用于改善头发和头皮病况的新型组合物的制作方法

背景技术：

技术实现思路

1、本发明提供了用于预防、治疗或降低炎症，促进炎症消退和组织再生的新的组合物，以及其使用方法。更具体地说，本发明涉及包含茴香香桃木(anetholea anisita)提取物的抗炎和促炎症消退的组合物，以及其意想不到的细胞类型选择特性以及在改善头发和头皮病况方面的有利用途。

2、在一个实施方案中，本发明涉及包含有效量的茴香香桃木提取物的组合物，其中所述组合物预防、治疗或降低炎症，促进炎症消退和组织再生，并且改善头发和头皮病况。

3、在另一个实施方案中，本发明涉及包含有效量的茴香香桃木提取物的组合物，其中所述组合物预防、治疗或降低人毛囊真皮乳头细胞或正常人真皮成纤维细胞的炎症。

4、在另一个实施方案中，本发明涉及包含有效量的茴香香桃木提取物的组合物，其中所述组合物预防、治疗或降低人毛囊真皮乳头细胞的炎症。

5、在另一个实施方案中，本发明涉及预防、治疗或降低头皮或皮肤炎症，促进头皮或皮肤上的炎症消退和组织再生，或改善头发和头皮病况的方法，所述方法包括向有此需要的受试者的头皮或皮肤施用有效量的含有茴香香桃木提取物的组合物的步骤。

6、在另一个实施方案中，本发明涉及预防、治疗或降低头皮炎症，促进头皮上的炎症消退和组织再生，或改善头发和头皮病况的方法，所述方法包括向有此需要的受试者的头皮施用有效量的含有茴香香桃木提取物的组合物的步骤。

7、在另一个实施方案中，本发明涉及改善头发或头皮病况的方法，所述方法包括向有此需要的受试者的头皮施用有效量的含有茴香香桃木提取物的组合物的步骤。

8、在另一个实施方案中，本发明涉及含有有效量的茴香香桃木提取物的消费品，其中所述茴香香桃木提取物提供抗炎和促炎症消退特性。

9、在另一个实施方案中，本发明涉及含有有效量的茴香香桃木提取物的头发和头皮护理产品或皮肤护理产品，其中所述茴香香桃木提取物提供抗炎和促炎症消退特性。

10、在另一个实施方案中，本发明涉及含有有效量的茴香香桃木提取物的头发和头皮护理产品，其中所述茴香香桃木提取物提供抗炎和促炎症消退特性。

11、通过阅读以下说明书，本发明的这些和其他实施方案将会显而易见。

12、发明详述

13、茴香香桃木是澳大利亚本土植物，属于桃金娘科。它已被商业化生产，并因其风味和香气而被引入到澳大利亚菜肴中。茴香香桃木的一些化合物还可能具有增强健康的特性，如抗氧化、雌激素性和/或抗雌激素性活性、抗炎、抗菌和益生元作用。然而，这些特性可能因不同的细胞靶标而异，因此在不同类型的细胞和组织之间的效果也不同。例如，在巨噬细胞中，茴香香桃木提取物已被证明能对cox-2的蛋白表达提供剂量依赖性抑制，但对inos的抑制程度较小(guo et al.,toxicology reports(2014),1:385-390)。

14、本发明中，现在首次发现茴香香桃木提取物在人毛囊真皮乳头细胞(hfdpc)和正常人真皮成纤维细胞(nhdf)中具有有利的抗炎作用。特别地，在人毛囊真皮乳头细胞中的抗炎作用令人惊讶地优越。特异性促炎症消退脂质介质(spm)是一组最近在皮肤中鉴定的脂质介质，它们可促进炎症过程消退，从而预防慢性炎症的发展并恢复组织稳态。申请人首次在头皮中鉴定到spm的存在，并进一步证明了茴香香桃木提取物在头皮中的促炎症消退作用。茴香香桃木提取物增强头皮屏障、增加头发亮度、减少头皮屑、降低皮脂腺体积和皮脂释放。因此，本发明提供了细胞类型和组织选择性的抗炎和促炎症消退组合物，其包含在改善头发和头皮病况方面具有意想不到的且有利的特性的茴香香桃木提取物。

15、本发明的术语“头发和头皮病况”应理解为头皮屑、头皮瘙痒、头皮刺激、头皮上的肿块、油性头发和/或头皮、暗淡和不健康的头发或它们的组合。

16、本发明的术语“皮肤病况”应理解为皮肤炎症、发红、敏感性皮肤、刺激、瘙痒、有或无痤疮倾向的油性皮肤、瑕疵、皮肤暗沉或它们的组合。

17、在本技术中，茴香香桃木提取物是指从茴香香桃木植物的地上部分(新鲜或干燥的，如叶子、花朵、茎或其组合)获得的提取物。在一个实施方案中，茴香香桃木提取物是从叶子中获得的提取物。

18、在另一个实施方案中，采用如冷冻、干燥、冷冻干燥、研磨或其组合的方法对茴香香桃木材料进行预处理。在另一个实施方案中，茴香香桃木材料的预处理包括研磨方法。

19、本领域技术人员已知用于提供浓缩提取物的合适的提取方法，并且可以包括，例如但不限于煎煮、浸泡、浸渍、渗滤和浸出。在一个实施方案中，热提取(如煎煮)在水中或水醇混合物中进行。在本发明中，煎煮理解为将植物材料在水中煮沸一段时间以获得植物提取物。

20、可以使用极性溶剂如水、醇、酯、酮或它们的混合物进行提取。醇包括，例如，但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和多元醇(如甘油)。酯包括，例如，但不限于乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸异丁酯和乙酸叔丁酯。酮包括，例如，但不限于丙酮、环己酮和甲基乙基酮。在一个实施方案中，溶剂为水、醇或水性醇混合物，如水/乙醇、水/甲醇或水/甘油混合物。在另一个实施方案中，溶剂为水。

21、在一个实施方案中，茴香香桃木提取物是水性提取物。在提取结束时，通过使用离心和/或过滤去除固体残留物来回收水性茴香香桃木提取物。随后，水性提取物可以进一步(i)通过添加ph调节剂、稳定剂或化妆品可接受的媒介物或支持物来配制；(ii)浓缩；和/或(iii)干燥。

22、本发明的茴香香桃木提取物含有约0.01％及更高的干物质含量，优选约0.02％至约50％，更优选约0.05％至约10％，甚至更优选约0.1％至约5％。除非另有说明，百分比(％)均按重量计算。

23、术语“水性提取物”应理解为根据本发明的公开的茴香香桃木提取物的水基制备物。

24、术语“一”或“一个”应理解为一个或多个。

25、术语“有效量”应理解为所使用的茴香香桃木提取物的量，其中茴香香桃木提取物预防、治疗或降低头皮或皮肤炎症，促进头皮或皮肤上的炎症消退和组织再生，或改善头发和头皮病况。更具体地，在本发明中，有效量的茴香香桃木提取物可以改善头发和头皮病况，如头皮屑、头皮瘙痒、头皮刺激、头皮上的肿块、油性头发和/或头皮、暗淡和不健康的头发或它们的组合。

26、有效量可能因病况的严重程度和持续时间等多种因素而异。可以使用提供任意程度的头发和头皮病况改善的任意量和任意时间长度的茴香香桃木提取物治疗。

27、在某些实施方案中，茴香香桃木提取物的有效量范围为按重量计算约0.01％至约20％，优选按重量计算约0.05％至约10％，更优选按重量计算约0.1％至约5％。

28、术语“消费品组合物”应理解为含有茴香香桃木提取物的组合物，其中该组合物预防、治疗或降低炎症，促进头皮或皮肤上的炎症消退和组织再生，或改善头发和头皮病况。本发明的消费品组合物可以含有按消费品组合物的重量计算约10％至约50％，并且优选约20％至约40％的水平的茴香香桃木提取物。还可以将另外的材料与消费品组合物结合使用以包封和/或提供抗炎和促炎症消退作用。一些众所周知的材料例如但不限于聚合物、低聚物、其他非聚合物(如表面活性剂、乳化剂、脂质(包括脂肪、蜡和磷脂)、有机油、矿物油、凡士林、天然油、香水定香剂、纤维、淀粉、糖和固体表面材料(如沸石和二氧化硅)。一些优选的聚合物包括聚丙烯酸酯、聚脲、聚氨酯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚醚、聚酰胺、聚(丙烯酸酯-共-丙烯酰胺)、淀粉、二氧化硅、明胶和阿拉伯胶、海藻酸盐、壳聚糖、聚乳酸、聚(三聚氰胺-甲醛)、聚(脲-甲醛)或它们的组合。

29、术语“消费品”应理解为含有茴香香桃木提取物的产品，其中该产品具有预防、治疗或降低炎症或促进炎症消退和组织再生的抗炎和促炎症消退特性。本发明的消费品可以包括，例如，但不限于条皂、液体皂、沐浴露、泡沫浴、护肤水、润肤乳、面霜、乳液、精华液、软膏、香脂、药膏、凝胶、霜状凝胶、乳剂、泡沫、喷雾、眼影、棒、唇膏、光泽剂、家庭用产品(fam)、除臭剂、滋润面膜、去角质产品和头发或头皮护理产品。本发明的头发或头皮护理产品包括，例如，但不限于洗发剂、染发液、护发素、头发漂白剂、染色剂、染发剂和头发造型产品。

30、以下提供本发明的具体实施方案。本领域技术人员很容易理解本发明的其他修改。这些修改应理解为在本发明的范围内。除非另有说明，材料均从aldrich chemicalcompany购买。如本文所用，除非另有说明，所有百分比均为重量百分比，l应理解为升，ml应理解为毫升，g应理解为克，ng应理解为纳克，m应理解为摩尔，μm应理解为微摩尔。实施例中使用的iff应理解为国际香精香料公司，纽约，ny，usa。

31、实施例i：测试样品的制备

32、根据本领域已知的方法，例如wo2018/073714a1中的方法，用茴香香桃木叶子进行煎煮制备水性茴香香桃木提取物。然后将甘油添加到水性提取物中以提供水醇混合物，其中甘油与水性提取物的重量比为70:30。

33、获得的茴香香桃木提取物包含约1％的干物质含量。

34、实施例ii：白细胞介素-8(il-8)产生的抑制

35、il-8是有效的中性粒细胞化学引诱物。il-8表达的增加与炎症过程有关。在人毛囊真皮乳头细胞和正常人真皮成纤维细胞中评估了茴香香桃木提取物(实施例i中制备的)对il-8的产生的影响，其中il-8的产生是通过添加il-1α来诱导的。

36、细胞培养和处理：根据标准规程培养人毛囊真皮乳头细胞(hfdpc)(promocell)和正常人真皮成纤维细胞(nhdf)细胞(promocell)。用il-1α(0.002ng/ml)处理细胞并在不同浓度的茴香香桃木提取物存在下孵育24小时。未经处理的细胞(“未处理”)或用il-1α处理但没有用茴香香桃木提取物处理的细胞(“对照”)作为对照样品。

37、细胞活力测定：孵育结束时，使用celltiteraqueous mts试剂粉末(promega)进行细胞活力测定以确定茴香香桃木提取物的细胞毒性作用(如果有的话)。观察到茴香香桃木提取物处理的样品和对照样品之间的细胞活力没有显著差异。因此，茴香香桃木提取物对人毛囊真皮乳头细胞及正常人真皮成纤维细胞无细胞毒性作用。

38、il-8产生：使用elisa(酶联免疫吸附测定)对il-8水平进行定量。测量吸光度值，并将il-8水平的分数报告为经过处理的样品相对于对照样品的吸光度值的百分比。平均il-8分数的结果报告如下：

39、

40、*所有经过处理的样品(“茴香香桃木提取物”)与对照样品(“对照”)相比显示出显著差异(p<0.001)。

41、茴香香桃木提取物显著降低hfdpc和nhdf细胞中的il-8水平(配对学生t检验中p<0.001)。此外，其对il-8产生的抑制在hfdpc中出人意料地优越。因此，茴香香桃木提取物的抗炎特性具有细胞类型选择性。这样的发现是不可预测的。

42、实施例iii：活性氧(ros)产生的抑制

43、活性氧(ros)是由参与宿主防御应答的细胞产生的。ros既是信号分子也是炎症介质。在人毛囊真皮乳头细胞中评估了茴香香桃木提取物(实施例i中制备的)对ros的产生的影响，其中ros的产生是通过添加绿脓菌素来诱导的。

44、细胞培养和治疗：根据标准规程培养人毛囊真皮乳头细胞。用茴香香桃木提取物(实施例i中制备的)处理30分钟，然后添加100μm绿脓菌素(sigma-aldrich corp.)来处理细胞。将细胞再孵育2小时。未用茴香香桃木提取物处理的细胞(“对照”)作为对照样品。

45、ros产生：通过荧光染色然后进行定量分析来测量ros的产生。ros产生的分数表示为处理样品相对于对照样品的荧光强度百分比。平均ros产生分数的结果报告如下：

46、

47、*所有经过处理的样品(“茴香香桃木提取物”)与对照样品(“对照”)相比显示出显著差异(p<0.001)。

48、茴香香桃木提取物显著降低了hfdpc中的ros产生(配对学生t检验中p<0.001)。

49、实施例iv：离体研究中皮脂腺体积的减小

50、皮脂腺负责皮脂的产生。皮脂过量产生可能导致炎症事件。在本发明中，离体研究了茴香香桃木提取物对皮脂腺大小的影响。

51、头皮外植体和处理：根据本领域技术人员已知的方法(例如wo2020/157428a1)建立并维持人头皮外植体。在第0、2、5和7天，将茴香香桃木提取物(2％，实施例i中制备的)和安慰剂(甘油)分别外部应用在相应的头皮外植体上。在第0天(“对照”)和第8天，收集来自每个处理的头皮外植体样品，并在福尔马林中固定。

52、皮脂腺体积：根据本领域技术人员已知的方法(bailly et al.,sci rep.(2018),8(1):14003)，使用x射线微断层扫描测量皮脂腺的体积。每个腺体的平均叶体积结果报告如下：

53、

54、*经过处理的样品(“茴香香桃木提取物”)与对照样品(“对照”)相比显示出显著差异(p<0.01)。

55、在离体研究中茴香香桃木提取物显著减小皮脂腺的体积/大小(配对学生t检验中p<0.01)。

56、实施例v：对另外的炎症相关蛋白的产生的影响

57、前列腺素e2(pge2)是有力的炎症介质。白三烯b4(ltb4)是参与炎症的白三烯。评估了茴香香桃木提取物(实施例i中制备的)对il-1α、il-8、pge2、ltb4和包括脂氧素b4(lxb4)、消退素d1(rvd1)和消退素d2(rvd2)在内的特异性促炎症消退脂质介质(spm)的水平的体内影响。

58、测试样品的制备：基于申请人的专有配方制备含有2％的茴香香桃木提取物(实施例i中制备的)的洗发水，用于评估茴香香桃木提取物对il-1α、il-8、pge2、ltb4和包括脂氧素b4(lxb4)、消退素d1(rvd1)和消退素d2(rvd2)在内的spm的产生的影响。在对照样品中，使用甘油和水混合物(甘油和水的重量比为70:30)的安慰剂代替茴香香桃木提取物。

59、测试程序：40名18-40岁患有油性头发和头皮屑的病况的志愿者被随机分成两组，每组20人，治疗组每隔一天用含有茴香香桃木提取物的洗发水处理，或对照组每隔一天用含有安慰剂的洗发水处理。治疗持续28天。第28天，收集安慰剂和茴香香桃木组的皮脂。

60、皮脂样品和蛋白质定量：从已经用茴香香桃木提取物或安慰剂处理28天的头皮收集皮脂样品。使用本领域技术人员已知的方法(例如，le faouder p.et al.,j chromatogrb analyt technol biomed life sci.(2013),922:123-133)处理样品并定量上述蛋白质。蛋白质水平的分数分别报告为治疗的样品相对于对照样品的百分比。结果报告如下：

61、 蛋白质 水平 il-1a 8 il-8 52 pge2 61 ltb4 56 lxb4 198 rvd1 162 rvd2 172

62、茴香香桃木提取物显著降低了包括il-1α、il-8、pge2、ltb4在内的促炎症蛋白的产生，但是显著提高了包括脂氧素b4(lxb4)、消退素d1(rvd1)和消退素d2(rvd2)在内的spm的产生。

63、实施例vi：头发和头皮病况的改善

64、不健康的头皮可能会表现出各种异常的生物物理特性，如头皮ph失衡、经表皮水分流失(tewl)增加、皮脂产生增加、头皮屑病况和头发失去光泽。评估了茴香香桃木提取物(实施例i中制备的)对头发和头皮的这些生物物理特性的影响。

65、测试样品和测试程序与实施例v中描述的那些相同。根据本领域技术人员已知的方法测量参数，包括(i)ph((liu et al.,j cosmet dermatol.(2022),00:1-10)；(ii)经表皮水分流失(khosrowpour et al.,jcosmet dermatol.(2019)18:857-861)；(iii)皮脂水平(rajaiah yogesh h.et al.,j cosmet dermatol.(2021),00:1-10)；(iv)头皮屑的存在(cavusoglu et al.,arch dermatol res.(2016)308:631-642)；和(v)头发光泽(li etal.,sci.reports,(2017)7:18046)。每个测量结果都报告为第28天治疗的样品相对于第0天样品或第28天安慰剂样品的百分比。

66、治疗的样品中第28天相对于第0天的结果报告如下：

67、

68、治疗的样品(“茴香香桃木提取物”)与对照样品(“对照”)相比显示出显著差异(*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001)。

69、第28天治疗的样品相对于安慰剂样品的结果报告如下：

70、

71、

72、治疗的样品(“茴香香桃木提取物”)与安慰剂样品相比显示出显著差异(*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001)。