液相色谱-串联质谱法检测牙膏中奥拉氟含量的检测方法与流程

本发明涉及液相色谱检测方法，特别涉及一种液相色谱-串联质谱法检测牙膏中奥拉氟含量的检测方法。

背景技术：

1、目前市面上虽然已经有《使用奥拉氟作为氟源的口腔护理产品的可溶氟检测》的标准，该标准是采用氢氧化钠溶液提取，氟离子作为外标物，采用离子色谱法进行检测产品中的氟离子（f-）含量，但该方法并不能鉴别所检测到的氟源为无机氟还是奥拉氟。除此以外，市面上也没有直接检测牙膏中是否含有奥拉氟这种有机物（c27h60f2n2o3）的方法或标准，对市面上标称添加奥拉氟的儿童牙膏无法有效鉴别是否添加了奥拉氟。

2、因此，急需建立有机奥拉氟的鉴别及定量方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种液相色谱-串联质谱法检测牙膏中奥拉氟含量的检测方法，采用液相色谱-串联质谱建立了含氟防龋牙膏中有机物奥拉氟以及原材料奥拉氟纯度分析的检测方法，且可采用外标法或内标法的方式对奥拉氟进行定量分析。

2、为实现以上目的，本技术方案提供了一种液相色谱-串联质谱法检测牙膏中奥拉氟含量的检测方法，包括以下步骤：

3、获取待测牙膏；

4、利用水溶解待测牙膏后加入甲醇稀释得到待测溶液；

5、取待测溶液置于液相色谱仪中进行检测，其中液相色谱仪的色谱条件为：c4色谱柱，流动相选择为：a相为0.1%甲酸甲醇以及b相为乙腈的组合，或者a相为0.1%甲酸甲醇以及b相为水的组合；洗脱方式为：等度或者梯度洗脱。

6、需要说明的是，如背景技术所述，目前市面上对牙膏中含氟物质的检测均是以无机氟为基准，采用离子计或者离子色谱法检测含氟防龋牙膏膏体中可溶氟或游离氟量，或者采用气相色谱仪检测总氟量，但是此类检测方法检测氟离子（f-）浓度并不能鉴别其中的氟是氟化钠、单氟磷酸钠等无机氟还是奥拉氟有机氟。另外，奥拉氟不易挥发，不适合采用现有技术的气相色谱或气相色谱质谱进行检测，且由于奥拉氟缺少共轭体系或刚性的平面构型等特征基团，导致其在液相色谱-紫外或荧光下无吸收峰。

7、如图1所示，图1中的化学式对应的是奥拉氟这种有机物（c27h60f2n2o3），可以看出该化合物有较长的疏水基团（长链烷烃），又有3个亲水基团羟基，在普通c18柱上具有强保留而无法洗脱，故本方案在选择色谱柱时需根据其结构特征进行选择并优化。

8、在一些实施例中，本方案不仅可以定性检测奥拉氟，还可以定量检测奥拉氟。

9、当本方案仅用于定性检测奥拉氟时，通过液相色谱仪得到的试样色谱图的保留时间以及特征离子同奥拉氟标准品的保留时间以及特征离子进行比对实现定性。在一些实施例中，设定试样色谱图的保留时间和奥拉氟标准品的保留时间的相对偏差不大于5%，试样色谱图中的特征离子的相对丰度和奥拉氟标准品的相对丰度一致，试样色谱图的特征离子的相对丰度偏差不超过最大允许偏差，则判断待测牙膏中含有奥拉氟。

10、具体的，试样色谱图的特征离子的相对丰度偏差的最大允许偏差如下表1所示：

11、表1 试样色谱图的特征离子的相对丰度偏差的最大允许偏差

12、。

13、当本方案用于定量检测奥拉氟时，本方案可采用外标法或者内标法进行定量。当本方案采用外标法定量检测奥拉氟时，取奥拉氟标准品利用甲醇溶液溶解以得到不同浓度的奥拉氟标准品溶液，取奥拉氟标准品溶液在相同的色谱以及质谱条件下进行检测，基于检测结果绘制标准物质浓度-响应强度外标法曲线，其中标准物质浓度-响应强度外标法曲线记录奥拉氟浓度同响应强度的关系，根据待测溶液在液相色谱仪中的响应强度基于标准物质浓度-响应强度外标法曲线获取奥拉氟的含量。

14、具体的，当采用外标法定量检测奥拉氟时，在检测待测牙膏时，在聚乙烯塑料离心管中加入约1g~2g待测的牙膏膏体，加入超纯水溶解定容至10~50 ml，制备成样品处理液a，随后取100~200 μl样品处理液a置于聚乙烯塑料容量瓶中，用甲醇定容至一定体积进行稀释，上级分析。

15、在制备标准物质浓度-响应强度外标法曲线时，用甲醇溶解奥拉氟标准品，配制成1000 mg/l标准储备液c，移取一定体积标准储备液c于容量瓶配制成一定浓度的中间液d，移取不同体积中间液d分别配置成浓度分别为10~1000 μg/l的奥拉氟标准品溶液，上机分析。

16、当然，需要确保检测待测牙膏和标准物质浓度-响应强度外标法曲线的液相色谱条件相同。

17、当本方案采用内标法定量检测奥拉氟时，用水或者甲醇溶液溶解奥拉氟-d8内标物配置奥拉氟内标物溶液，取奥拉氟标准品利用甲醇溶液溶解得到奥拉氟标准品溶液，混合奥拉氟内标物溶液和奥拉氟标准品溶液配置得到不同浓度的奥拉氟内标准品溶液，取奥拉氟内标准品溶液在相同的色谱和质谱条件下进行检测，基于检测结果以及相对校正因子绘制浓度比-响应强度比曲线；利用水溶解待测牙膏后加入甲醇稀释后，加入奥拉氟-d8内标物后得到待测溶液，根据待测溶液在液相色谱仪中的浓度和浓度比-响应强度比曲线获取奥拉氟的含量。

18、关于本方案的奥拉氟-d8内标物，奥拉氟-d8指的是奥拉氟的一种氘代同位素标记物，具体的化学式如下所示：

19、；

20、具体的，奥拉氟的含量的计算公式如下：

21、；

22、其中x为奥拉氟中的氟的含量，%；c为测量得到的奥拉氟的浓度，μg/l；f为内标法的相对校正因子，f为稀释倍数，v为最终定容体积，ml；38/498.5为奥拉氟中2个氟的折算系数，m为待测牙膏的膏体质量，g。

23、具体的，当采用内标法定量检测奥拉氟时，在检测待测牙膏时，在聚乙烯塑料离心管中加入约1g~2g牙膏膏体，加入超纯水溶解定容至10~50 ml，制备成样品处理液a，随后取100~200 μl样品处理液a置于聚乙烯塑料容量瓶中，用甲醇定容至一定体积进行稀释，往稀释后的溶液中加入内标物d8-奥拉氟并摇匀混合，制备成中间处理样品b，取0~50 μl中间处理样品b置于聚乙烯塑料容量瓶中利用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.22 μm尼龙滤膜过滤后，待上样分析。

24、在制备浓度比-响应强度比曲线时，用甲醇或水溶解奥拉氟-d8内标物质配制成浓度1000 mg/l的标准储备液e，用甲醇溶解奥拉氟标准品配制成1000 mg/l标准储备液c，分别取标准储备液c、标准储备液e置于容量瓶配制成一定浓度的中间液f，取不同体积中间液f，配置成奥拉氟和奥拉氟-d8浓度分别为10~1000 μg/l的标准使用液，上机分析。

25、当然，需要确保检测待测牙膏和制需要确保检测待测牙膏和制备物质浓度-响应强度外标法曲线的色谱和质谱条件相同。

26、另外，需要说明的是，当待测牙膏中的奥拉氟超过了线性范围，则需要对待测溶液进行进一步地稀释后，确保待测溶液中的奥拉氟含量在校正曲线范围内10 ~1000μg/l内。

27、另外，在一些实施例中，液相色谱仪的色谱条件中的c4色谱柱参考但不限于50 mm×2.1mm, 3μm，流动相选择为：a相为0.1%甲酸甲醇以及b相为乙腈的组合，或者a相为0.1%甲酸甲醇以及b相为水的组合；洗脱方式为：等度或者梯度洗脱，流速为：0.2~0.6 ml/min，柱温为：30~40 ℃。

28、具体的，当流动相为a相为0.1%甲酸甲醇以及b相为乙腈的组合式，本方案优选为70~90%的a相0.1%甲酸甲醇和30~10%的b相乙腈；当流动相为a相为0.1%甲酸甲醇以及b相为水时，本方案优选为70～90%的a相0.1%甲酸甲醇和30～10%的b相水。

29、另外，在一具体实施例中，参考梯度条件为0 min-1 min:流动相的a相为60%-90%；1.1 min-3.5 min,流动相的a相为90%；3.6 min-5.5 min，流动相的a相为60%。

30、在另一些实施例中，液相色谱仪的质谱条件为液相色谱-串联质谱仪，离子源esi+，离子源电压5500v，气帘气35 psi，离子源温度500 ℃，喷雾气gs1为50 psi, 辅助加热气gs2为50 psi。

31、关于取待测溶液置于液相色谱仪中进行检测的质谱参数如下表2所示：

32、表2 质谱参数

33、。

34、第二方面，本方案提供了一种液相色谱-串联质谱法检测牙膏中奥拉氟含量的检测方法的应用，应用于检测牙膏中的奥拉氟的含量。

35、相较于现有技术，本技术方案具有以下特点和有益效果：

36、本方案通过液相色谱检测法检测牙膏膏体中的有机物奥拉氟，采用外标法或内标法的方式进行定量分析，不仅能通过特征离子实现对奥拉氟进行准确的定性识别，还可采用外标法或内标法的方式进行定量分析。