普利斯特氏菌及其应用的制作方法

本发明属于酿酒微生物，具体涉及同时产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚的普利斯特氏菌及其应用。

背景技术：

1、中国白酒因其独特的口感与香气被誉为世界六大蒸馏酒之一，而浓香型白酒占有举足轻重的地位。众所周知，酒中的基本组分一致，主要是乙醇和水，约占总量的98％，剩余2％的组分才是形成白酒独特风格的色谱骨架成分和微量香气物质。目前白酒中香气组分已检出470多种，主要包含酯类、有机酸、醇类、醛酮化合物、芳香族化合物等物质，大部分来源于酿酒微生物发酵。它们的含量虽然极少，但却决定着白酒的风格特征。

2、其中，3-羟基丁酸乙酯呈果香、葡萄香、青香和白酒似香气，是一种在葡萄酒和响尾草中发现的香味化合物。

3、2，3-二氢苯并呋喃俗称香豆满，是一种精细化工原料，广泛应用于三环类化合物的合成，同时还是合成一些重要药物的中间原料，如抗肿瘤制剂苯并呋喃磺酰脲类化合物、基质金属蛋白酶抑制剂芳代亚磺酰胺基异肟羟酸等，因此2，3-二氢苯并呋喃作为医药中间体有着较好的市场前景。目前2，3-二氢苯并呋喃都是通过化学合成方法进行制备，具体的合成方法可分为三类：(1)苯环上邻位双取代环合法、(2)苯并呋喃氢化法；(3)苯环上单取代环合法。化学合成方法采用的溶剂种类多，且有些溶剂有毒，不利于环保，产率也较低。

4、4-乙烯基愈创木酚呈强烈香辛料、丁香和发酵似香气，有炒花生气息，具有挥发性，有独特发酵香气且嗅觉识别度较高，是酱油、白酒、葡萄酒和啤酒中的重要风味物质，也是这些发酵产品全面风味评价必不可缺的特色成分。同时，在日化、医药以及香精等行业也是不可多得的高档香料，其市场价值约为阿魏酸的40倍左右，并且可以进一步转化为乙基愈创木酚、香草醛、香草醇和香草酸等各种高附加值的化合物。近年来，随着天然产品的流行，使得人们对香气成分的兴趣日益增加，4-乙烯基衍生物被监管机构批准为调味剂和肉类产品的保存剂。除了具有作为香料和添加剂的商业价值外，4-乙烯基愈创木酚由于其抗氧化活性和抗癌活性在医药制品领域，如用于眼科领域，作为隐形眼镜溶液和滴眼剂，也存在潜在的药用价值。近年来，全球市场对天然芳香化合物的需求逐步增长，所以，寻找安全高效的天然4-乙烯基愈创木酚的生物合成微生物是很有必要的。

5、目前，关于能同时产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚功能微生物菌种种类较少，鲜少有报道，因此，还需要进一步开发。

技术实现思路

1、本技术的目的在于提供同时产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚的普利斯特氏菌，旨在现有报道中关于能同时产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚等香味物质的功能微生物种类较少，需要开发的问题。

2、为实现上述申请目的，本技术采用的技术方案如下：

3、第一方面，本发明提供产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚的普利斯特氏菌(priestia sp.)，保藏编号为cgmcc no.29032。保藏时间为2023年11月16日，保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101。分类命名为普利斯特氏菌(priestia sp.)。

4、其中，上述普利斯特氏菌的16s rdna的核苷酸序列如seq id no：1所示。

5、seq id no:1普利斯特氏菌的16s rdna核苷酸序列

6、ggggaatgctacagctagacatgcagtcgagcgaactgattagaagcttgcttctatgacgttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggcaacctgcctgtaagactgggataacttcgggaaaccgaagctaataccggataggatcttctccttcatgggagatgattgaaagatggtttcggctatcacttacagatgggcccgcggtgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaacgatgcatagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttagggaagaacaagtacgagagtaactgctcgtaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggcggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagagaaaagcggaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcggctttttggtctgtaactgacgctgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgacaactctagagatagagcgttccccttcgggggacagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccagcatttagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggatggtacaaagggctgcaagaccgcgaggtcaagccaatcccataaaaccattctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtggagtaaccgtaaggagctagcctacctatagagttccccccg。

7、其中，上述普利斯特氏菌的细胞学特征为：球状，在na培养基上菌落为米白色，不透明，边缘整齐，表面湿润光滑。

8、所述na培养基成成包括：牛肉浸膏3份、蛋白胨5份、葡萄糖2.5份，1000ml蒸馏水，naoh调节ph至7.0。

9、其中，上述普利斯特氏菌的生物学特征为：能够利用丙三醇、l-阿拉伯糖、d-核糖、d-半乳糖、d-葡萄糖、d-果糖、肌醇、d-甘露醇、甲基-α-d-吡喃甘露糖苷、甲基-α-d-吡喃葡萄糖苷、n-乙酰葡萄糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶灵(柠檬酸铁)、水杨苷、d-纤维二糖、d-麦芽糖、d-乳糖、d-蜜二糖、d-蔗糖、d-海藻糖、菊粉、d-松三糖、d-棉子糖、淀粉、糖原、d-龙胆二糖、d-土伦糖。

10、不能利用赤藻糖醇、d-阿拉伯糖、d-木糖、l-木糖、d-核糖醇、甲基-β-d-吡喃木糖苷、d-甘露糖、l-山梨糖、l-鼠李糖、卫矛醇、山梨醇、d-来苏糖、d-塔格糖、d-岩藻糖、l-岩藻糖、d-阿拉伯醇、l-阿拉伯醇、葡萄糖酸钾、2-酮基-葡萄糖酸盐、5-酮基-葡萄糖酸盐。

11、其中，上述普利斯特氏菌产3-羟基丁酸乙酯的能力达到1.53ppm。

12、其中，上述普利斯特氏菌产2，3-二氢苯并呋喃的能力达到0.38ppm。

13、其中，上述普利斯特氏菌产4-乙烯基愈创木酚的能力达到0.29ppm。

14、第二方面，本发明提供上述普利斯特氏菌在产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚方面的应用。

15、第三方面，本发明提供上述普利斯特氏菌在蒸馏酒、发酵酒酿造中的应用。

16、其中，所述蒸馏酒为白酒、白兰地、威士忌、伏特加、朗姆酒、杜松子酒、龙舌兰或水果蒸馏酒中的至少一种。

17、其中，所述发酵酒为黄酒、啤酒、葡萄酒、果酒、清酒或奶酒中的至少一种。

18、优选地，所述白酒包括浓香型、酱香型、清香型或兼香型中至少一种。

19、第四方面，本发明提供上述普利斯特氏菌在发酵食品、香料、添加剂、医用药制备中的应用。

20、第五方面，本发明提供一种菌剂，其含有上述普利斯特氏菌的发酵液、种子液或菌体。

21、有益效果：本发明从宜宾五粮液股份有限公司浓香型白酒车间环境中分离筛选出一株普利斯特氏菌wmcc10082，保藏编号为cgmcc no.29032，其能够同时产3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚。因此，在利用3-羟基丁酸乙酯、2，3-二氢苯并呋喃、4-乙烯基愈创木酚增香的酿酒领域、发酵食品、香料、添加剂，及其利用4-乙烯基愈创木酚具有抗氧化活性和抗癌活性的医用药领域均有广阔的应用空间。