一种人补体的制备方法及其在血清杀菌试验中的应用与流程

本发明属于生物医药，涉及一种人补体蛋白的制备及其在血清杀菌试验中的应用。背景信息血清杀菌试验(serum bactericidal assays，sba)是体外评价流行性脑脊髓膜炎疫苗的标准方法，由goldschneider等人于1969年建立。该方法需要将待评价免疫血清、人补体和靶菌混合孵育，以菌落计数的方法计算血清50％杀菌滴度。其中免疫血清和靶菌较易获取，但由于多数健康成年人的血清补体筛选较为困难，筛选成功率很低。为了能获得稳定的补体来源，同时降低不同实验室的结果的差异性，幼兔补体被大量用于sba，并在多糖类脑膜炎疫苗的评价中起了重要作用。然而，由于b群脑膜炎球菌的荚膜是唾液酸，与人细胞表面唾液酸具有相似的分子结构，故不能用于制备疫苗。已上市的b群脑膜炎球菌疫苗均采用外膜蛋白来制备，由于以幼兔为补体来源的杀菌滴度远高于人补体，导致疫苗评价结果不准确，故幼兔补体不适于这类疫苗的评价，因此，开发一种可用于sba试验的人补体制备方法是该领域内的迫切需求。

背景技术：

技术实现思路

1、本发明涉及一种人补体蛋白的制备方法。用该方法制备的人补体蛋白能用于体外血清杀菌试验，从而评价b群脑膜炎奈瑟菌疫苗的保护效力。

2、本发明提供所述人补体蛋白的制备方法，将健康人静脉血血清用protein g亲和层析色谱柱或protein g偶联磁珠进行纯化，获得目标补体。

3、本发明健康人静脉血血清的获得可以采用本领域的常规方法，例如将采集后的健康人静脉血，4℃下放置4h后，2000g离心15min，收集血清。

4、本发明采用protein g亲和层析色谱柱进行纯化时，优选的先用0.02m pbs(ph7.0)缓冲液平衡后，再将血清上样，收集流穿峰，此即目标补体。

5、本发明采用protein g偶联磁珠进行纯化时，优选的具体操作为向血清中加入磁珠，冰上振荡孵育25-35min；孵育结束后置于磁力架上，吸取上清至新离心管，即目标补体。

6、磁珠加入量可以按照本领域的常规量。

7、本发明采用protein g偶联磁珠进行纯化时，可重复进行孵育和吸取上清，直至上清中igg残留浓度低于2μg/ml。

8、本发明还提供本发明所述方法制备的人补体蛋白。

9、本发明会提供本发明制备的人补体蛋白在b群脑膜炎球菌体外杀菌试验中的应用。

10、本发明还提供本发明制备的人补体蛋白在评价b群脑膜炎奈瑟菌疫苗的保护效力中的应用。

11、相对于现有技术，本发明具有如下显著优势：

12、①无需从人群中做大规模筛选，即可得到无igg的人补体，降低试验成本；

13、②操作工艺简单，简单纯化即可得到符合要求的产物；

14、③得到的人补体无本底杀菌活性，能对b群流脑疫苗进行客观准确的评价。

技术特征：

1.一种从人血清中制备补体方法，其特征在于，将健康人静脉血血清用proteing亲和层析色谱柱或protein g偶联磁珠进行纯化，获得目标补体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，健康人静脉血血清的获得为将采集后的健康人静脉血，4℃下放置4h后，2000g离心15min，收集血清。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用protein g亲和层析色谱柱进行纯化时，先用ph7.0的0.02m pbs缓冲液平衡后，再将血清上样，收集流穿峰，此即目标补体。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用protein g偶联磁珠进行纯化时，向血清中加入磁珠，冰上振荡孵育25-35min；孵育结束后置于磁力架上，吸取上清至新离心管，即目标补体。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用protein g偶联磁珠进行纯化时，重复进行孵育和吸取上清，直至上清中igg残留浓度低于2μg/ml。

6.权利要求1～5任一项所述方法制备的人补体蛋白。

7.权利要求6所述的人补体蛋白在b群脑膜炎球菌体外杀菌试验中的应用。

8.权利要求6所述的人补体蛋白在评价b群脑膜炎奈瑟菌疫苗的保护效力中的应用。

技术总结本发明公开一种人补体的制备方法及其在血清杀菌试验中的应用，将健康人静脉血血清用Protein G亲和层析色谱柱或Protein G偶联磁珠进行纯化，获得目标补体，用该方法制备的人补体蛋白能用于体外血清杀菌试验，从而评价B群脑膜炎奈瑟菌疫苗的保护效力。技术研发人员：陈凯,王丽洁,乌日尼勒,高正伦受保护的技术使用者：北京先声祥瑞生物制品股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/18