组织体的制造方法和来自人的脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化促进方法与流程

本发明涉及组织体的制造方法和来自人的脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化促进方法。

背景技术：

1、作为人工制作模仿生物体组织的结构体的方法，例如已知有下述方法等：一种制造三维组织体的方法(专利文献1)，其包含三维地配置由含有胶原蛋白的被膜涂敷的细胞、形成三维组织体的工序；一种立体性细胞组织的制造方法(专利文献2)，其包含将细胞与阳离子性物质和细胞外基质成分混合而得到混合物，从得到的混合物收集细胞，在基材上形成细胞集合体的工序。另外，本发明者们还提出了下述方法(专利文献3)：通过使细胞与经片段化的外源性胶原蛋白接触，以较少的细胞数制造厚度为1mm以上的尺寸大的三维组织体。

2、现有技术文献

3、专利文献

4、专利文献1：国际公开第2015/072164号

5、专利文献2：国际公开第2017/146124号

6、专利文献3：国际公开第2018/143286号

技术实现思路

1、发明所要解决的课题

2、根据上述制造方法，能够得到作为通过细胞培养而人工制作的细胞的集合体的组织体。特别是，包含血管内皮细胞的组织体期待用作实验动物的替代品、移植材料等。在此，在人工制造组织体时，虽然大多使用以牛等其他生物种类为来源的脂肪来源干细胞、虽同是人但从不同个体采集的同种异体的细胞等，但例如在制造移植到人的移植材料时，设想使用该人的自体细胞来制造移植材料。因此，特别是在使用来自人的脂肪来源干细胞制造组织体时，期望有促进该脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化的方法。

3、本发明是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供一种在包含血管内皮细胞的组织体的制造中促进来自人的脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化的方法。

4、用于解决课题的手段

5、本发明者们反复进行了深入研究，结果发现，通过将来自人的脂肪来源干细胞在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育，脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化得到促进，从而完成了本发明。

6、即，本发明例如包含以下的发明。

7、[1]

8、一种包含血管内皮细胞的组织体的制造方法，其包含将至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

9、[2]

10、根据[1]所述的方法，其中，至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞不包含血管内皮细胞。

11、[3]

12、根据[1]或[2]所述的制造方法，其中，在上述tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育是在含有上述tgfβ型i受体抑制剂的培养基中进行孵育，培养基中的上述tgfβ型i受体抑制剂的含量为1μm以上且10μm以下。

13、[4]

14、根据[1]～[3]中任一项所述的制造方法，其中，孵育进行96小时以上且288小时以下。

15、[5]

16、根据[1]～[4]中任一项所述的制造方法，其包含将上述细胞与片段化细胞外基质成分一起在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

17、[6]

18、根据[5]所述的制造方法，其中，在上述组织体中，上述片段化细胞外基质成分配置于上述细胞彼此的间隙中。

19、[7]

20、根据[5]或[6]所述的制造方法，其中，上述片段化细胞外基质成分为片段化胶原蛋白成分。

21、[8]

22、根据[5]～[7]中任一项所述的制造方法，其进一步包含在孵育前、在水性介质中使上述细胞与上述片段化细胞外基质成分接触的工序。

23、[9]

24、一种脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化促进方法，其包含将至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

25、[10]

26、根据[9]所述的方法，其中，在上述tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育是在含有上述tgfβ型i受体抑制剂的培养基中进行孵育，培养基中的上述tgfβ型i受体抑制剂的含量为1μm以上且10μm以下。

27、[11]

28、根据[9]或[10]所述的方法，其中，孵育进行96小时以上且288小时以下。

29、[12]

30、根据[9]～[11]中任一项所述的方法，其包含将至少包含脂肪来源干细胞的细胞与片段化细胞外基质成分一起在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

31、[13]

32、根据[12]所述的方法，其中，上述片段化细胞外基质成分为片段化胶原蛋白成分。

33、[14]

34、根据[12]或[13]所述的方法，其进一步包含在孵育前、在水性介质中使上述细胞与上述片段化细胞外基质成分接触的工序。

35、发明效果

36、根据本发明，来自人的脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化得到促进。通过促进向血管内皮细胞的分化，能够在短时间内制造包含血管内皮细胞的组织体。

技术特征：

1.一种包含血管内皮细胞的组织体的制造方法，其包含将至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞不包含血管内皮细胞。

3.根据权利要求1所述的制造方法，其中，在所述tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育是在含有所述tgfβ型i受体抑制剂的培养基中进行孵育，培养基中的所述tgfβ型i受体抑制剂的含量为1μm以上且10μm以下。

4.根据权利要求1所述的制造方法，其中，孵育进行96小时以上且288小时以下。

5.根据权利要求1所述的制造方法，其包含将所述细胞与片段化细胞外基质成分一起在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

6.根据权利要求5所述的制造方法，其中，在所述组织体中，所述片段化细胞外基质成分配置于所述细胞彼此的间隙中。

7.根据权利要求5所述的制造方法，其中，所述片段化细胞外基质成分为片段化胶原蛋白成分。

8.根据权利要求5～7中任一项所述的制造方法，其进一步包含在孵育前、在水性介质中使所述细胞与所述片段化细胞外基质成分接触的工序。

9.一种脂肪来源干细胞向血管内皮细胞的分化促进方法，其包含将至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，在所述tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育是在含有所述tgfβ型i受体抑制剂的培养基中进行孵育，培养基中的所述tgfβ型i受体抑制剂的含量为1μm以上且10μm以下。

11.根据权利要求9所述的方法，其中，孵育进行96小时以上且288小时以下。

12.根据权利要求9所述的方法，其包含将至少包含脂肪来源干细胞的细胞与片段化细胞外基质成分一起在tgfβ型i受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述片段化细胞外基质成分为片段化胶原蛋白成分。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其进一步包含在孵育前、在水性介质中使所述细胞与所述片段化细胞外基质成分接触的工序。

技术总结本发明涉及一种包含血管内皮细胞的组织体的制造方法，其包含将至少包含来自人的脂肪来源干细胞的细胞在TGFβ型I受体抑制剂的存在下进行孵育的工序。技术研发人员：北野史朗,松崎典弥,F·路易斯,素轮善弘受保护的技术使用者：凸版控股株式会社技术研发日：技术公布日：2024/6/18