一种PGAM1蛋白Ser23位点的磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用

本申请涉及生物，尤其涉及一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1，pgam1)是作为糖酵解通路的重要功能酶，其功能主要是催化3—磷酸甘油酸(3-phosphoglycerate，3-pg)转化生成2—磷酸甘油酸(2-phosphoglycerate，2-pg)，以促进葡萄糖代谢和能量生成，并协调丝氨酸生成和磷酸戊糖途径。pgam1主要在肝、肾、脑中表达，并且在乳腺癌、结直肠癌、肺癌、前列腺癌、口腔鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌等多种人类肿瘤中异常表达，该异常表达可以促进癌细胞的增殖和转移，导致其预后不良。

2、磷酸化、泛素化、苏木化等翻译后修饰在细胞信号通路介导的生理和病理过程中具有重要调控作用。pgam1在有氧糖酵解及细胞代谢重编程发挥重要作用，因而进一步研究pgam1蛋白的翻译后修饰具有重要意义。基于前期研究发现，pgam1氨基酸序列中的第23位点丝氨酸(ser23)是其蛋白磷酸化修饰的位点，在调控pgam1蛋白功能及上下游信号传导中可能具有重要的作用。

3、抗体是蛋白质功能研究的重要工具，已被广泛用于自身免疫病、感染性疾病、肿瘤等发病机制研究、疾病诊断、临床治疗等方面，然而目前尚无特异性磷酸化pgam1 s23抗体可用，这严重阻碍了pgam1蛋白功能解析及相关分子机制研究。而抗体的特异性主要取决于抗原，因此如何提供一种特异性的pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原。

技术实现思路

1、本申请提供了一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用，以填补现有技术中暂无特异性的pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原的空白。

2、第一方面，本申请提供了一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原，所述磷酸化抗原为磷酸化多肽，所述磷酸化多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示，其中，所述磷酸化多肽的磷酸化位点为丝氨酸。

3、可选的，所述磷酸化多肽的磷酸化位点为pgam1蛋白的第23号位点。

4、第二方面，本申请提供了一种制备第一方面所述的磷酸化抗原的方法，所述方法包括：

5、以pgam1蛋白的第23号位点为基点，在如seq id no.2所示的所述pgam1蛋白的氨基酸序列上分别沿上游或下游方向选择预设数量的氨基酸基团，得到多组预设抗原；

6、采用免疫表位数据库对多组所述预设抗原进行分析和筛选，得到最佳抗原；

7、对所述最佳抗原进行磷酸化，得到磷酸化多肽；

8、对所述磷酸化多肽进行蛋白偶联，得到磷酸化抗原；

9、其中，所述预设数量为2～5。

10、第四方面，本申请提供了一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原的应用，所述应用包括将第一方面所述的磷酸化抗原用于制备肿瘤、自身免疫性疾病、心血管系统疾病相关药剂中，其中，所述相关药剂包括诊断、治疗和预后判定所用的药物制剂。

11、第五方面，本申请提供了本申请提供了一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗体，所述磷酸化抗体是由第一方面所述的磷酸化抗原经过免疫动物机体而得到的。

12、第六方面，本申请提供了一种制备第四方面所述的磷酸化抗体的方法，所述方法包括：

13、采用第一方面所述的磷酸化抗原对动物模型进行免疫至预设抗血清效价，得到抗血清样本；

14、根据如seq id no.2所示的pgam1蛋白的氨基酸序列分别合成磷酸化多肽：nrfs(p)gwy和非磷酸化多肽：nrfsgwy，后进行蛋白偶联，得到磷酸化抗原和非磷酸化抗原；

15、分别采用所述磷酸化抗原和所述非磷酸化抗原对所述抗血清样本进行纯化，得到磷酸化抗体。

16、可选的，所述预设抗血清效价≥1:32000。

17、可选的，所述免疫的次数≥4次。

18、可选的，所述分别采用所述磷酸化抗原和所述非磷酸化抗原对所述抗血清样本进行纯化，得到磷酸化抗体，包括步骤：

19、采用所述磷酸化抗原对所述抗血清样本进一次亲和纯化，得到粗级磷酸化抗体；

20、采用所述非磷酸化抗原对所述粗级磷酸化抗体进二次亲和纯化，得到磷酸化抗体。

21、第七方面，本申请提供了一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗的应用，所述应用包括将第五方面所述的磷酸化抗体用于制备肿瘤、自身免疫性疾病、心血管系统疾病相关药剂中，其中，所述相关药剂包括诊断、治疗和预后判定所用的药物制剂。

22、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：

23、本申请实施例提供的一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原，针对pgam1蛋白的氨基酸序列的磷酸化分析，并结合pgam1蛋白的特异性分析，可以明确在pgam1蛋白的第23号位点是磷酸化修饰的关键位点，同时该位点在调控pgam1蛋白功能及上下游信号传导中可能具有重要的作用，因此针对该位点进行特异性设计，可以得到pgam1蛋白的特异性磷酸化抗原，同时细化该磷酸化抗原的具体氨基酸序列，可以通过该磷酸化抗原制备出特异性好的磷酸化抗体，有助于研究pgam1蛋白特定位点磷酸化修饰在特定生物学事件或疾病发生发展过程中的作用机制，并且还能为临床疾病的诊断与治疗提供潜在的作用靶点，还可以提高利用ihc、elisa等免疫学相关实验检测pgam1蛋白的磷酸化水平的准确性；同时该磷酸化抗原还可以用于探讨pgam1与自身免疫病、感染性疾病、肿瘤等疾病的关系，在疾病诊断、治疗及预后判定等方面具有广泛的应用前景；因此本申请提供的磷酸化抗原填补了现有技术中暂无特异性的pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原的空白。

技术特征：

1.一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原，其特征在于，所述磷酸化抗原为磷酸化多肽，所述磷酸化多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示，其中，所述磷酸化多肽的磷酸化位点为丝氨酸。

2.根据权利要求1所述的磷酸化抗原，其特性在于，所述磷酸化多肽的磷酸化位点为pgam1蛋白的第23号位点。

3.一种制备如权利要求1或2所述的磷酸化抗原的方法，其特征在于，所述方法包括：

4.一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗原的应用，其特征在于，所述应用包括将权利要求1或2所述的磷酸化抗原用于制备肿瘤、自身免疫性疾病、心血管系统疾病相关药剂中，其中，所述相关药剂包括诊断、治疗和预后判定所用的药物制剂。

5.一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗体，其特征在于，所述磷酸化抗体是由权利要求1或2所述的磷酸化抗原经过免疫动物机体而得到的。

6.一种制备如权利要求5所述的磷酸化抗体的方法，其特征在于，所述方法包括：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述预设抗血清效价≥1:32000。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述免疫的次数≥4次。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述分别采用所述磷酸化抗原和所述非磷酸化抗原对所述抗血清样本进行纯化，得到磷酸化抗体，包括步骤：

10.一种pgam1蛋白ser23位点的磷酸化抗的应用，其特征在于，所述应用包括将权利要求5所述的磷酸化抗体用于制备肿瘤、自身免疫性疾病、心血管系统疾病相关药剂中，其中，所述相关药剂包括诊断、治疗和预后判定所用的药物制剂。

技术总结本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种PGAM1蛋白Ser23位点的磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用；所述磷酸化抗原为磷酸化多肽，磷酸化多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，磷酸化多肽的磷酸化位点为丝氨酸；可以通过该磷酸化抗原制备出特异性好的磷酸化抗体，因此本申请提供的磷酸化抗原填补了现有技术中暂无特异性的PGAM1蛋白Ser23位点的磷酸化抗原的空白。技术研发人员：王从义,杨春良,荣善杰,孙飞,骆佳卉,张述,余其林受保护的技术使用者：华中科技大学同济医学院附属同济医院技术研发日：技术公布日：2024/6/18