多特异性构建体及其用途的制作方法

本技术涉及多特异性分子，例如抗cldn6/抗4-1bb双特异性抗体，及其用途，包括治疗疾病或病症。

背景技术：

1、claudin是形成细胞紧密连接的重要组分的一类蛋白质。claudin-6(cldn6)是参与紧密连接形成的一种四跨膜蛋白。在成人正常组织中，cldn6 mrna和蛋白不存在。另一方面，在多种人实体癌(如睾丸癌、卵巢癌、子宫癌和肺腺癌)中频繁检测到高cldn6转录本水平。据报道，与mrna水平一致，cldn6蛋白在这些人癌症中是高且均一的。

2、4-1bb(cd137，肿瘤坏死因子受体超家族9)是tnf受体超家族(tnfrsf)的成员，且是一种共刺激分子，其在免疫细胞(先天免疫细胞和适应性免疫细胞)激活后表达。4-1bb在调节各种免疫细胞的活性方面起着重要作用。4-1bb激动剂增强免疫细胞增殖、存活、细胞因子分泌和cd8 t细胞的细胞溶解活性。诸多其他研究表明，激活4-1bb会增强免疫反应以消除小鼠的肿瘤。因此，表明了4-1bb在癌症免疫学中是有前景的靶标分子。

3、本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公布专利申请的公开内容均通过引用全文并入本文。

技术实现思路

1、在一方面，本文提供了多特异性构建体，其包含：与肿瘤抗原特异性结合的第一抗体部分；和与4-1bb特异性结合的第二抗体部分，其中所述第一抗体部分与所述肿瘤抗原的结合触发所述第二抗体部分激活4-1bb。在一些实施方案中，第二抗体部分与4-1bb的crd3/4区域特异性结合。

2、在一些实施方案中，本文提供了多特异性构建体，其包含与肿瘤抗原特异性结合的第一抗体部分；和与4-1bb特异性结合的第二抗体部分，其中所述第一抗体部分与所述肿瘤抗原的结合触发所述第二抗体部分激活4-1bb。在一些实施方案中，在第一抗体部分与肿瘤抗原结合后，第二抗体部分对4-1bb的激活增强至少约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍或1000倍中的任一种，包括这些值之间的任何范围。在一些实施方案中，在不与肿瘤抗原结合的情况下，多特异性构建体确实激活了4-1bb信号传导。在一些实施方案中，在不与肿瘤抗原结合的情况下，第二部分不激活4-1bb信号传导。

3、在一些实施方案中，提供了多特异性构建体，其包含a)与claudin-6(“cldn6”)特异性结合的第一抗体部分；和b)与4-1bb特异性结合的第二抗体部分。在一些实施方案中，第一抗体部分包含全长抗体，所述全长抗体包含两条重链和两条轻链。

4、本文提供了多特异性构建体，其包含：(1)与claudin-6(“cldn6”)特异性结合的第一抗体部分；和(2)与4-1bb特异性结合的第二抗体部分。

5、在一些实施方案中，第一抗体部分选自全长抗体、fab、fab'、f(ab’)2、scfv和sdab。在一些实施方案中，其中所述第一抗体部分包含：(1)hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其在重链可变区(vh)内分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述重链可变区包含seqid no：7中所示的序列；和(2)lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其在轻链可变区(vl)内分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seq id no：8中所示的序列。在一些实施方案中，第一抗体部分包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中：(a)所述vh包含：(i)hc-cdr1，其包含seq id no：1的氨基酸序列，(ii)hc-cdr2，其包含seq id no：2的氨基酸序列，和(iii)hc-cdr3，其包含seq id no：3的氨基酸序列，并且(b)所述vl包含：(i)lc-cdr1，其包含seq id no：4的氨基酸序列，(ii)lc-cdr2，其包含seq id no：5的氨基酸序列，和(iii)lc-cdr3，其包含seq id no：6的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一抗体部分包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，并且其中：(1)所述vh包含seq id no：7的氨基酸序列或其变体，所述变体与seq id no：7包含至少约80％的序列同一性；和/或(2)所述vl包含seq id no：8的氨基酸序列或其变体，所述变体与seq id no：8包含至少约80％的序列同一性。在一些实施方案中，第一抗体部分包含：(1)hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其在重链可变区(vh)内分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述重链可变区包含seq id no：18中所示的序列；和(2)lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其在轻链可变区(vl)内分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seq id no：19中所示的序列。在一些实施方案中，第一抗体部分包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中：(1)所述vh包含：(i)hc-cdr1，其包含seq id no：12的氨基酸序列，(ii)hc-cdr2，其包含seq id no：13的氨基酸序列，和(iii)hc-cdr3，其包含seq id no：14的氨基酸序列，并且(2)所述vl包含：(i)lc-cdr1，其包含seq id no：15的氨基酸序列，(ii)lc-cdr2，其包含seq id no：16的氨基酸序列，和(iii)lc-cdr3，其包含seq id no：17的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一抗体部分包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，并且其中：(1)所述vh包含seq id no：18的氨基酸序列或其变体，所述变体与seq id no：18具有至少约80％的序列同一性；和/或(2)所述vl包含seq id no：19的氨基酸序列或其变体，所述变体与seq id no：19具有至少约80％的序列同一性。在一些实施方案中，第一抗体部分与cldn6的结合触发第二抗体部分激活4-1bb。

6、在一些实施方案中，所述第二抗体部分与4-1bb的crd 3/4区域特异性结合。在一些实施方案中，第二抗体部分选自全长抗体、fab、fab'、f(ab’)2、scfv和sdab。在一些实施方案中，第二抗体部分是sdab。在一些实施方案中，sdab在单个单体可变抗体结构域内包含sdab-cdr1、sdab-cdr2和sdab-cdr3，其分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述单个单体可变抗体结构域包含seq id no：27中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，sdab包含：(1)sdab-cdr1，其包含seq id no：24的氨基酸序列；(2)sdab-cdr2，其包含seq id no：25的氨基酸序列；和(3)sdab-cdr3，其包含seq id no：26的氨基酸序列。在一些实施方案中，第二抗体部分包括seq id no：27的氨基酸序列或其变体，所述变体与seq id no：27具有至少约80％的序列同一性。

7、在一些实施方案中，多特异性构建体是双特异性抗体或双特异性结合片段。在一些实施方案中，(1)第一抗体部分包含：(a)hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其在重链可变区(vh)内分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述重链可变区包含seq id no：7中所示的序列；(b)lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其在轻链可变区(vl)内分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seq id no：8中所示的序列，并且(2)第二抗体部分在单个单体可变抗体结构域内包含sdab-cdr1、sdab-cdr2和sdab cdr3，其分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述单个单体可变抗体结构域包含seq id no：27中所示的氨基酸序列。

8、在一些实施方案中，提供了药物组合物，其包含本文所述的多特异性构建体和药物可接受的载体。

9、在一些实施方案中，提供了核酸，其编码本文所述的多特异性构建体。在一些实施方案中，提供了载体，其包含这种核酸。在一些实施方案中，提供了宿主细胞，其包含这种核酸或这种载体。

10、本文还提供了治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的本文所述的多特异性构建体或本文所述的药物组合物。本文还提供了本文所述的多特异性构建体在制备用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的药物中的用途。在一些实施方案中，疾病或病症是癌症。

11、在一些实施方案中，提供了多特异性构建体，其包含：(1)与肿瘤抗原特异性结合的第一抗体部分；和(2)与4-1bb特异性结合的第二抗体部分，其中所述第一抗体部分与所述肿瘤抗原的结合触发所述第二抗体部分激活4-1bb。在一些实施方案中，在第一抗体部分与肿瘤抗原结合后，第二抗体部分对4-1bb的激活增强至少10倍。在一些实施方案中，所述第二抗体部分与4-1bb的crd 3/4区域特异性结合。在一些实施方案中，第二抗体部分是sdab。在一些实施方案中，sdab在单个单体可变抗体结构域内包含sdab-cdr1、sdab-cdr2和sdab-cdr3，其分别包含cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列，所述单个单体可变抗体结构域包含seq id no：27中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，sdab包含：(1)sdab-cdr1，其包含seq id no：24的氨基酸序列；(2)sdab-cdr2，其包含seq id no：25的氨基酸序列；和(3)sdab-cdr3，其包含seq id no：26的氨基酸序列。在一些实施方案中，肿瘤抗原是cldn6。

12、本文还提供了多特异性构建体，其包含两个重链组分和两个轻链组分，其中：(a)每个重链组分包含seq id no：28和/或seq id no：44中所示的序列，并且每个轻链组分包含seq id no：29中所示的序列；(b)每个重链组分包含seq id no：30中所示的序列，并且每个轻链组分包含seq id no：31中所示的序列；(c)每个重链组分包含seq id no：32中所示的序列，并且每个轻链组分包含seq id no：33中所示的序列；(d)每个重链组分包含seq idno：34中所示的序列，并且每个轻链组分包含seq id no：35中所示的序列；(e)每个重链组分包含seq id no：36中所示的序列，并且每个轻链组分包含seq id no：37中所示的序列；或(f)每个重链组分包含seq id no：38中所示的序列，并且每个轻链组分包含seq id no：39中所示的序列。

13、本技术提供了试剂盒，其包含本文所述的多特异性构建体和/或本文所述的药物以及包装附页或说明书，其用于使用所述多特异性构建体(或药物组合物)治疗疾病或病症(例如癌症)。

14、将理解的是，本文所述的各种实施方案中的一种、一些或全部特性可以被组合以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员将变得显而易见。本发明的这些和其他实施方案通过下面的详细描述作进一步描述。