一种微载体培养用玻璃容器硅化处理方法及应用与流程

本发明涉及微载体培养，尤其涉及一种微载体培养用玻璃容器硅化处理方法及应用。

背景技术：

1、微载体培养是指微载体以微小颗粒作为细胞贴附的载体，可提供相当大的贴附面积，由于载体体积很小，比重较轻，在轻度搅拌下即可使得细胞悬浮在培养液内，最终能够使细胞在载体表面繁殖成单层的一种细胞培养技术。目前，在微载体培养中的还面临一些挑战和机遇。其一，是细胞的附着性和细胞生长的控制。为了实现高产量和高质量的生物制品，需要优化细胞附着和生长的条件，确保细胞能够均匀地附着在载体上，并进行正常的生长和分裂。此外，不同的载体材料和结构对细胞的附着和生长有着不同的影响。因此，需要对载体进行筛选和优化，以提高细胞的附着率和生长速度。目前，小规模研究中大多采用三角摇瓶、磁力旋转瓶和玻璃反应器等玻璃器皿进行工艺优化。由于玻璃器皿与球状微载体中存在吸附作用，影响细胞生长，所以在玻璃容器进行细胞培养，需要对玻璃容器进行硅化处理。

2、现有一种微载体培养用玻璃容器的硅化处理技术，在通风厨中用二氯二甲基硅烷润湿搅拌瓶和生物反应器罐体内壁10min以上，烘干后自来水冲洗10次以上，去离子水冲洗3次以上，烘干后再用于微载体培养。申请人发现，在该技术方案中，仅采用硅化剂润湿玻璃容器一次再多次洗涤后，一次硅化后的玻璃容器并不能够在微载体培养时重复使用，并且在微载体培养灭菌的过程中存在硅化剂脱落、细胞死亡的风险。因此，如何获得一个重复性好、硅化稳定的玻璃容器变得十分重要。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种重复性好、硅化稳定的微载体培养用玻璃容器硅化处理方法及应用。

2、为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

3、一种微载体培养用玻璃容器硅化处理方法，包括以下步骤：

4、s1，将预处理后的玻璃容器清洗后干燥；

5、s2，将玻璃容器内加入硅化剂溶液浸泡后干燥；

6、s3，重复步骤s2 两次至五次后清洗后干燥。

7、作为对上述技术方案的进一步改进：

8、所述步骤s1中，所述预处理为清洁处理，所述清洁处理包括以下步骤：将玻璃容器浸泡于碱溶液中12～24h。

9、所述碱溶液为0.2～0.5mol/l氢氧化钠溶液。

10、所述步骤s2中，所述硅化剂溶液为六甲基二硅胺烷溶液或二甲基二氯硅烷溶液，所述浸泡时间为5～10min。

11、所述步骤s1或s2或s3中，所述干燥的温度为50～70℃。

12、所述步骤s2或s3在通风橱中进行。

13、作为一个总的发明构思，本发明还提供一种前述微载体培养用玻璃容器硅化处理方法制备得到玻璃容器的在微载体培养中的应用。

14、作为对上述技术方案的进一步改进：

15、所述应用包括以下步骤：

16、a1，将活化后的微载体装填进玻璃容器中进行高压灭菌，加入培养基；

17、a2，将细胞接种到带有灭菌后的微载体玻璃容器中进行细胞培养；

18、a3，细胞培养时间达到预设时间后，更换培养基继续培养，直至达到目标培养时间。

19、所述微载体为球状微载体。

20、所述步骤a2中，灭菌时温度为115～121℃，时间为15～20min。

21、所述步骤a3中，所述细胞培养的温度范围为室温至40℃，培养时的转速为20～50rpm。

22、所述步骤a3中，所述细胞培养的预设时间为4天或6天，所述目标培养时间为8天。

23、与现有技术相比，本发明的优点在于：

24、本发明的一种微载体培养用玻璃容器硅化处理方法，在硅化玻璃容器时，采用了多次硅化-干燥处理，在玻璃容器上的硅化剂附着紧密牢靠，获得的硅化后的玻璃容器能够重复使用，在多次高温灭菌后，硅化剂未脱落，硅化性能依旧稳定。

技术特征：

1.一种微载体培养用玻璃容器硅化处理方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的玻璃容器硅化处理方法，其特征在于：所述步骤s1中，所述预处理为清洁处理，所述清洁处理包括以下步骤：将玻璃容器浸泡于碱溶液中12～24h。

3.根据权利要求2所述的玻璃容器硅化处理方法，其特征在于：所述碱溶液为0.2～0.5mol/l氢氧化钠溶液。

4.根据权利要求1所述的玻璃容器硅化处理方法，其特征在于：所述步骤s2中，所述硅化剂溶液为六甲基二硅胺烷溶液或二甲基二氯硅烷溶液，所述浸泡时间为5～10min。

5.根据权利要求1所述的玻璃容器硅化处理方法，其特征在于：所述步骤s1或s2或s3中，所述干燥的温度为50～70℃。

6.根据权利要求1所述的玻璃容器硅化处理方法，其特征在于：所述步骤s2或s3在通风橱中进行。

7.一种根据权利要求1至6中任一项所述微载体培养用玻璃容器硅化处理方法制备得到玻璃容器的在微载体培养中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述微载体为球状微载体。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述步骤a2中，所述灭菌时温度为115～121℃，时间为15～20min。

技术总结本发明公开了一种微载体培养用玻璃容器硅化处理方法，包括以下步骤：S1，将预处理后的玻璃容器清洗后干燥；S2，将玻璃容器内加入硅化剂溶液浸泡后干燥；S3，重复步骤S2两次至五次后清洗后干燥。本发明在硅化玻璃容器时，采用了多次硅化‑干燥处理，在玻璃容器上的硅化剂附着紧密牢靠，获得的硅化后的玻璃容器能够重复使用，在多次高温灭菌后，硅化剂未脱落，硅化性能依旧稳定。技术研发人员：陈晨,吴正江,颜旭,肖华清,黎陈,杨波受保护的技术使用者：楚天科技股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/5/29