一种紫檀芪外泌体脂质体、制备方法、应用和化妆品与流程

本发明属于脂质体制备的，尤其涉及一种紫檀芪外泌体脂质体、制备方法、应用和化妆品。

背景技术：

1、紫檀芪是白藜芦醇甲基化的衍生物，属于多酚类化合物，主要存在于檀香、蓝莓、葡萄等植物中，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保护心脑血管系统等生理活性，开发潜力巨大。紫檀芪由于其强大的抗氧化能力，可以淬灭皮肤中的有害自由基，激活细胞自噬，在皮肤抗衰领域具有巨大的应用潜力。要让紫檀芪进入皮肤发挥作用，需要使其顺利穿过皮肤屏障。但其在水中的溶解度仅为0.03mg/ml，且稳定性不佳，在光照和空气中易被氧化，影响其储存加工和生物利用度，因此如何提高紫檀芪的生物利用度和稳定性是关键。

2、外泌体是细胞通过胞吐作用分泌的一种纳米囊泡，广泛存在于体液中，其携带各种生物分子，包括蛋白质、肽、核酸和脂质等。研究表明，干细胞外泌体免疫原性低、含有生长因子、抗炎成分等，不仅能促进敏感肌和衰老肌肤的修复，加快皮肤活力再生，具有抗衰老、免疫调节等多种功能，同时实现再生医学和皮肤医学美容的双重效果。但外泌体由于其制备、提纯和储存要求在化妆品中应用成本较高，且载药量低，难以负载有效剂量的活性物。

3、传统脂质体结构成分与角质层、细胞膜的脂基成分相似，虽提高了其生物相容性，但在透皮过程中容易发生聚集而无法深入皮肤深层，同时结构中的磷脂易氧化而影响稳定性。

技术实现思路

1、本发明的目的就是解决背景技术中的问题，提出一种紫檀芪外泌体脂质体、制备方法、应用和化妆品。

2、为实现上述目的，本发明提出了一种紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，包括以下几个步骤：

3、紫檀芪纳米柔性脂质体的制备：将氢化卵磷脂、紫檀芪、生育酚乙酸酯、gtcc搅拌混合10min～20min形成油相，再将tween-80、甘油、己二醇、水加入油相中，搅拌混匀，高速剪切10min～20min，得到预混液，再将预混液通过高压均质法或超声法或挤出法制备得到紫檀芪纳米柔性脂质体；

4、羊间充质干细胞外泌体的提取和纯化：利用培养基、胰蛋白酶消化液、dpbs培养羊间充质干细胞，按14000/cm2～16000/cm2细胞量传代接种培养，收集羊间充质干细胞培养上清，无菌过滤，再采用peg共沉淀法或超滤浓缩法进行分离纯化，得到羊间充质干细胞外泌体；

5、紫檀芪外泌体脂质体的制备：将紫檀芪纳米柔性脂质体和羊间充质干细胞外泌体搅拌混合，再通过高压均质法或超声法或挤出法或冻干法或共孵育法制备得到紫檀芪外泌体脂质体。

6、作为优选，所述紫檀芪纳米柔性脂质体的制备步骤和紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中的高压均质法均是在高压均质机中进行，且设置压力条件为600bar～1000bar、均质时间为50min～70min，所述紫檀芪纳米柔性脂质体由以下百分比质量的组分制备而成：氢化卵磷脂1％～4％、紫檀芪0.5％～3％、生育酚乙酸酯0.1％～2％、gtcc3％～8％、tween-805％～20％、甘油2％～6％、己二醇0.1％～2％和余量水。

7、作为优选，所述紫檀芪纳米柔性脂质体的制备步骤和紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中的超声法的超声条件为200w、45khz、3son/3soff、20～40min，所述紫檀芪纳米柔性脂质体的制备步骤和紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中的挤出法均是通过脂质体挤出器进行。

8、作为优选，所述peg共沉淀法进行分离纯化具体步骤如下：将分子量为2000-6000的peg、nacl、纯水搅拌溶解，无菌过滤得到peg溶液；将羊间充质干细胞培养上清与peg溶液按体积比为1：1～2混匀，放置于3℃～5℃环境下，沉淀12h～24h；采用dpbs重悬离心收集沉淀，得到羊间充质干细胞外泌体。

9、作为优选，所述超滤浓缩法进行分离纯化具体步骤如下：将羊间充质干细胞培养上清置于超滤管中，而后转移至离心机进行超滤浓缩，离心至超滤管上层液体剩余0.5ml～1ml时即可停止；将上层液体取出转移至无菌离心管中，加入pbs稀释，得到羊间充质干细胞外泌体。

10、作为优选，所述紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中冻干法具体步骤如下：将混匀后的紫檀芪纳米柔性脂质体和羊间充质干细胞外泌体置于西林瓶中，先放置于冰箱进行预冻，而后放置于冻干机内进行冻干48h～72h，冻干后加入等体积dpbs进行复融，得到紫檀芪外泌体脂质体。

11、作为优选，所述紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中共孵育法具体步骤如下：将混匀后的紫檀芪纳米柔性脂质体和羊间充质干细胞外泌体置于离心管中，而后放置于振荡培养箱中，在温度为37℃、转速为200rpm～400rpm、12h～18h条件下混匀，得到紫檀芪外泌体脂质体。

12、本发明还提出了一种根据上述紫檀芪外泌体脂质体的制备方法制备得到的紫檀芪外泌体脂质体。

13、本发明还提出了一种上述紫檀芪外泌体脂质体在皮肤美容领域的应用，尤其是皮肤抗衰方面的应用。

14、本发明还提出了一种化妆品，所述化妆品中含有0.1％～30％含量的上述紫檀芪外泌体脂质体，所述化妆品为精华液或面霜。

15、本发明的有益效果：本发明通过脂质体材料的种类和比例筛选，以及结合膜融合技术，获得适合皮肤抗衰使用的紫檀芪外泌体脂质体，从而实现细胞层面的抗衰效果；该制备方法简单、制备过程无毒无害、成本低廉，制得的紫檀芪外泌体脂质体便于储存，可显著改善紫檀芪和外泌体的皮肤利用效率，充分发挥其功效，制得的紫檀芪外泌体脂质体尺寸均一、分散性良好，融合效率高，易被细胞摄取，兼具柔性脂质体和外泌体的优势。

16、本发明的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。

技术特征：

1.一种紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

2.如权利要求1所述的紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：所述紫檀芪纳米柔性脂质体的制备步骤和紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中的高压均质法均是在高压均质机中进行，且设置压力条件为600bar～1000bar、均质时间为50min～70min，所述紫檀芪纳米柔性脂质体由以下百分比质量的组分制备而成：氢化卵磷脂1％～4％、紫檀芪0.5％～3％、生育酚乙酸酯0.1％～2％、gtcc 3％～8％、tween-805％～20％、甘油2％～6％、己二醇0.1％～2％和余量水。

3.如权利要求1所述的紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：所述紫檀芪纳米柔性脂质体的制备步骤和紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中的超声法的超声条件为200w、45khz、3s on/3s off、20～40min，所述紫檀芪纳米柔性脂质体的制备步骤和紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中的挤出法均是通过脂质体挤出器进行。

4.如权利要求1所述的紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：所述peg共沉淀法进行分离纯化具体步骤如下：将分子量为2000-6000的peg、nacl、纯水搅拌溶解，无菌过滤得到peg溶液；将羊间充质干细胞培养上清与peg溶液按体积比为1：1～2混匀，放置于3℃～5℃环境下，沉淀12h～24h；采用dpbs重悬离心收集沉淀，得到羊间充质干细胞外泌体。

5.如权利要求1所述的紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：所述超滤浓缩法进行分离纯化具体步骤如下：将羊间充质干细胞培养上清置于超滤管中，而后转移至离心机进行超滤浓缩，离心至超滤管上层液体剩余0.5ml～1ml时即可停止；将上层液体取出转移至无菌离心管中，加入pbs稀释，得到羊间充质干细胞外泌体。

6.如权利要求1所述的紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：所述紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中冻干法具体步骤如下：将混匀后的紫檀芪纳米柔性脂质体和羊间充质干细胞外泌体置于西林瓶中，先放置于冰箱进行预冻，而后放置于冻干机内进行冻干48h～72h，冻干后加入等体积dpbs进行复融，得到紫檀芪外泌体脂质体。

7.如权利要求1所述的紫檀芪外泌体脂质体的制备方法，其特征在于：所述紫檀芪外泌体脂质体的制备步骤中共孵育法具体步骤如下：将混匀后的紫檀芪纳米柔性脂质体和羊间充质干细胞外泌体置于离心管中，而后放置于振荡培养箱中，在温度为37℃、转速为200rpm～400rpm、12h～18h条件下混匀，得到紫檀芪外泌体脂质体。

8.一种根据权利要求1至7任一项所述的制备方法制得的紫檀芪外泌体脂质体。

9.一种如权利要求8所述的紫檀芪外泌体脂质体在皮肤美容领域的应用。

10.一种化妆品，其特征在于：所述化妆品中含有0.1％～30％含量的如权利要求8所述的紫檀芪外泌体脂质体，所述化妆品为精华液或面霜。

技术总结本发明公开了一种紫檀芪外泌体脂质体、制备方法、应用和化妆品，制备方法包括以下几个步骤：将氢化卵磷脂、紫檀芪、生育酚乙酸酯、GTCC混合形成油相，再将Tween‑80、甘油、己二醇、水加入油相中搅拌混匀，得到预混液，再将预混液通过高压均质法或超声法或挤出法得到紫檀芪纳米柔性脂质体；培养羊间充质干细胞，收集羊间充质干细胞培养上清，采用PEG共沉淀法或超滤浓缩法分离纯化，得到羊间充质干细胞外泌体；将紫檀芪纳米柔性脂质体和羊间充质干细胞外泌体混合，通过高压均质法或超声法或挤出法或冻干法或共孵育法得到紫檀芪外泌体脂质体，该制备方法简单，制得的紫檀芪外泌体脂质体可显著改善紫檀芪和外泌体的皮肤利用效率，且尺寸均一、分散性良好。技术研发人员：魏娟,陈旻,庞颖,潘莎受保护的技术使用者：杭州配方师科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/13