一种蒲公英复合肽和制备方法及其用途与流程

本发明涉及中医药，具体涉及一种蒲公英复合肽和制备方法及其用途。

背景技术：

1、蒲公英，性味甘，微苦，寒，归肝、胃经，有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效。蒲公英可治热毒、痈肿、疮疡、内痈、目赤肿痛、湿热、黄疸、小便淋沥涩痛、疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，牙痛，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛，急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒疮肿，急性结膜炎，感冒发热，急性扁桃体炎，急性支气管炎，胃炎，肝炎，胆囊炎，尿路感染等。蒲公英可生吃、炒食、做汤，是药食兼用的植物。蒲公英植物体中含有维生素a、蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖、维生素c及钾，也含有铁、钙、维生素b2、维生素b1、镁、维生素b6、叶酸及铜等多种健康营养成分。蒲公英具体的元素含量主要是水分，每60克生蒲公英叶含水分86％，蛋白质1.6克，碳水化合物5.3克，热量约有108.8千焦。

2、常规的蒲公英食用方法，主要是泡水、蒸煮饮用或粉碎食用，而现代提取工艺有几千年的历史，主要方法是“分离-筛选中药有效成分”，采用溶剂提取，分为水提、亲水性有机溶剂(如乙醇、甲醇等)提取、亲脂性有机溶剂(氯仿、乙醚等)提取。中国科学院院士王夔院士提出：“常规中药提取物很多实际上是直接作用物的前药，药物在体内的代谢和转化无处不在；中药的活性和毒性往往是代谢产物的表现；中药复方中各个成分间的相互作用都与代谢有关。”北京大学药学院杨秀伟教授，在1995年起率先在国内开展了适合中药特点的“中药成分的人肠内菌生物转化研究”，建立了系统性的中药吸收、分布、代谢、排泄、毒性与药效(admet/act.)研究平台，展开了中药实验医学研究中的关键基础科学问题--从肠内细菌生物转化确定中药有效和有毒化学成分。

3、生物膜的双层脂质结构是药物进入细胞的主要障碍，而肽是突破生物膜障碍向细胞输送物质的较理想方法。小肽能够内在化进入活细胞，达到细胞质和细胞器，并具有药理学活性，瑞典科学家郎格尔称小肽为‘细胞穿透肽’。中国军事医学科学院中国科学院院士，孙曼霁院士提出：在细胞内出现故障时，具有修理能力的蛋白质和核酸等大分子物质，难以进入细胞内并达到有效的浓度，而细胞穿透肽，可以有效的将其他物质转运至细胞内，而其本身具有生物学功能。

4、然而，目前的蒲公英常规提取方法都忽视了对蒲公英中的小肽活性成分的提取和毒性物质的代谢。

技术实现思路

1、因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种蒲公英复合肽和制备方法及其用途，所述蒲公英复合肽的制备方法，改变传统的中药溶剂提取方法，获得蒲公英复合肽产品能够达到复合肽与蒲公英中活性物质的完美结合，并通过代谢蒲公英中的过敏源及毒性物质减少蒲公英的拮抗现象，产品更安全。

2、为此，本发明提供了如下的技术方案：

3、一种蒲公英复合肽的制备方法，包括如下步骤：

4、(1)、取蒲公英干品，粉碎，加水，进行蒸煮，得到料液混合物；

5、(2)、将所述料液混合物降温，然后加入纤维素酶，保持温度，搅拌酶解；然后降温，加入中性蛋白酶，保持温度，搅拌酶解；升温对酶进行灭活处理，得酶解液；

6、(3)、将所述酶解液降温，添加地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)发酵，保持温度，搅拌发酵，然后升温灭菌，得发酵液。

7、可选的，在步骤(1)中，为加入蒲公英原料重量10-12倍纯化水搅拌均匀,在90℃-95℃条件下，蒸煮3-3.5h，得料液混合物。

8、可选的，在步骤(2)中，将所述料液混合物降温至56-58℃，所述纤维素酶的加入量为蒲公英原料重量的0.75-1.0％，保持温度在56-58℃，搅拌酶解30-45min；所述纤维素酶的酶活为35u/mg；

9、和/或，在步骤(2)中，然后降温至55-57℃，所述中性蛋白酶的加入量为蒲公英原料重量的1-1.5％，保持温度55-57℃，搅拌酶解3.0-4.0h；所述中性蛋白酶的酶活为30u/mg；

10、和/或，在步骤(2)中，所述搅拌酶解中搅拌转速为40-50r/min。

11、可选的，在步骤(3)中，所述地衣芽孢杆菌的添加量为蒲公英原料重量的0.05-0.07％，所述地衣芽孢杆菌的活菌数为3000×108-4000×108cfu/g；

12、和/或，所述搅拌发酵的搅拌转速为35-45r/min。

13、可选的，和/或，在步骤(3)中，将所述酶解液降温至35℃-37℃；

14、和/或，在步骤(3)中，搅拌发酵5-5.5h；

15、和/或，在步骤(3)中，所述升温灭菌的条件为升温至90℃-95℃灭活10-15min。

16、可选的，还包括如下步骤：

17、(4)、将所述发酵液降温，调ph至酸性，边搅拌边输入净化空气，进行生物合成,得到的合成液进行纯化，浓缩。

18、可选的，在步骤(4)中，将所述发酵液降温至38-39℃，调ph至3-3.5，边搅拌边输送净化空气，进行生物合成1.5-2.0h；

19、和/或，所述纯化步骤中，采用三相离心机离心纯化，转速保持16000-18000r/min，纯化完成为止。

20、可选的，在步骤(4)中，采用柠檬酸调ph；

21、和/或，所述边搅拌边输送净化空气步骤中的搅拌速度为22-24r/min。

22、一种由所述的蒲公英复合肽的制备方法制备得到的蒲公英复合肽。

23、所述的蒲公英复合肽在制备饲料添加剂、营养配方食品、保健品、特医食品或药品中的用途。

24、本发明技术方案，具有如下优点：

25、1.本发明提供的一种蒲公英复合肽的制备方法，包括如下步骤：(1)、取蒲公英干品，粉碎，加水，进行蒸煮，得到料液混合物；(2)、将所述料液混合物降温，然后加入纤维素酶，保持温度，搅拌酶解；然后降温，加入中性蛋白酶，保持温度，搅拌酶解；升温对酶进行灭活处理，得酶解液；(3)将所述酶解液降温，添加地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)发酵，保持温度，搅拌发酵，然后升温灭菌，得发酵液；上述方法中，首先，对料液混合物用纤维素酶降解纤维素，为提高收率以及产品创造条件；然后添加中性蛋白酶，控制复合肽分子量，提高了产品收率；再采用地衣芽孢杆菌发酵，能代谢蒲公英中的过敏源及毒性物质，使产品更质量安全，动物机体更容易吸收利用，充分满足食品、保健品和药品原料的要求。综上，本发明改变了以往简单的中药分离筛选技术从中药中分离筛选活性物质的方式，采用酶-菌协同的新中药生物转化方式，能彻底降解分离中药活性物质，而且通过发酵重塑了中药复合肽以及其他活性物质，使得可以在中药活性物质的代谢物中提取活性物质，不但获得了小分子肽，而且保留了蒲公英醇、蒲公英素、胆碱等活性物质，动物机体容易吸收利用，收率更高，且能彻底降解分离中药毒性物质和过敏源，产品无毒性。

26、进一步的，上述方法生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质，不使用酒精丙酮等有机溶剂，安全，无毒副作用，其产品口感好，无异味，可广泛应用于食品、保健品、药品等领域。

27、进一步的，上述方法反应条件温和，操作简便，进一步提高了产品的安全性和利用价值。

28、进一步的，上述方法获得的蒲公英复合肽能完全溶于水，能更方便的添加在食品、固体饮料、液态饮品，更适合作为药品使用。

29、2.本发明提供的一种蒲公英复合肽的制备方法，还包括如下步骤：(4)、将所述发酵液降温，调ph至酸性，边搅拌边输入净化空气，进行生物合成,得到的合成液进行纯化，浓缩；采用肠胃最适合温度和ph值利用小肽的螯合作用实行生物合成，使本品食用后能快速进入细胞，更快的参与生命运动。