疗性癌症疫苗已经被美国食品和药物管理局批准。这一重大突破为可以提供改善的安全性和疗效的治疗性疫苗的新方法铺平了道路。数个此类方法正被进行临床前和临床评估。与一般对健康个人施用的预防性抗体诱导疫苗不同，治疗性癌症疫苗是对癌症患者施用的并被设计为通过增强患者自身免疫响应-具体是指t细胞响应-来根除癌细胞(lollini pl, cavallo f, nanni p, forni g. vaccines for tumour prevention.nature reviews. cancer. 2006;6:204–216)。

7、以肿瘤相关抗原为治疗目标

8、基于来自限定的肿瘤相关抗原(taas)的蛋白质的重组疫苗或衍生自taas的合成肽疫苗通常与佐剂或免疫调节剂组合施用，这些疫苗相较于自体疫苗和dc疫苗显示出在成本和简单性方面的显著优势。患者样本或试样的可用性以及制备个性化疫苗的复杂过程限制了自体癌症疫苗的广泛应用。mage-1是被报告为编码被t细胞识别的人类肿瘤抗原的第一种基因 (van der bruggen p, traversari c, chomez p, lurquin c, de plaen e,  van den eynde b, knuth a, boon t. a gene encoding an antigen recognized by  cytolytic t lymphocytes on a human melanoma. science. 1991;254:1643–1647)，并且已经被充分研究和应用于临床癌症疫苗。对数种taa的识别已经提供了开发和设计各种靶向治疗性疫苗以解决大范围癌症的能力。此类taa已经被划分为数个主要类别。肿瘤-睾丸抗原，例如ny-eso-1、bage、mage和ssx-2，被在成人组织内一般保持沉默但在肿瘤细胞中被转录重新激活的基因所编码 (de smet c, lurquin c, van der bruggen p, de plaen  e, brasseur f, boon t. sequence and expression pattern of the human mage2  gene. immunogenetics. 1994;39:121–129; gnjatic s, ritter e, buchler mw, giese  na, brors b, frei c, murray a, halama n, zornig i, chen yt, andrews c, ritter  g, old lj, odunsi k, jager d. seromic profiling of ovarian and pancreatic  cancer. proceedings of the national academy of sciences of the united states  of america. 2010;107:5088–5093; hofmann o, caballero ol, stevenson bj, chen  yt, cohen t, chua r, maher ca, panji s, schaefer u, kruger a, lehvaslaiho m,  carninci p, hayashizaki y, jongeneel cv, simpson aj, old lj, hide w. genome- wide analysis of cancer/testis gene expression. proceedings of the national  academy of sciences of the united states of america. 2008;105:20422–20427;  karbach j, neumann a, atmaca a, wahle c, brand k, von boehmer l, knuth a,  bender a, ritter g, old lj, jager e. efficient in vivo priming by vaccination  with recombinant ny-eso-1 protein and cpg in antigen naive prostate cancer  patients. clinical cancer research: an official journal of the american  association for cancer research. 2011;17:861–870)。组织分化抗原是来自于正常组织、由正常组织和肿瘤共享但是在肿瘤细胞中升高的抗原，例如黑素瘤(gp100, melan-a/mart-1和酪氨酸酶) (bakker ab, schreurs mw, de boer aj, kawakami y, rosenberg  sa, adema gj, figdor cg. melanocyte lineage-specific antigen gp100 is  recognized by melanoma-derived tumor-infiltrating lymphocytes. j exp med.  1994;179:1005–1009..bakker ab, schreurs mw, de boer aj, kawakami y, rosenberg  sa, adema gj, figdor cg. melanocyte lineage-specific antigen gp100 is  recognized by melanoma-derived tumor-infiltrating lymphocytes. j exp med.  1994;179:1005–1009)、前列腺癌(psa, pap) (correale p, walmsley k, nieroda c,  zaremba s, zhu m, schlom j, tsang ky. in vitro generation of human cytotoxic  t lymphocytes specific for peptides derived from prostate-specific antigen. j  natl cancer inst. 1997;89:293–300; kantoff pw, higano cs, shore nd, berger  er, small ej, penson df, redfern ch, ferrari ac, dreicer r, sims rb, xu y,  frohlich mw, schellhammer pf. sipuleucel-t immunotherapy for castration- resistant prostate cancer. the new england journal of medicine. 2010a;363: 411–422)和乳腺癌(乳腺珠蛋白-a) (jaramillo a, majumder k, manna pp, fleming tp,  doherty g, dipersio jf, mohanakumar t. identification of hla-a3-restricted  cd8+ t cell epitopes derived from mammaglobin-a, a tumor-associated antigen  of human breast cancer. international journal of cancer. journal  international du cancer. 2002;102:499–506)。与这些分化相关抗原类似，数个其它肿瘤抗原，如cea (tsang ky, zaremba s, nieroda ca, zhu mz, hamilton jm, schlom j.  generation of human cytotoxic t cells specific for human carcinoembryonic  antigen epitopes from patients immunized with recombinant vaccinia-cea  vaccine. j natl cancer inst. 1995;87:982–990)、muc-1 (finn oj, gantt kr,  lepisto aj, pejawar-gaddy s, xue j, beatty pl. importance of muc1 and  spontaneous mouse tumor models for understanding the immunobiology of human  adenocarcinomas. immunologic research. 2011;50:261–268)、her2/neu  (disis ml,  wallace dr, gooley ta, dang y, slota m, lu h, coveler al, childs js, higgins  dm, fintak pa, dela rosa c, tietje k, link j, waisman j, salazar lg.  concurrent trastuzumab and her2/neu-specific vaccination in patients with  metastatic breast cancer. journal of clinical oncology, official journal of  the american society of clinical oncology. 2009;27:4685–4692)、肿瘤抑制基因(p53) (azuma k, shichijo s, maeda y, nakatsura t, nonaka y, fujii t, koike k,  itoh k. mutated p53 gene encodes a nonmutated epitope recognized by hla-b* 4601-restricted and tumor cell-reactive ctls at tumor site. cancer res. 2003; 63:854–858)、htert (vonderheide rh, hahn wc, schultze jl, nadler lm. the  telomerase catalytic subunit is a widely expressed tumor-associated antigen  recognized by cytotoxic t lymphocytes. immunity. 1999;10:673–679)和特定抗凋亡蛋白(如存活素) (vonderheide rh, hahn wc, schultze jl, nadler lm. the  telomerase catalytic subunit is a widely expressed tumor-associated antigen  recognized by cytotoxic t lymphocytes. immunity. 1999;10:673–679)，也会在肿瘤组织中相较于正常对应物被大幅升高。独特的肿瘤特异性抗原常常被称为突变致癌基因(ras, b-raf) (brichard vg, lejeune d. cancer immunotherapy targeting tumour- specific antigens: towards a new therapy for minimal residual disease. expert  opinion on biological therapy. 2008;8:951–968)。靶向这些涉及推动肿瘤进程的肿瘤特异性抗原的优点在于对免疫选择的抗性可能会更加有效。虽然很多此类肿瘤特异性抗原已经被识别和利用，但是由于以下各种原因而要求识别其它此类抗原的需求仍在持续增长：鉴于人群中基因特征类型广泛，需要为特定组群识别特异性更高的抗原，此类组群的划分方式不限，例如按民族或地理位置划分。在医药行业中存在使疫苗生产方法更加准确并降低繁琐度的持续需求，因此将与诱发适当的免疫响应最精确关联的抗原、蛋白质和肽分离出来是当前的目标。

9、基于蛋白质/肽的疫苗相对于自体疫苗或个体化疫苗具有明显的成本优势。但是，它们仅靶向taa的一个表位或一些表位的事实可能会被认为是缺点。一般认为抗原特异性ctl和抗原特异性cd4+辅助t细胞两者的诱发对于癌症疫苗实现最佳疗效而言是必需的。一些多肽疫苗(例如stimuvax®)可能同时包含cd4和cd8表位。另一种提高自体抗原免疫原性的方法是改变taa的肽序列以引入增强子激动剂表位，这可以增强肽与mhc分子或t细胞受体的结合，从而导致更高水平的t细胞响应和/或亲和性(avidity)更高的t细胞 (dzutsev  ah, belyakov im, isakov dv, margulies dh, berzofsky ja. avidity of cd8 t  cells sharpens immunodominance. international immunology. 2007;19:497–507;  jordan kr, mcmahan rh, kemmler cb, kappler jw, slansky je. peptide vaccines  prevent tumor growth by activating t cells that respond to native tumor  antigens. proceedings of the national academy of sciences of the united  states of america. 2010;107:4652–4657; rosenberg sa, yang jc,  schwartzentruber dj, hwu p, marincola fm, topalian sl, restifo np, dudley me,  schwarz sl, spiess pj, wunderlich jr, parkhurst mr, kawakami y, seipp ca,  einhorn jh, white de. immunologic and therapeutic evaluation of a synthetic  peptide vaccine for the treatment of patients with metastatic melanoma. nat  med. 1998;4:321–327)。

10、一种治疗性癌症疫苗接种的常见方法是通过衍生自taa序列的、与mhc人类白细胞抗原(hla)精确结合的肽来进行接种。t细胞将其靶标抗原识别为由mhc i类分子在细胞表面提呈的具有8-10个氨基酸的肽。此类方法的主要缺点在于人类具有基因多样性，有大量的hla等位基因来识别和结合不同的肽抗原。因此，基于短肽的癌症疫苗显示了非常有限的适用性，近期获得的方法包括了多个肽，有时包括十个以上的肽，以合理的覆盖人群。

11、hpv疫苗

12、hpv e6和e7蛋白质在所有被hpv感染的癌前细胞中组成性共表达，并且是在活检中找到的来自hpv相关的宫颈癌细胞的最大量的病毒转录体 (k. seedorf, t.  oltersdorf, g. krämmer, w. röwekamp, identification of early proteins of the  human papilloma viruses type 16 (hpv 16) and type 18 (hpv 18) in cervical  carcinoma cells. embo j. 6, 139–144 (1987))，由于它们与p53及成视网膜细胞瘤蛋白质的相互作用 (d. pim, a. storey, m. thomas, p. massimi, l. banks, mutational  analysis of hpv-18 e6 identifies domains required for p53 degradation in  vitro, abolition of p53 transactivation in vivo and immortalisation of  primary bmk cells. oncogene 9, 1869–1876 (1994)), e6 和e7是细胞变形的原因并且对hpv相关的恶性肿瘤的维持(maintenance)是必需的 (k. münger, p. m. howley, human  papillomavirus immortalization and transformation functions. virus res. 89,  213–228 (2002))。值得注意的是，e6-和e7-特异性细胞免疫响应和与hpv16相关联的病变消退存在关联 (s. peng, c. trimble, l. wu, d. pardoll, r. roden, c. f. hung, t.  c. wu, hla-dqb1*02–restricted hpv-16 e7 peptide–specific cd4+ t-cell immune  responses correlate with regression of hpv-16–associated high-grade squamous  intraepithelial lesions. clin. cancer res. 13, 2479–2487 (2007))。farhat等人报告了以下情况：相较于患有持续性宫颈hpv16感染的女性，最近解决了hpv感染的女性中对hpv16 e6和e7产生阳性酶联免疫斑点(elispot)响应的百分比显著提高 (s. farhat, m.  nakagawa, a. b. moscicki, cell-mediated immune responses to hpv-16 e6 and e7  antigens as measured by interferon gamma enzyme-linked immunospot in women  with cleared or persistent human papillomavirus infection. int. j. gynecol.  cancer 19, 508–512 (2009))。因此，hpv e6和e7抗原被认为是前景良好的免疫疗法靶标。目前为止，数个类型的hpv治疗性疫苗，包括蛋白质/肽基的疫苗 (l. muderspach, s.  wilczynski, l. roman, l. bade, j. felix, l. a. small, w. m. kast, g. fascio,  v. marty, j. weber, a phase i trial of a human papillomavirus (hpv) peptide  vaccine for women with high-grade cervical and vulvar intraepithelial  neoplasia who are hpv 16 positive. clin. cancer res. 6, 3406–3416 (2000);  w.j. van driel, m.e. ressing, g.g. kenter, r.m.p. brandt, e.j.t. krul, a.b.  van rossum, e. schuuring, r. ovringa, t. bauknecht, a. tamm-hermelink, p.a.  van dam, g.j. fleuren, w.m. kast, c.j.m. melief and j.b. trimbos, vaccination  with hpv16 peptides of patients with advanced cervical carcinoma: clinical  evaluation of a phase i-ii trial, eur j cancer, vol. 35, no. 6, pp. 946-952,  1999)已经被研发出来，其焦点在于刺激hpv e6和e7特异性t细胞的产生和激活。但是，这些肽基hpv疫苗因其hla-a2表位受到限制而导致其即使在被评估的选定hla-a2组群中也仅仅表现出非常有限的适用性。在2009年有报告称，在研究患有vin3的非限制性患者人群时，含有13个来自hpv16 e6蛋白质的重叠肽和4个来自hpv16 e7肽的4个重叠肽(共计13个肽)的hpv肽疫苗显示了强烈的抗hpv响应。该研究第一次显示了在非hla限制性人群中广泛作用的hpv肽疫苗 (gemma g. kenter, marij j.p. welters, a. rob p.m. valentijn,  margriet j.g. lowik, dorien m.a. berends-van der meer, annelies p.g. vloon,  farah essahsah, lorraine m. fathers, rienk offringa, jan wouter drijfhout,  amon r. wafelman, jaap oostendorp, gert jan fleuren, sjoerd h. van der burg,  and cornelis j.m. melief; vaccination against hpv-16 oncoproteins for vulvar  intraepithelial neoplasia, n engl j med 2009;361:1838-47)。

13、这些参考文献，特别是作者为kenter等人的最后一个文献，强调了与目前提供广泛hla覆盖范围的肽疫苗的开发方法的主要缺陷。目前的方法由于无法确定可以提供广泛覆盖范围的免疫原性序列，因此其重点在于覆盖了整个抗原蛋白质序列的长肽。因此，4个主要缺陷导致了：1.疫苗复杂，包含了大量的肽，例如kenter等人使用了13个肽；2.疫苗比实际所需的更贵；3.患者需要接收不必要的肽，这些肽可能没有任何治疗性或免疫原性作用；4.活性肽可能被其它肽通过竞争性结合而失活(这个具体缺陷由上文所引用的kenter等人的文献所报告)。

14、当前发明报告了开发简单、更加经济、高效和广泛hla覆盖的肽疫苗的高效开发方法。

15、用于蛋白质/肽基疫苗的免疫刺激性佐剂

16、鉴于taa本身的免疫原性较差，在特定情况下可能需要免疫刺激性佐剂来产生有效的免疫响应。铝盐(alum)已经作为非常成功的佐剂使用了近一个世纪，并且在提升保护性体液免疫方面特别有效。但是，铝盐对于需要细胞介导免疫来保护的疾病并不是最有效的。在过去20年中对需要激活先天免疫来驱动适应性免疫响应的认识已经彻底的改变了佐剂如何提升适应性免疫的理论。具体而言，charles janeway的前沿研究表明适应性免疫响应在由微生物成分启动的先天免疫受体之后并依赖于由微生物成分启动的先天免疫受体 (janeway ca., jr. the immune system evolved to discriminate infectious  nonself from noninfectious self. immunol today. 1992;13:11–16)。通过模式识别受体(如toll样受体(tlrs))识别与病原体或病原相关分子模式(pamps)相关的保守部分引起(engage)针对微生物病原体或受感染细胞经协调的先天和适应性免疫 (kawai t, akira  s. toll-like receptors and their crosstalk with other innate receptors in  infection and immunity. immunity. 2011;34:637–650)。 tlr介导的抗原提呈细胞(如dcs)激活是该方法的重要步骤。的确，许多已研制和实验性疫苗包括pamps，不仅是为了防范感染性疾病，也是作为抗癌治疗性免疫法的一部分 (wille-reece u, flynn bj, lore  k, koup ra, miles ap, saul a, kedl rm, mattapallil jj, weiss wr, roederer m,  seder ra. toll-like receptor agonists influence the magnitude and quality of  memory t cell responses after prime-boost immunization in nonhuman primates.  j. exp. med. 2006;203:1249–1258)。使用这些分子限定和功能限定的分子作为佐剂很好的辅助了疫苗的理性设计。

17、作为该观点的支持者，用于治疗膀胱癌而长期使用的bcg(卡介苗)已经相对有效，并且显示了其可以激活tlr2和tlr4 (heldwein ka, liang md, andresen tk, thomas ke,  marty am, cuesta n, vogel sn, fenton mj. tlr2 and tlr4 serve distinct roles  in the host immune response against mycobacterium bovis bcg. journal of  leukocyte biology. 2003;74:277–286)。lps是tlr4的天然配体，早在20世纪60年代就有报告称其具有抗癌特性 (mizuno d, yoshioka o, akamatu m, kataoka t. antitumor  effect of intracutaneous injection of bacterial lipopolysaccharide. cancer  research. 1968;28:1531–1537)。单磷酰脂质a(mpl)是明尼苏达州沙门氏菌内毒素（s.minnesota endotoxin）的化学改性衍生物，其毒性大幅降低，同时保留了大部分lps的免疫刺激性特性 (mata-haro v, cekic c, martin m, chilton pm, casella cr, mitchell  tc. the vaccine adjuvant monophosphoryl lipid a as a trif-biased agonist of  tlr4. science. 2007;316:1628–1632)。有足够的研究已经显示mpl有效的增强了患者对病毒和肿瘤相关的抗原的免疫响应 (schwarz tf. clinical update of the as04- adjuvanted human papillomavirus-16/18 cervical cancer vaccine, cervarix.  advances in therapy. 2009;26:983–998)。fda批准了以mpl和铝盐制成的cervarix疫苗作为针对人类乳头瘤病毒的预防性疫苗 (schiffman m, wacholder s. success of hpv  vaccination is now a matter of coverage. the lancet oncology. 2012;13:10–12)。咪喹莫特（imiquimod(一种tlr7激动剂)）已经于2004年被fda批准用于人类的光化性角化病和表浅性基底细胞癌 (hoffman es, smith re, renaud rc., jr. from the analyst's  couch: tlr-targeted therapeutics. nat rev drug discov. 2005;4:879–880)。这些tlr激动剂在提高弱免疫原性taa的免疫原性中具有强大的潜力。数种与tlr激动剂组合的肽/蛋白质基癌症疫苗确实正在临床试验中被测试，包括靶向tlr3的安普利近（ampligen）(nct01355393)、靶向tlr3的histonol (nct00773097, nct01585350, nct01437605)、靶向tlr4的melitac 12.1 (nct01585350)以及靶向tlr9的雷西莫特（resiquimod）(nct00960752)。prrs组群在近些年已经极大的得到了扩展，因此人们付出了巨大的努力以调查先天免疫通路在确定佐剂作用机制中的功能以及其它prrs(例如nlr/rlr)在治疗性癌症疫苗的佐剂作用中的功能。

18、除了感应病原体相关的信号，prrs还识别内源性‘警报素’，例如应激蛋白/热休克蛋白(hsps)以及hmgb-1 (lotze mt, zeh hj, rubartelli a, sparvero lj, amoscato  aa, washburn nr, devera me, liang x, tor m, billiar t. the grateful dead:  damage-associated molecular pattern molecules and reduction/oxidation  regulate immunity. immunol rev. 2007;220:60–81; todryk sm, melcher aa,  dalgleish ag, vile rg. heat shock proteins refine the danger theory.  immunology. 2000;99:334–337)。作为细胞内在高度保守蛋白组成部分，这些损伤相关分子模式(damps)还将细胞损伤的性质和程度发送给主免疫系统。虽然已知hsps作为参与细胞内蛋白质质量控制的分子伴侣 (calderwood sk, murshid a, prince t. the shock of  aging: molecular chaperones and the heat shock response in longevity and  aging--a mini-review. gerontology. 2009;55:550–558; mayer mp, bukau b. hsp70  chaperones: cellular functions and molecular mechanism. cell mol life sci.  2005;62:670–684)，最近20年的研究已经确定以下概念：特定hsps能够整合先天和适应性免疫响应，并可以作为免疫刺激剂用在癌症免疫疗法中 (mayer mp, bukau b. hsp70  chaperones: cellular functions and molecular mechanism. cell mol life sci.  2005;62:670–684; wang xy, facciponte jg, subjeck jr. molecular chaperones and  cancer immunotherapy. handb exp pharmacol. 2006b;172:305–329)。

19、虽然在疫苗的理性设计中已经出现了显著的进步，对优化的预防性和治疗性疫苗的开发需求仍然持续存在。对大量患者人群具有广泛适用性的疫苗的开发需求依然存在，同时也需要此类疫苗具有特异性和有效性。

技术实现思路

1、本发明公开了包括任选的与一个或多个佐剂组合的hpv肽序列的新型组合物，其中所述hpv肽序列对应于hpv16 e6肽和/或hpv16 e7肽，并且其中所述肽序列与五种hla超类型具有结合亲和力，所述结合亲和力为约ic50值5000nm，并且其中一些肽为多表位肽。在特定具体实施方式中，所述组合物包括由阳离子脂质组成的佐剂；在特定具体实施方式中，所述阳离子脂质由dda、r-dotap、dotap、dotma或doepc、其变体或类似物组成。本发明所公开的新型组合物比现有的疫苗好得多，它们可以有效作用于总人群的80-90%以上。

2、本发明公开了诱发受试者体内针对hpv感染的免疫响应的方法，所述方法包括向受试者施用包括任选的与佐剂组合的hpv肽序列的组合物，其中所述hpv肽序列对应于hpv16 e6肽和/或hpv16 e7肽，并且其中所述肽序列与五种hla超类型具有结合亲和力，所述结合亲和力为约ic50值5000nm，并且其中一些肽为多表位肽。该方法可以为预防性方法，也可以为治疗性方法。