一种RVG29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶及其制备方法和应用

本发明涉及一种rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶及其制备方法和应用，属于医药领域。

背景技术：

1、帕金森病(pakinson’s disease,pd)也常被称为“震颤麻痹”，是一种神经系统退行性疾病。这个疾病的主要原因是由于黑质多巴胺能神经元的退化和死亡，与遗传、环境因素及神经系统老化等多种因素有关。已成为继肿瘤、心脑血管病后，严重危害老年人健康的疾病。pd属于中枢神经系统疾病，但血脑屏障的存在限制了大多数药物入脑发挥疗效。近年来的研究发现，药物鼻腔给药后可避开血脑屏障沿嗅通路和三叉神经通路直接转运入脑，为药物治疗pd提供了新的递送策略。然而，鼻纤毛的快速清除和鼻黏膜的低通透性极大降低了鼻内药物传递。此外，药物经鼻入脑后分布无选择性，难以在黑质多巴胺能神经元蓄积，且易损伤正常脑组织。

2、雷公藤红素(celastrol,clt)是从雷公藤属植物中分离得到的五环三萜类单体化合物，研究发现clt除了具有抗炎和抗氧化活性外，还具有显著的神经保护功能。但clt水溶性差、生物利用度低，容易产生全身性毒副作用等问题，极大地限制了其临床应用。

3、本发明以clt为模型药物，以多肽rvg29修饰雷公藤红素得到的传递体(rvg29-tfs)载入脱乙酰结冷胶(dgg)，得到凝胶制剂，通过鼻腔给药途径，凝胶制剂黏附于鼻嗅区黏膜表面，可增加难溶性药物溶解度，提高药物生物利用度，并减缓鼻腔的清除，同时可高效的实现主动靶向入胞，提高“鼻-脑”转运效率。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提供一种rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶及其制备方法和应用。制备得到的rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶可增加难溶性药物溶解度，提高药物生物利用度，且可响应鼻粘液的阳离子环境发生相变，黏附于鼻黏膜表面，延长传递体的鼻腔滞留时间。随后，传递体从凝胶中扩散并借助自身的膜融合作用和变形穿透作用跨膜入脑，进而在rvg29靶向肽的介导下，被多巴胺能神经元高效摄取发挥药效。

2、本发明的技术方案：

3、一种rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶，所述鼻用原位凝胶是由rvg29肽修饰雷公藤红素传递体和脱乙酰结冷胶溶液制备而成；

4、所述rvg29肽修饰雷公藤红素传递体是由雷公藤红素2.5-4.5份、大豆磷脂30-70份、胆固醇6-20份、mpeg2000-dspe 5-15份、mpeg2000-dspe-rvg29 10-28份和脱氧胆酸钠4-12份制成；

5、所述脱乙酰结冷胶溶液的浓度为0.6-1.4％，溶剂为蒸馏水；

6、所述rvg29肽修饰雷公藤红素传递体和脱乙酰结冷胶溶液的体积比为0.8-1.2:0.8-1.2。

7、前述鼻用原位凝胶是由rvg29肽修饰雷公藤红素传递体和脱乙酰结冷胶溶液制备而成；

8、前述rvg29肽修饰雷公藤红素传递体是由雷公藤红素3-4份、大豆磷脂40-60份、胆固醇10-15份、mpeg2000-dspe 8-12份、mpeg2000-dspe-rvg29 15-20份和脱氧胆酸钠6-10份制成；

9、前述脱乙酰结冷胶溶液的浓度为0.8-1.2％，溶剂为蒸馏水；

10、前述rvg29肽修饰雷公藤红素传递体和脱乙酰结冷胶溶液的体积比为0.9-1.1:0.9-1.1。

11、具体的说，前述鼻用原位凝胶是由rvg29肽修饰雷公藤红素传递体和脱乙酰结冷胶溶液制备而成；

12、具体的说，前述rvg29肽修饰雷公藤红素传递体是由雷公藤红素3.5份、大豆磷脂50份、胆固醇13份、mpeg2000-dspe 10份、mpeg2000-dspe-rvg29 18份和脱氧胆酸钠8份制成；

13、具体的说，前述脱乙酰结冷胶溶液的浓度为1.0％，溶剂为蒸馏水；

14、具体的说，前述rvg29肽修饰雷公藤红素传递体和脱乙酰结冷胶溶液的体积比为1:1。

15、前述的rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶的制备方法按照以下具体步骤进行：

16、(1)脂质薄膜的制备：按照比例称取2.5-4.5mg雷公藤红素、30-70mg大豆磷脂、6-20mg胆固醇、5-15mg mpeg2000-dspe、10-28mg mpeg2000-dspe-rvg29和4-12mg脱氧胆酸钠溶于3-7ml二氯甲烷，在35-39℃水浴下，30rpm旋转蒸发除去二氯甲烷后，得到均匀的脂质薄膜；

17、(2)rvg29肽修饰雷公藤红素传递体的制备：取脂质薄膜加入5-15ml蒸馏水，于50-70℃恒温振荡器100rpm条件下水化20-40min，按照每超声3-7s，暂停3-7s的方法进行冰浴超声2-4min，超声功率为300w，即得rvg29-clt-tfs；

18、(3)脱乙酰结冷胶溶液的制备：取0.6-1.4g的脱乙酰结冷胶粉末置于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，称重，85-95℃恒温磁力搅拌1.5-2.5h使其完全溶解，冷却至室温，补足蒸馏后，密封，置于3-5℃冰箱充分溶胀22-26h，得脱乙酰结冷胶溶液；

19、(4)rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶的制备：将rvg29-clt-tfs与脱乙酰结冷胶溶液按体积比0.8-1.2:0.8-1.2混合，100rpm搅拌均匀，得橙黄色的rvg29-clt-tfs/dgg，即得rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶成品。

20、前述制备方法按照以下具体步骤进行：

21、(1)脂质薄膜的制备：按照比例称取3-4mg雷公藤红素、40-60mg大豆磷脂、10-15mg胆固醇、8-12mg mpeg2000-dspe、15-20mg mpeg2000-dspe-rvg29和6-10mg脱氧胆酸钠溶于4-6ml二氯甲烷，在36-38℃水浴下，30rpm旋转蒸发除去二氯甲烷后，得到均匀的脂质薄膜；

22、(2)rvg29肽修饰雷公藤红素传递体的制备：取脂质薄膜加入8-12ml蒸馏水，于55-65℃恒温振荡器100rpm条件下水化25-35min，按照每超声4-6s，暂停4-6s的方法进行冰浴超声2.5-3.5min，超声功率为300w，即得rvg29-clt-tfs；

23、(3)脱乙酰结冷胶溶液的制备：取0.8-1.2g的脱乙酰结冷胶粉末置于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，称重，90℃恒温磁力搅拌2h使其完全溶解，冷却至室温，补足蒸馏后，密封，置于4℃冰箱充分溶胀24h，得脱乙酰结冷胶溶液；

24、(4)rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶的制备：将rvg29-clt-tfs与脱乙酰结冷胶溶液按体积比0.9-1.1:0.9-1.1混合，100rpm搅拌均匀，得橙黄色的rvg29-clt-tfs/dgg，即得rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶成品。

25、具体的说，前述制备方法按照以下具体步骤进行：

26、(1)脂质薄膜的制备：按照比例称取3.5mg雷公藤红素、50mg大豆磷脂、13mg胆固醇、10mg mpeg2000-dspe、18mg mpeg2000-dspe-rvg29和8mg脱氧胆酸钠溶于5ml二氯甲烷，在37℃水浴下，30rpm旋转蒸发除去二氯甲烷后，得到均匀的脂质薄膜；

27、(2)rvg29肽修饰雷公藤红素传递体的制备：取脂质薄膜加入10ml蒸馏水，于60℃恒温振荡器100rpm条件下水化30min，按照每超声5s，暂停5s的方法进行冰浴超声3min，超声功率为300w，即得rvg29-clt-tfs；

28、(3)脱乙酰结冷胶溶液的制备：取1.0g的脱乙酰结冷胶粉末置于烧杯中，加入100ml的蒸馏水，称重，90℃恒温磁力搅拌2h使其完全溶解，冷却至室温，补足蒸馏后，密封，置于4℃冰箱充分溶胀24h，得脱乙酰结冷胶溶液；

29、(4)rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶的制备：将rvg29-clt-tfs与脱乙酰结冷胶溶液按体积比1:1混合，100rpm搅拌均匀，得橙黄色的rvg29-clt-tfs/dgg，即得rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶成品。

30、前述的rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶在制备治疗帕金森药物中的应用。

31、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

32、1.rvg29肽修饰雷公藤红素传递体可增加难溶性药物溶解度，提高药物生物利用度，传递体的包封率和载药量分别为94.22±0.21％和2.31±0.25％。

33、2.rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶的黏度小，能更好地流入鼻腔，进入鼻腔后，rvg29-tfs为水性制剂，在鼻腔易流失,脱乙酰结冷胶(deacetylated gellangum，dgg)为典型的离子敏感型原位凝胶基质，可响应鼻腔环境中的阳离子na+、ka+、ca2+发生相变，由溶液状转变为凝胶状，使得凝胶有效吸附于鼻黏膜上，从而延长药物的经鼻入脑的吸收时间，减缓鼻腔清除。

34、3.由狂犬病毒糖蛋白衍生得到的具有29个氨基酸序列的多肽rvg29，可与achr特异性识别结合。多肽rvg29修饰的传递体(rvg29-tfs)借助自身的高度变形性和渗透性经鼻入脑，并在rvg29肽的介导下，实现多巴胺能神经元的主动鼻腔脑靶向作用。

35、4.凝胶强度居于25-50s之间，既可抵抗鼻纤毛的清除，保护凝胶完整性的同时，实现药物在鼻腔中特定吸收部位的持续释放。

36、5.水分保持能力都高于85％，这种优良的水分保持能力能够保持凝胶在储存或受到外力作用时的稳定性。

37、6.凝胶ph值都介于5.5-7.0，而人体鼻腔粘液的ph值通常在5.5-7.0，可减少对鼻腔黏膜的刺激性，适合于鼻腔用药。

38、综上所述，本发明研发的rvg29肽修饰雷公藤红素传递体鼻用原位凝胶可增加难溶性药物溶解度，提高药物生物利用度，减缓鼻腔的清除。能与多巴胺能神经元高表达乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor，achr)特异性识别的rvg29肽修饰于传递体表面，可有效实现高效主动靶向入胞，提高载体在鼻腔的滞留时间，增加吸收时间和吸收量，提高“鼻-脑”转运效率，针对治疗帕金森疾病。