蛋白复合物及其制备方法与流程

本发明属于生物，具体地，本发明涉及一种蛋白复合物，更具体地本发明涉及一种制备蛋白复合物的方法、提高视黄醇结合蛋白免疫原性的方法。

背景技术：

1、视黄醇结合蛋白(retinol-binding protein，rbp)是血液中维生素的转运蛋白，由肝脏合成、广泛分布于血液、脑脊液、尿液及其他体液中。测定视黄醇结合蛋白能早期发现肾小管的功能损害，并能灵敏反映肾近曲小管的损害程度，可作为肾功能早期损害和监护治疗的指标，还可作为肝功能早期损害和监护治疗的指标。

2、临床上对测定不同体液（通常为血液和尿液）中的视黄醇结合蛋白含量有不同的需求，且血液和尿液中该蛋白含量相差十倍以上，检测中对于使用的视黄醇结合蛋白抗体的效价要求极高，而成熟的视黄醇结合蛋白分子量大小仅约20kd，属于典型的小分子量蛋白。本身免疫原性较低，无法通过常规免疫途径制备获得高效价的rbp抗体。

3、因此，亟需制备免疫原性提高的视黄醇结合蛋白，以制备效价较高的rbp抗体。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

2、本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

3、发明人发现，rbp分子量为20kd，是典型的小分子抗原，本身免疫原性不高，导致常规免疫途径制备获得的rbp抗体效价偏低，容易出现漏检和检测灵敏度不够的问题。为了克服这一问题，发明人选择将人视黄醇结合蛋白的n端融合k链；与c端融合e链的ea1蛋白结合形成蛋白复合物，该蛋白复合物在含钙离子的溶液中自组装后形成视黄醇蛋白的蛋白多聚复合物用于免疫。该蛋白多聚复合物能够提升视黄醇结合蛋白局部抗原的浓度且有序的晶格结构在一定程度上提升了视黄醇结合蛋白抗原呈递的效率，视黄醇结合蛋白多聚复合物的免疫原性得到了较大的提升。

4、基于此，本发明的第一个方面，本发明提出了一种蛋白复合物。根据本发明的实施例，所述蛋白复合物包括：视黄醇结合蛋白和s层蛋白；其中，所述视黄醇结合蛋白和所述s层蛋白相连。根据本发明实施例的蛋白复合物能够在含钙离子的溶液中自组装后形成免疫原性提高的蛋白多聚复合物。

5、本发明的第二个方面，本发明提出了一种制备蛋白复合物的方法。根据本发明实施例的方法，所述方法包括：将第一融合蛋白和第二融合蛋白进行结合处理，得到所述蛋白复合物；其中，所述第一融合蛋白包括视黄醇结合蛋白，所述第二融合蛋白包括s层蛋白。根据本发明实施例的方法，能够制备蛋白复合物，该蛋白复合物能够在含钙离子的溶液中自组装后形成免疫原性提高的蛋白多聚复合物。

6、本发明的第三个方面，本发明提出了一种提高视黄醇结合蛋白免疫原性的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将结合处理产物进行稀释处理，以便获得如本发明第一方面所限定的蛋白复合物，所述蛋白复合物为多聚体。根据本发明实施例的方法，能够制备免疫原性提高的视黄醇结合蛋白多聚复合物。

7、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种蛋白复合物，其特征在于，包括视黄醇结合蛋白和s层蛋白；

2.根据权利要求1所述的蛋白复合物，其特征在于，所述视黄醇结合蛋白的n端和所述s层蛋白的c端相连，或者所述视黄醇结合蛋白的c端和所述s层蛋白的n端相连；

3.根据权利要求2所述的蛋白复合物，其特征在于，所述蛋白复合物为多聚体，所述多聚体的分子量不低于113kd。

4.根据权利要求2所述的蛋白复合物，其特征在于，所述蛋白复合物为多聚体，所述蛋白复合物的单体之间通过非共价键相连。

5.根据权利要求1所述的蛋白复合物，其特征在于，所述蛋白复合物进一步包括短肽链，所述视黄醇结合蛋白和所述s层蛋白通过所述短肽链相连；

6.根据权利要求1~5任一项所述的蛋白复合物，其特征在于，所述s层蛋白包括ea1。

7.根据权利要求5所述的蛋白复合物，其特征在于，所述溶液的ph值为7.0~8.0。

8.根据权利要求5所述的蛋白复合物，其特征在于，所述第一肽链选自k链或e链，所述第二肽链选自e链或k链；

9.根据权利要求2所述的蛋白复合物，其特征在于，所述蛋白复合物的单体具有如seqid no:3所示的氨基酸序列。

10.一种制备权利要求1~9任一项所述的蛋白复合物的方法，其特征在于，包括：

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第一融合蛋白包括第一肽链，所述第二融合蛋白包括第二肽链；

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述结合处理是通过将所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白在质量比为1:1的条件下进行；

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，进一步包括：将结合处理产物进行稀释处理，得到所述蛋白复合物，所述蛋白复合物为多聚体。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述稀释处理的产物浓度为0.3mg/ml~0.8mg/ml。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述稀释处理中的稀释溶液是由含有cacl2和dtt的pbs溶液构成，所述稀释处理的倍数为8~12倍，所述稀释处理的温度为3℃~5℃，所述cacl2在pbs溶液中的浓度为8~12mm，所述dtt在pbs溶液中的浓度为0.5~2mm，所述稀释处理的时间为12~20h。

16.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，在所述稀释处理之前，进一步包括将结合处理产物进行浓缩处理。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述浓缩处理的产物浓度为3mg/ml~8mg/ml。

18.一种提高视黄醇结合蛋白免疫原性的方法，其特征在于，包括：

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述结合处理产物是通过将第一融合蛋白与第二融合蛋白进行结合处理获得的；

20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述第一融合蛋白包括第一肽链，所述第二融合蛋白包括第二肽链；

21.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述结合处理是通过将所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白在质量比为1:1的条件下进行；

22.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述稀释处理的产物浓度为0.3mg/ml~0.8mg/ml。

23.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述稀释处理中的稀释溶液是由含有cacl2和dtt的pbs溶液构成，所述稀释处理的倍数为8~12倍，所述稀释处理的温度为3℃~5℃，所述cacl2在pbs溶液中的浓度为8~12mm，所述dtt在pbs溶液中的浓度为0.5~2mm，所述稀释处理的时间为12~20h。

24.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，在所述稀释处理之前，进一步包括将结合处理产物进行浓缩处理。

25.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，所述浓缩处理的产物浓度为3mg/ml~8mg/ml。

技术总结本发明属于生物技术领域，本发明公开了一种蛋白复合物及其制备方法。所述蛋白复合物包括视黄醇结合蛋白和S层蛋白；其中，所述视黄醇结合蛋白和所述S层蛋白相连。本发明的蛋白复合物可在含钙离子的溶液中自组装后形成用于免疫的蛋白多聚复合物。该蛋白多聚复合物提升了视黄醇结合蛋白局部抗原的浓度且有序的晶格结构提升了视黄醇结合蛋白抗原呈递的效率，视黄醇结合蛋白多聚复合物的免疫原性得到了较大的提升。技术研发人员：马鑫,郑春杨,申奥受保护的技术使用者：北京春雷杰创生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/13